朱长军
- 作品数：43 被引量：28H指数：4
- 供职机构：天津师范大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金教育部“新世纪优秀人才支持计划”天津市应用基础与前沿技术研究计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 慢病毒介导KIF4A稳定诱导敲降MCF7细胞株的建立
- 2022年
- 为了构建驱动蛋白KIF4A基因稳定诱导敲降细胞株Tet-shKIF4A/MCF7,应用Tet诱导基因敲降慢病毒载体系统,将慢病毒载体质粒Tet-plko-puro-shKIF4A与包装质粒psPAX2和pMD2.G共转染至293T细胞中,产生慢病毒颗粒.使用慢病毒感染MCF7细胞,用嘌呤霉素筛选出稳定诱导敲降KIF4A细胞株Tet-shKIF4A/MCF7.通过免疫印迹方法检测Tet-shKIF4A/MCF7细胞中KIF4A蛋白的表达水平,对诱导敲降KIF4A的四环素药物的浓度和敲降时间进行优化.应用免疫荧光染色的方法检测对照细胞和Tet-shKIF4A/MCF7细胞内的KIF4A的表达以及有丝分裂细胞形态的变化.结果表明,本研究成功构建了KIF4A基因稳定诱导敲降细胞株Tet-shKIF4A/MCF7,诱导敲降KIF4A的四环素药物最佳质量浓度为50μg/mL,最佳诱导时间为36 h.本研究为深入探究KIF4A在细胞生命活动中的功能以及细胞周期的分子作用机制提供了重要实验材料.
- 闫鲁霞程蓓蓓周之春朱长军
- 关键词：慢病毒
- 驱动蛋白分子KIF18A的结构与功能研究进展被引量：1
- 2020年
- KIF18A是驱动蛋白kinesin-8家族中的一员,在细胞内能够依靠水解ATP释放的能量,以微管为轨道向正极方向运动.同时,KIF18A定位在微管正极末端,可调控微管的动态不稳定性,发挥类似于微管解聚酶的活性.在有丝分裂过程中,KIF18A能够调控纺锤体微管动力学和染色体振幅,对有丝分裂期染色体及时完成整列、维持基因组稳定和顺利完成有丝分裂具有关键作用.本文对KIF18A蛋白的分子结构、胞内定位、细胞周期调控功能及其与肿瘤发生、发展的关系等方面进行了详细阐述.
- 朱长军周之春
- 关键词：驱动蛋白细胞有丝分裂肿瘤发生
- 染色体驱动蛋白KIF4A抑制胃癌细胞的迁移运动被引量：3
- 2015年
- 探究染色体驱动蛋白KIF4A与胃癌细胞迁移运动的关系,从而为胃癌临床治疗提供新的治疗靶点。用G418筛选的方法构建了两种细胞株:KIF4A低表达的胃癌SGC细胞株与KIF4A过表达的胃癌SGC细胞株,Western与免疫荧光的验证后,对其分别进行细胞划痕与Transw ell迁移实验检测KIF4A对细胞迁移运动能力的影响。成功构建了KIF4A低表达的SGC细胞株(SGC-sh KIF4A)与KIF4A过表达的细胞株(SGC-KIF4A),在KIF4A低表达的SGC细胞株中细胞的迁移速率增加,在KIF4A过表达的细胞株中细胞的迁移速率减慢。染色体驱动蛋白KIF4A抑制胃癌细胞的迁移运动能力,为进一步研究KIF4A与胃癌转移的机制奠定基础。
- 胡晓晴梁爽爽冀美超朱长军潘丽娜
- 关键词：驱动蛋白胃癌迁移
- 驱动蛋白分子Kif14细胞内中小体定位的研究
- 2016年
- 为了探讨决定人体驱动蛋白分子Kif14在细胞有丝分裂末期时定位于细胞中小体的功能域,构建了驱动蛋白分子Kif14各功能域的绿色荧光蛋白(GFP)真核细胞表达质粒,分别转染于人体子宫颈癌细胞He La中.应用聚丙烯酰氨凝胶电泳和免疫印迹法(Western Blot)检测各蛋白的表达情况;应用免疫荧光染色法(immunofluorescence)分别对微管蛋白(Tubulin)、着丝粒相关蛋白(CREST)和DNA染色,荧光显微镜下观察各绿色荧光融合蛋白在有丝分裂末期的亚细胞定位.结果发现,细胞有丝分裂末期,驱动蛋白分子Kif14的N末端GFP融合蛋白定位于中小体(midbody),马达区GFP融合蛋白沿微管分布,杆状尾区GFP融合蛋白以点状分布于细胞质,尾区GFP融合蛋白分布于整个细胞中.由此认为,Kif14驱动蛋白分子的N末端延伸区决定该蛋白分子在细胞有丝分裂末期定位于中小体.
- 马新姜伟朱长军
- 关键词：驱动蛋白
- 有丝分裂纺锤体及中间小体提取方法的研究被引量：1
- 2014年
- 目的 有丝分裂纺锤体和中间小体均是以在细胞有丝分裂进程中出现的微管为结构基础的暂时性结构,对细胞有丝分裂的顺利进行起着至关重要的作用.本研究旨在建立成熟高效的提取细胞内有丝分裂纺锤体和中间小体的方法.方法 通过细胞周期同步化方法使细胞内出现有丝分裂纺锤体或中间小体,运用低渗肿胀和甘油梯度离心的原理提取纺锤体和中间小体.结果 经Western Blot和细胞免疫荧光染色法鉴定,证实提取物中含有有丝分裂纺锤体和中间小体.结论 建立从人宫颈癌细胞Hela中提取有丝分裂纺锤体及中间小体的方法,可为鉴定有丝分裂纺锤体及中间小体上的蛋白分子垫定实验基础,同时也对研究肿瘤细胞有丝分裂的分子调控机制具有重要意义.
- 武岩潘丽娜朱长军姜伟詹启敏童彤
- 关键词：细胞同步化有丝分裂
- 转录因子E2F1及其突变体真核表达质粒的构建及稳定表达细胞株的建立
- 2021年
- 通过细胞转染、药物筛选等方法,获得Flag-E2F1和Flag-E2F1E132稳定表达的HeLa细胞株,用蛋白印迹杂交和细胞免疫荧光染色的方法对其进行鉴定。结果表明,本研究构建了Flag-E2F1和Flag-E2F1E132稳定表达的HeLa细胞株,这些稳筛细胞株对于进一步寻找E2F1的关键下游靶基因十分重要。
- 安娇朱长军王雅洁
- 关键词：定点突变
- LC-DAD/MS/MS检测石地钱中大环双联苄及其微管抑制活性的细胞筛选(英文)
- 2009年
- 目的:研究苔类植物石地钱中具有微管抑制活性的大环双联苄类化合物。方法:在具有微管抑制活性的石地钱提取部分中,利用LC-DAD/MS/MS方法检测其中的大环双联苄,通过制备高效液相分离和纯化此类化合物、光谱方法鉴定其结构,利用稳定表达EYFP-tubulin的HeLa细胞株考察其抑制微管活性。结果:LC-DAD/MS/MS检测到11个双联苄类化合物,经分离纯化得到其中8个并鉴定为:异地前素C(1)、片叶苔素C(2)、新地前素A(3)、地前素A(4)、异片叶苔素C(5)、片叶苔素B(6)、羽苔素E(7)和地前素C(8)。化合物4和8具有显著的抑制微管解聚活性。结论:化合物3-7均为首次从该植物中分得,并首次报道联苄类化合物具有微管抑制活性。
- 高健李霞吕蓓蓓孙斌朱长军娄红祥
- 关键词：微管
- CDK1磷酸化修饰对驱动蛋白Kif18A的ATP酶活性的影响
- 2020年
- 为了探究真核细胞中蛋白激酶CDK1的磷酸化修饰对驱动蛋白分子Kif18A的ATP酶活性的影响,利用昆虫杆状病毒表达系统,在体外表达并纯化Kif18A模拟磷酸化(EE)和非磷酸化(AA)的突变体蛋白(Kif18A-EE,Kif18A-AA).首先构建驱动蛋白Kif18A的杆状病毒表达载体质粒pFast-Bac-FLAG-Kif18A-AA或EE,将其转化到DH10Bac感受态细胞中,通过蓝白斑筛选得到阳性克隆.随后提取杆状病毒基因组,转染昆虫细胞SF9后得到能够表达FLAG-Kif18A突变体蛋白的杆状病毒.扩增病毒后,对病毒感染SF9细胞表达目的蛋白的条件进行优化,最终通过蛋白纯化得到有活性的Kif18A突变体蛋白,并在体外检测纯化蛋白的ATP酶活性.结果显示,Kif18A-EE蛋白的ATP酶活性低于Kif18A-AA蛋白.这一结果表明,CDK1的磷酸化修饰能够降低驱动蛋白Kif18A的ATP酶活性.
- 苏春玉周之春朱长军
- 关键词：CDK1磷酸化修饰驱动蛋白杆状病毒ATP酶活性
- 应用组织芯片技术分析KIF18A在结直肠癌中的表达及其意义
- 2022年
- 目的 驱动蛋白KIF18A是一个参与细胞有丝分裂的关键蛋白。KIF18A在有丝分裂前中期聚集在动粒微管正极末端,调控微管的动态不稳定性,调控染色体整列并保证染色体整列的顺利完成,进而保证有丝分裂的正常进行。KIF18A的异常表达与多种实体瘤的发生发展密切相关,本文研究KIF18A与结直肠癌发生发展的关系。方法 本文使用免疫组织化学染色(IHC)的方法对31例结直肠癌临床组织标本进行染色并结合病例资料进行统计学分析。结果 在不同肿瘤分期、病理分级以及是否存在淋巴转移的结直肠癌组织中,KIF18A蛋白的表达都高于癌旁组织。结论 该研究表明KIF18A是一种结直肠癌诊断的潜在分子标志物。
- 周之春朱长军
- 关键词：结直肠癌
- 驱动蛋白Kif18A多克隆抗体的制备、纯化及免疫特异性检测被引量：1
- 2015年
- 采用标签蛋白诱导表达纯化、蛋白质谱、Western Blot、免疫荧光染色等多种分子生物学与细胞生物学方法,探究了一种制备蛋白特异性多克隆抗体、检测抗体并且运用抗体获得蛋白翻译后修饰信息的实验思路.结果表明,使用这种方法可以高效地得到Kif18A的兔源多克隆抗体.得到的抗体血清可以很好地应用于Western Blot(蛋白免疫印迹)、Co-IP(免疫共沉淀)等分子生物学实验.将抗体血清纯化后可以应用于免疫荧光染色实验,并可以获得良好清晰的实验结果.此外,利用制备出的Kif18A特异性抗体对细胞内源性Kif18A进行Co-IP实验后进行质谱分析,得到了内源性Kif18A蛋白翻译后的修饰信息,为研究Kif18A蛋白的定位与功能奠定了良好的基础.
- 王庐宇朱长军
- 关键词：多克隆抗体蛋白质谱蛋白磷酸化
