苗小青
- 作品数：3 被引量：12H指数：1
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- 重组质粒pcDNA-HA/ΔNp73α转染对人树突状细胞功能的影响被引量：1
- 2015年
- 目的研究转染pcDNA-HA/ΔNp73α重组质粒对树突状细胞(DC)功能的影响。方法采取健康人脐带血,分离单个核细胞,置入含有白介素4(IL-4)和粒-巨细胞集落刺激因子(GM-CSF)的RPMI 1640完全培养基中培养。在培养第5、7天时收获DC细胞,加入FITC-anti-CD1a、PE-anti-CD83抗体,采用流式细胞仪检测CD1a、CD83表达情况。将DC分为正常培养至成熟的DC组(空白对照组)、空载体pcDNA-HA转染的DC组(阴性对照组)、ΔNp73α重组质粒转染的DC组(实验组)。分别在转染24、48、72 h后采用荧光显微镜检测转染效率;转染48 h后收获并提取细胞总RNA,采用RT-PCR检测转染后各组ΔNp73αmRNA表达情况;采用Western blotting检测转染DC的ΔNp73α蛋白表达水平;在收获的各组DC细胞中分别加入PE-anti-主要组织相容性复合体(MHC-Ⅱ)、FITC-anti-CD40、PE-anti-CD80单克隆抗体,流式细胞仪检测CD40、CD80、MHC-Ⅱ表达情况;ELISA检测各组DC细胞白介素12(IL-12)分泌水平。结果 CD1a和CD83在培养第7天的表达水平均高于培养第5天(t=16.62、34.75,P<0.001)。DC于第7天诱导成熟。质粒转染DC后,24 h可见特异性绿色荧光蛋白表达,48 h荧光最强,转染效率为38.2%,在48 h后,绿色荧光的表达逐渐减少。实验组在670 bp处可见阳性条带,为ΔNp73αmRNA阳性表达,而空白对照组和阴性对照组未检测到ΔNp73αmRNA的表达。在实验组中检测到ΔNp73α蛋白的表达,而正常对照组和阴性对照组中未检测到ΔNp73α蛋白的表达。各组CD40、CD80、MHC-Ⅱ表达水平比较,差异有统计学意义(F=12.68、41.18、38.95,P<0.05);其中实验组CD40、CD80、MHC-Ⅱ表达水平均高于空白对照组和阴性对照组(P<0.05)。各组IL-12表达水平比较,差异有统计学意义(F=37.43,P<0.001);其中实验组IL-12表达水平高于空白对照组和阴性对照组(P<0.05)。结论从人脐带血中可成功分离DC;重组质粒pcDNA-HA/ΔNp73α转染DC促进其成熟,将有效提高DC的抗原提�
- 苗小青王阳李淑华艾丽梅张佩
- 关键词：重组质粒树突细胞转染
- ΔNp73α基因转染树突状细胞抗乳腺癌细胞的免疫效应
- 2016年
- 目的:研究ΔNp73α基因转染树突状细胞(DC)诱导的特异性抗乳腺癌免疫效应。方法:人脐带血细胞经GM-CSF、IL-4、TNF-α等细胞因子诱导培养DC,流式细胞仪(FCM)检测DC成熟前后CD1a、CD83的表达变化情况。脂质体法将pc DNA-HA/ΔNp73α转染至DC,经Western blot检测转染情况。转染DC与自体T细胞共培养诱导特异性CTL。MTT法测定T细胞增殖能力;ELISA法检测IFN-γ的分泌水平;LDH释放法检测T细胞对乳腺癌细胞MDA-MB-231的杀伤作用。结果:DC诱导成熟后,CD1a表达约占56%,CD83约占74%,与未成熟DC(CD1a 19%,CD83 13%)比较,差异有显著统计学意义(P<0.01)。Western blot检测到DC-ΔNp73α组有一特异条带表达。DC-ΔNp73α组诱导的特异性CTL对MDA-MB-231杀伤作用高于DC组(P<0.05),而且刺激T细胞增殖能力增强,分泌IFN-γ的水平升高,与空载体DC-pc DNA组及DC组比较有显著统计学意义(P<0.01)。结论:以ΔNp73α转染DC制备的DC疫苗,具有显著诱导CTL杀伤乳腺癌细胞的作用。
- 王阳苗小青李淑华艾丽梅张佩
- 关键词：CTL
- p53表达对老年晚期非小细胞肺癌化疗效果的影响研究被引量：11
- 2015年
- 目的检测老年晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者p53的表达情况,分析其与一线含铂化疗方案治疗NSCLC效果的关系,为NSCLC个体化治疗提供有效依据。方法选取2007年2月—2008年2月辽宁医学院附属第一医院经病理组织学诊断的73例老年晚期NSCLC患者的病理标本,将患者按照化疗方案不同分为吉西他滨(GP)组22例,长春瑞滨(NP)组23例,多烯紫杉醇(TP)组18例,培美曲塞(AP)组10例。GP组给予GP联合顺铂、卡铂化疗,NP组给予NP联合顺铂化疗,TP组给予TP联合顺铂、卡铂化疗,AP组给予AP联合卡铂化疗。采用免疫组化法检测p53表达情况,并采用实体瘤客观疗效评价标准(RECIST)对患者化疗效果进行评价。结果 4组患者性别、年龄、病理类型、临床分期、分化程度、手术方式比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。73例患者中34例(46.6%)p53阳性表达。不同性别、年龄、临床分期、分化程度、手术方式患者p53阳性表达率比较,差异均无统计学意义(P>0.05);不同病理类型患者p53阳性表达率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。p53阳性表达者化疗有效率为23.5%(8/34),低于p53阴性表达者的53.8%(21/39)(χ2=8.742,P=0.004)。不同病理类型化疗有效率比较,差异无统计学意义(χ2=4.588,P=0.332)。不同化疗方案有效率比较,差异无统计学意义(χ2=5.421,P=0.143)。多因素Logistic回归分析结果显示,p53表达为NSCLC患者疗效的影响因素(P<0.05)。Kaplan-Meier生存分析显示,经不同化疗方案治疗后,NSCLC患者p53阳性表达者与p53阴性表达者总生存期(OS)比较,差异有统计学意义(χ2=10.319,P=0.002)。结论 p53阳性表达会影响NSCLC患者接受一线含铂化疗的疗效。
- 王阳张黎黎卢颖苗小青李淑华刘堃张佩
- 关键词：老年人铂化合物
