廖红梅
- 作品数：6 被引量：4H指数：2
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- 肺炎球菌1型荚膜多糖多克隆抗体制备与夹心ELISA法建立及其在多糖浓度测定中的应用
- 2013年
- 目的：利用肺炎球菌1型全菌体制备多克隆抗体，并且利用该抗体建立肺炎1型荚膜多糖夹心酶联免疫吸附分析法（ Enzyme-linked immunosorbent assay ，ELISA），用于检测发酵和纯化过程中的多糖浓度。方法用灭活的1型肺炎链球菌免疫家兔6周，获得高滴度的抗多糖血清，经过亲和层析纯化，获得高纯度的兔抗肺炎1型多糖抗体IgG。以纯化IgG作为包被抗体，加入多糖样品，再以生物素化的抗体作为检测抗体，建立夹心ELISA法检测肺炎1型多糖浓度。确定标准曲线的最佳线性范围，并对该方法进行特异性、准确性和精密度验证。结果兔免疫血清经过双向免疫扩散检测抗体滴度可达1∶32；该方法的线性检测范围为1．56～50 ng/mL；最低检测限为3．13 ng/mL。在标准品中混入其他型别多糖或培养基，回收率分别为102％和108％；该方法批内精密度和批间精密度分别为6．08％和7．01％。结论建立的夹心ELISA方法，其特异性、准确性和精密度均良好，可以特异地检测肺炎球菌1型多糖浓度。
- 刘威廖红梅谢谦黄放邹莎莎马诚江山崔长法
- 关键词：夹心ELISA
- 磷酸铝佐剂吸附率对9V型肺炎球菌荚膜多糖蛋白结合疫苗免疫原性的影响
- :探讨磷酸铝佐剂及其吸附率对9V型肺炎球菌荚膜多糖蛋白结合疫苗免疫原性的影响.方法:磷酸铝佐剂在不同条件下,与9V型肺炎球菌荚膜多糖蛋白结合物进行吸附,吸附率分别为17％,61％和80％,三种制剂经腹腔免疫NIH小鼠,E...
- 杨溢尧刘威廖红梅杜游王凯葛永红熊慧玲江山崔长法
- 关键词：吸附率免疫原性
- 不同链长6A型肺炎球菌荚膜多糖与多糖结合物的稳定性及小鼠免疫原性
- 2023年
- 目的研究不同链长的6A型肺炎球菌荚膜多糖(type 6A pneumococcal capsular poly-saccharide,Pn6A)稳定性差异及链长对结合物稳定性和免疫原性的影响.方法采用高压均质机获得不同链长的Pn6A,并在1-氰基-4-二甲胺基吡啶四氟硼酸盐作用下与破伤风类毒素-己二酰肼衍生物形成共轭结合物.通过比较原始多糖、多糖降解物及结合物的核磁共振氢谱验证结构的正确性,通过硫酸蒽酮法和速率比浊法定量比较抗原性;通过高效液相-分子尺寸排阻层析-多角度激光散射仪比较不同链长多糖的稳定性;分析结合物物理化学(理化)性质,并通过重均相对分子质量(weight-average relative molecular weight,Mw)变化及游离多糖变化比较结合物稳定性;用原始多糖和结合物分别皮下免疫NIH小鼠3次,ELISA检测抗多糖IgG水平.结果Pn6A经机械剪切3、8、20次后,Mw由14.01×10^(5)g/mol分别下降为1.55×10^(5)、0.92×10^(5)和0.58×10^(5)g/mol,其对应结合物理化数据相近;核磁共振结果表明,多糖降解物和结合物各特征质子的化学位移相比原始多糖未发生改变;硫酸蒽酮法和速率比浊法定量计算得到的不同多糖和结合物单位抗原值相近;在不同pH及温度条件下,长链多糖及其结合物的Mw和游离多糖变化均大于短链多糖.不同链长多糖结合物免疫小鼠后诱导的IgG抗体滴度均高于原始多糖(F=2.90,P=0.048),而不同结合物之间的免疫原性差异无统计学意义(F=1.39,P=0.267).结论机械剪切不会破坏Pn6A化学结构和抗原性;Pn6A链长越短,所获得的多糖及结合物越稳定;Pn6 A经机械剪切后制备的结合物在小鼠体内可诱导良好的免疫应答.
- 周觉非代洁张玉洁蓝天杜游赵嘉祯陈思邓前廖红梅邹莎莎杨溢尧葛永红
- 关键词：核磁共振氢谱破伤风类毒素结合疫苗免疫原性
- CWPS竞争ELISA检测方法的建立被引量：2
- 2013年
- 目的：建立竞争酶联免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）测定C-多糖（Cell Wall Polysaccharides，cwes）浓度的方法。方法：以C-多糖为包被抗原，待测多糖为竞争抗原，与优化的抗C-多糖抗体反应，建立标准曲线，并验证该方法的准确性和精密度。结果：优化后的C-多糖包被浓度为10μg·mL^-1，抗C-多糖血清稀释度为1：160000。检测线性范围1250～20 ng·mL^-1，最低检测限为10ng·mL^-1，回归方程为B／B0=-0.2521 lg[CWPS]＋0.9529，线性相关系数为R^2=0.99。批内和批间精密度分别为9.7％和6.9％，测定PS6A精糖中标准CWPS的回收率为100.3％。结论：本研究建立的竞争ELISA方法，准确性和精密度均较好，可以检测肺炎链球菌荚膜多糖中CWPS的浓度。
- 廖红梅刘威杨溢尧邹莎莎曾华英江山
- 关键词：肺炎球菌竞争ELISA
- 14型肺炎球菌荚膜多糖-破伤风类毒素结合物中游离多糖的测定方法被引量：2
- 2012年
- 目的:建立一种简单有效的测定肺炎球菌荚膜多糖-破伤风类毒素结合物中游离多糖的方法。方法:根据脱氧胆酸(DOC)在酸性条件下可快速将蛋白质沉淀的原理,采用不同pH值的1%DOC溶液分别对14型肺炎球菌荚膜多糖(Ps14)、破伤风类毒素(TT)及Ps14-TT结合物进行处理,观察不同pH值1%DOC溶液对它们的影响,来确定最佳反应pH值。随后采用精密度试验和准确度试验对该方法进行验证。结果:Ps14-TT结合物经1%DOC处理后,在酸性条件下(1 mol.L-1HCl),结合物及蛋白质被完全沉淀,而未结合的Ps14存在于上清液中,采用蒽酮法测定结合物当中的游离多糖含量。结论:该方法重复性,稳定性,精密度,准确度均达到检测要求,适用于检测Ps14-TT结合物中游离多糖的测定。
- 姚静廖磊黄林周觉非廖红梅刘威
- 关键词：破伤风类毒素脱氧胆酸
- 竞争ELISA法测定19A型肺炎链球菌发酵物中的多糖含量
- 2014年
- 目的建立检测19A型肺炎链球菌荚膜多糖的竞争ELISA方法，检测细菌发酵过程中多糖的表达量。方法以19A型肺炎链球菌多糖为包被物，待测多糖为竞争物，建立间接竞争ELISA方法并验证该方法的准确性和精密度。用建立的方法检测不同培养条件下发酵物中的多糖表达量。结果最佳多糖包被质量浓度为10mg／L，多糖抗血清稀释度为1：4×10^4。当检测范围为39．06～5000．00μg／L时，决定系数为0．995。批内和批间相对标准差分别为5．08％～9．58％和5．28％～12．93％。培养物样品加标回收率为95．84％～110．07％。两种不同培养条件下培养物中的多糖表达量分别为312．17mg／L和1056．42mg／L。结论新建的方法能用予19A型肺炎链球菌发酵物中多糖表达量的检测，对于优化培养条件及掌握培养物收获时间具有指导意义。
- 李小波廖红梅黄放谢媛媛于志强宋绍中
- 关键词：多糖类链球菌肺炎酶联免疫吸附测定
