雷钏
- 作品数：11 被引量：12H指数：2
- 供职机构：广西大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划广西省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 转人干扰素α-2b细胞株建立及其外源基因表达分析被引量：1
- 2015年
- 【目的】从细胞水平探讨应用水牛乳腺生物反应器生产人干扰素α-2b(IFNα-2b)的可行性,为水牛乳腺生物反应器的制备提供参考依据。【方法】建立并优化核转染人乳腺癌细胞Bcap-37的方法,再利用该方法将水牛乳腺特异性表达人IFNα-2b载体导入Bcap-37细胞,建立转基因细胞株,然后分别从RNA水平和蛋白质水平对其能否正常表达人IFNα-2b进行分析。【结果】电压是影响Bcap-37细胞核转染效率的关键因素,对其进行优化(电压275 V、电击时间10 ms)后的核转染效率可达81.1%。使用优化后的核转染方法可将水牛乳腺特异性表达载体p BCN-IFN-CMVEGFP-neo和p BCN-IFN-CMV-EGFP-IRES-neo成功转入Bcap-37细胞而获得转人IFNα-2b细胞株,经IFNα-2b基因的m RNA表达丰度及IFNα-2b蛋白的Western blotting检测,证实在两株转基因细胞系中均能顺利进行IFNα-2b基因的转录与翻译。【结论】建立的核转染法能高效转染Bcap-37细胞,可应用该方法在细胞水平上对携带人IFNα-2b基因水牛乳腺特异性表达载体的表达能力进行分析,并证实乳腺特异性表达载体(p BCN-IFN-CMV-EGFP-neo和p BCN-IFN-CMVEGFP-IRES-neo)均能用于水牛乳腺生物反应器的制备。
- 罗婵屈春凤李辉雷钏周宇刘庆友蒋建荣石德顺
- 关键词：水牛人干扰素细胞株
- 黄牛类胚胎干细胞的培养
- 本研究采用分离着床前囊胚的内细胞团的方法培养黄牛类胚胎干细胞,通过对分离胚胎内细胞团方法和控制饲养层密度以及传代方法的培养条件的实验摸索,得出以下结论:使用器械分离法分离出囊胚内细胞团,使其贴壁在密度为80％的饲养层生长...
- 马玉洁劳艳萍朱鹏阮秋燕雷钏杜姗姗王萍陆凤花石德顺
- 关键词：黄牛胚胎干细胞
- 文献传递
- 牛磺熊脱氧胆酸对黄牛体外受精早期胚胎发育的影响被引量：1
- 2015年
- 旨在研究牛磺熊脱氧胆酸(Tauro ursodeoxychollc acid,TUDCA)对黄牛体外受精(IVF)早期胚胎发育的影响。采用RT-PCR法检测黄牛IVF胚胎早期发育各时期XBP-1mRNA剪接激活情况,随后分别用添加不同浓度(0、100、250、500、1 000μmol·L-1)TUDCA的培养液培养胚胎,分别统计胚胎分裂率、囊胚率、囊胚细胞总数及囊胚细胞凋亡率,采用qRT-PCR法分析囊胚内质网应激相关基因Grp78、Chop、Bax、Bcl-2的表达情况。结果表明,在胚胎的4-细胞、桑椹胚、囊胚检测到XBP-1mRNA明显剪接;IVF胚胎经不同浓度TUDCA培养后各组间的胚胎分裂率差异不显著(P>0.05),但500μmol·L-1 TUDCA组提高了胚胎的囊胚发育率及囊胚细胞数(P<0.05),并降低了囊胚细胞凋亡率(P<0.05);qRT-PCR检测表明,500μmol·L-1 TUDCA处理组下调了囊胚Chop基因的表达,且上调了Bcl-2基因的表达(P<0.05),而Grp78与Bax表达与对照组相比差异不显著(P>0.05)。综上表明:早期胚胎体外发育过程中,存在内质网应激反应;胚胎培养液中添加500μmol·L-1 TUDCA,可以降低内质网应激反应,有利于促进黄牛胚胎发育。
- 李政达阮子芸雷钏阮秋燕蒋建荣石德顺陆凤花
- 关键词：黄牛IVF内质网应激基因表达
- 水牛胎儿骨髓间充质干细胞的分离培养及其生物学特性研究
- 引言/目的 骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell,BMSC)是一类具有多向分化潜能的成体干细胞.相关报道指出胎儿骨髓中的BMSCs无论从数量还是分化潜能性都优于成年动物.研...
- 雷钏邓凯阮秋燕马玉洁阮子芸刘晓华蒋建荣石德顺陆凤花
- 水牛胎儿骨髓间充质干细胞分离培养及基因转染的初步研究
- 本研究以水牛胎儿四肢长骨骨髓为分离对象，采用全骨髓贴壁法分离培养水牛胎儿骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs)，首先比较了不同胎儿大小和不同血清浓度对水牛胎儿...
- 雷钏
- 关键词：骨髓间充质干细胞基因转染生物学特性
- 文献传递
- 低氧分压通过低氧诱导因子(HIF)影响卵母细胞的体外成熟和早期胚胎的发育被引量：5
- 2015年
- 卵母细胞和早期胚胎的体外培养(IVC)是哺乳动物胚胎工程的一项关键技术,是生殖生物学和转基因与克隆技术等生物技术研究的基础。影响卵母细胞和早期胚胎体外培养的因素包括培养液组成成分、离子浓度和渗透压,培养环境气相组成和温度等。最近研究表明,培养系统中的氧分压可以显著影响胚胎的发育,而这种影响主要由低氧诱导因子(hypoxia-inducible factor,HIF)进行调控。作者综述了氧分压及HIF对卵母细胞和早期胚胎体外发育的影响,并对HIF的结构及调控机制进行讨论,为研究低氧培养技术在卵母细胞和早期胚胎体外培养中的应用提供依据。
- 刘晓淋杜凤娇雷钏阮秋燕吴柱连孙洪亮赵鑫邓彦飞陆凤花石德顺
- 关键词：低氧诱导因子氧分压卵母细胞早期胚胎
- 印迹基因IGF2在水牛孤雌胚胎发育中甲基化水平的分析
- IGF2的印迹正常对哺乳动物的胎儿和胎盘的正常发育起着决定性的作用,特别对早期胚胎的发育也起着不可或缺的作用.本文通过亚硫酸盐处理结合PCR方法检测IGF2在水牛的孤雌胚胎2-cell、8-cell、桑椹胚以及囊胚时期的...
- 阮子芸李政达孙洪亮苏节阮秋燕雷钏石德顺陆凤花
- 关键词：水牛胚胎发育基因甲基化印迹基因
- 文献传递
- 核转染技术转染水牛细胞的初步研究
- 2014年
- 本研究旨在获得一种高效转染水牛细胞的方法。本研究首先以水牛胎儿成纤维细胞(BFF)为研究对象,建立、优化核转染法;随后,比较核转染法、脂质体法、电穿孔法转染BFF的效率;最后选用较优的方法,探讨转染水牛原代骨髓间充质干细胞和类胚胎干细胞的可行性。结果发现随电压的增加,核转染BFF的效率升高;核转染电压为225V,脉冲时间为10ms时,细胞EGFP阳性率为(83.1±1.4)%,转染效率显著高于脂质体法((11.7±1.2)%)和电穿孔法((35.5±2.0)%)。运用优化的核转染条件可以成功将外源基因导入水牛原代骨髓间充质干细胞和类胚胎干细胞,且不影响其细胞生物学特性。本研究为以多能干细胞介导的水牛转基因克隆胚胎的生产奠定了基础。
- 罗婵阮秋燕雷钏徐永茹陆凤花蒋建荣石德顺
- 关键词：转染效率骨髓间充质干细胞
- 低氧培养对水牛早期胚胎体外发育影响的初步研究
- 引言/目的 动物胚胎的体外培养(IVC)是哺乳动物胚胎工程的一项关键技术,是保证运用胚胎生物技术顺利生产体外胚胎的基础.近年来,虽然胚胎体外培养技术取得了长足进展,但研究结果表明,体外培养胚胎的发育与体内胚胎相比,存在显...
- 刘晓淋雷钏李志鹏赵鑫邓彦飞蒋建荣石德顺陆凤花
- 表儿茶素对小鼠卵母细胞mtDNA拷贝数和胚胎体外发育能力的影响被引量：4
- 2015年
- 本研究旨在探究表儿茶素(epicatechin,EC)对小鼠体外成熟培养卵母细胞线粒体DNA(mtDNA)拷贝数及其随后孤雌激活胚胎发育能力的影响。小鼠卵丘-卵母细胞复合体(COCs)在添加不同浓度EC(0、5、10、15、20μmol/L)的成熟液中体外成熟培养16h后,采用实时荧光定量PCR的方法检测卵母细胞mtDNA拷贝数;同时,通过对卵母细胞进行孤雌激活处理,探讨其后续胚胎的体外发育能力。实时荧光定量PCR分析结果显示,添加EC各处理组的卵母细胞mtDNA拷贝数均有所增加,其中,10、15μmol/L组的mtDNA拷贝数均显著高于0μmol/L对照组(P<0.05);但10μmol/L组mtDNA拷贝数更接近自然排卵周期合子的mtDNA含量(P>0.05)。体外培养观察结果发现,成熟液中添加10μmol/L EC能提高卵母细胞第一极体排出率,与对照组相比差异不显著(P>0.05),但能显著提高卵母细胞孤雌激活后胚胎的囊胚发育率(P<0.05)。综上表明,小鼠卵母细胞体外成熟液中添加10μmol/L EC可提高卵母细胞的mtDNA拷贝数,有利于促进卵母细胞后续的发育能力。
- 吴柱连刘晓华杜凤娇雷钏尹娜郭振伟屈春凤刘晓淋阮秋燕陆凤花石德顺
- 关键词：表儿茶素卵母细胞MTDNA发育能力
