阮秋燕
- 作品数：11 被引量：14H指数：2
- 供职机构：广西大学更多>>
- 发文基金：广西省自然科学基金国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 低氧分压通过低氧诱导因子(HIF)影响卵母细胞的体外成熟和早期胚胎的发育被引量：5
- 2015年
- 卵母细胞和早期胚胎的体外培养(IVC)是哺乳动物胚胎工程的一项关键技术,是生殖生物学和转基因与克隆技术等生物技术研究的基础。影响卵母细胞和早期胚胎体外培养的因素包括培养液组成成分、离子浓度和渗透压,培养环境气相组成和温度等。最近研究表明,培养系统中的氧分压可以显著影响胚胎的发育,而这种影响主要由低氧诱导因子(hypoxia-inducible factor,HIF)进行调控。作者综述了氧分压及HIF对卵母细胞和早期胚胎体外发育的影响,并对HIF的结构及调控机制进行讨论,为研究低氧培养技术在卵母细胞和早期胚胎体外培养中的应用提供依据。
- 刘晓淋杜凤娇雷钏阮秋燕吴柱连孙洪亮赵鑫邓彦飞陆凤花石德顺
- 关键词：低氧诱导因子氧分压卵母细胞早期胚胎
- 黄牛类胚胎干细胞的培养
- 本研究采用分离着床前囊胚的内细胞团的方法培养黄牛类胚胎干细胞,通过对分离胚胎内细胞团方法和控制饲养层密度以及传代方法的培养条件的实验摸索,得出以下结论:使用器械分离法分离出囊胚内细胞团,使其贴壁在密度为80％的饲养层生长...
- 马玉洁劳艳萍朱鹏阮秋燕雷钏杜姗姗王萍陆凤花石德顺
- 关键词：黄牛胚胎干细胞
- 文献传递
- 牛磺熊脱氧胆酸对黄牛体外受精早期胚胎发育的影响被引量：1
- 2015年
- 旨在研究牛磺熊脱氧胆酸(Tauro ursodeoxychollc acid,TUDCA)对黄牛体外受精(IVF)早期胚胎发育的影响。采用RT-PCR法检测黄牛IVF胚胎早期发育各时期XBP-1mRNA剪接激活情况,随后分别用添加不同浓度(0、100、250、500、1 000μmol·L-1)TUDCA的培养液培养胚胎,分别统计胚胎分裂率、囊胚率、囊胚细胞总数及囊胚细胞凋亡率,采用qRT-PCR法分析囊胚内质网应激相关基因Grp78、Chop、Bax、Bcl-2的表达情况。结果表明,在胚胎的4-细胞、桑椹胚、囊胚检测到XBP-1mRNA明显剪接;IVF胚胎经不同浓度TUDCA培养后各组间的胚胎分裂率差异不显著(P>0.05),但500μmol·L-1 TUDCA组提高了胚胎的囊胚发育率及囊胚细胞数(P<0.05),并降低了囊胚细胞凋亡率(P<0.05);qRT-PCR检测表明,500μmol·L-1 TUDCA处理组下调了囊胚Chop基因的表达,且上调了Bcl-2基因的表达(P<0.05),而Grp78与Bax表达与对照组相比差异不显著(P>0.05)。综上表明:早期胚胎体外发育过程中,存在内质网应激反应;胚胎培养液中添加500μmol·L-1 TUDCA,可以降低内质网应激反应,有利于促进黄牛胚胎发育。
- 李政达阮子芸雷钏阮秋燕蒋建荣石德顺陆凤花
- 关键词：黄牛IVF内质网应激基因表达
- 核转染技术转染水牛细胞的初步研究
- 2014年
- 本研究旨在获得一种高效转染水牛细胞的方法。本研究首先以水牛胎儿成纤维细胞(BFF)为研究对象,建立、优化核转染法;随后,比较核转染法、脂质体法、电穿孔法转染BFF的效率;最后选用较优的方法,探讨转染水牛原代骨髓间充质干细胞和类胚胎干细胞的可行性。结果发现随电压的增加,核转染BFF的效率升高;核转染电压为225V,脉冲时间为10ms时,细胞EGFP阳性率为(83.1±1.4)%,转染效率显著高于脂质体法((11.7±1.2)%)和电穿孔法((35.5±2.0)%)。运用优化的核转染条件可以成功将外源基因导入水牛原代骨髓间充质干细胞和类胚胎干细胞,且不影响其细胞生物学特性。本研究为以多能干细胞介导的水牛转基因克隆胚胎的生产奠定了基础。
- 罗婵阮秋燕雷钏徐永茹陆凤花蒋建荣石德顺
- 关键词：转染效率骨髓间充质干细胞
- 水牛囊胚发育阶段对原始态/始发态胚胎干细胞分离培养的影响
- 胚胎干细胞(Embryonic Stem Cells，ESCs)的建系受其细胞来源以及培养环境等多种因素的影响，其中来自囊胚的ESCs受囊胚所处发育阶段的影响最大。囊胚形成到囊胚植入子宫壁期间，其多能性细胞处于一种不断自...
- 阮秋燕
- 关键词：水牛囊胚胚胎干细胞
- 文献传递
- 水牛胎儿骨髓间充质干细胞的分离培养及其生物学特性研究
- 引言/目的 骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell,BMSC)是一类具有多向分化潜能的成体干细胞.相关报道指出胎儿骨髓中的BMSCs无论从数量还是分化潜能性都优于成年动物.研...
- 雷钏邓凯阮秋燕马玉洁阮子芸刘晓华蒋建荣石德顺陆凤花
- 水牛GLUT3基因的克隆与序列分析被引量：1
- 2013年
- 为了研究GLUT 3的功能,试验根据GenBank中公布的牛、人等物种的GLUT 3核苷酸序列设计、合成1对引物,以水牛卵巢组织总RNA为模板,采用RT-PCR法扩增出GLUT 3成熟蛋白编码cDNA序列,将此扩增产物克隆入pMD 18-T载体,进行PCR、双酶切鉴定及序列测定与分析。结果表明:扩增的水牛GLUT 3基因CDS序列长为1 701 bp,经相关生物软件预测,该基因编码494个氨基酸。水牛GLUT 3基因ORF序列与牛、山羊、人、大鼠、猪同源性分别为100%、100%、99%、94%和81%;蛋白序列与牛、山羊、人、大鼠、猪同源性分别为100%、99%、99%、99%和97%。说明GLUT 3是一组在进化上高度保守的蛋白质。
- 李楠刘荣立柯浩阮秋燕苏杰孙洪亮朱鹏张顺蒋建荣陆凤花石德顺
- 关键词：水牛
- 印迹基因IGF2在水牛孤雌胚胎发育中甲基化水平的分析
- IGF2的印迹正常对哺乳动物的胎儿和胎盘的正常发育起着决定性的作用,特别对早期胚胎的发育也起着不可或缺的作用.本文通过亚硫酸盐处理结合PCR方法检测IGF2在水牛的孤雌胚胎2-cell、8-cell、桑椹胚以及囊胚时期的...
- 阮子芸李政达孙洪亮苏节阮秋燕雷钏石德顺陆凤花
- 关键词：水牛胚胎发育基因甲基化印迹基因
- 文献传递
- 表儿茶素对小鼠卵母细胞mtDNA拷贝数和胚胎体外发育能力的影响被引量：4
- 2015年
- 本研究旨在探究表儿茶素(epicatechin,EC)对小鼠体外成熟培养卵母细胞线粒体DNA(mtDNA)拷贝数及其随后孤雌激活胚胎发育能力的影响。小鼠卵丘-卵母细胞复合体(COCs)在添加不同浓度EC(0、5、10、15、20μmol/L)的成熟液中体外成熟培养16h后,采用实时荧光定量PCR的方法检测卵母细胞mtDNA拷贝数;同时,通过对卵母细胞进行孤雌激活处理,探讨其后续胚胎的体外发育能力。实时荧光定量PCR分析结果显示,添加EC各处理组的卵母细胞mtDNA拷贝数均有所增加,其中,10、15μmol/L组的mtDNA拷贝数均显著高于0μmol/L对照组(P<0.05);但10μmol/L组mtDNA拷贝数更接近自然排卵周期合子的mtDNA含量(P>0.05)。体外培养观察结果发现,成熟液中添加10μmol/L EC能提高卵母细胞第一极体排出率,与对照组相比差异不显著(P>0.05),但能显著提高卵母细胞孤雌激活后胚胎的囊胚发育率(P<0.05)。综上表明,小鼠卵母细胞体外成熟液中添加10μmol/L EC可提高卵母细胞的mtDNA拷贝数,有利于促进卵母细胞后续的发育能力。
- 吴柱连刘晓华杜凤娇雷钏尹娜郭振伟屈春凤刘晓淋阮秋燕陆凤花石德顺
- 关键词：表儿茶素卵母细胞MTDNA发育能力
- 水牛胎儿成纤维细胞电转染条件的优化被引量：2
- 2013年
- 高活力的转基因细胞的制备是转基因克隆动物研究的关键环节。为了高效制备转基因细胞,外源基因转入水牛胎儿成纤维细胞的条件需要优化。采用组织块贴壁法分离获得水牛胎儿成纤维细胞,经染色体核型分析表明获得的细胞具有正常的生物学功能,可用于细胞转染。采用电穿孔法将载体EGFP-N1导入水牛胎儿成纤维细胞,分别比较不同电压(200V,250V,300V,350V)、不同电击时间(5ms,10ms,15ms)和不同细胞代数(第3代、第5代、第10代)的转染效率,并利用优化的电转染条件将乳腺特异性表达的水牛促乳素(PRL)基因导入水牛胎儿成纤维细胞,G418筛选获单克隆并进行鉴定。结果发现电压为300 V,脉冲时间为10 ms时,细胞GFP阳性率为35.5%,转染效率较高。随传代次数的增加,细胞的转染效率下降;传至第10代的细胞转染效率显著低于第3代的水牛胎儿成纤维细胞(30%VS 35.5%,P<0.05)。运用优化条件转染、筛选可获得转PRL单克隆细胞,转染效率为2.1×10-5(84/4×106)。挑取单克隆细胞扩大培养,经PCR鉴定和核型分析,证实单克隆稳定整合促乳素基因,并且核型分析正常,可作为核供体,用于生产水牛转基因克隆胚胎。为采用体细胞克隆技术生产水牛转基因胚胎奠定了基础。
- 罗婵任艳萍龚云杨素芳阮秋燕管晓梅蒋建荣石德顺
- 关键词：电穿孔转基因细胞
