杜鹏程
- 作品数：2 被引量：4H指数：1
- 供职机构：中国疾病预防控制中心传染病预防控制所更多>>
- 相关领域：医药卫生环境科学与工程更多>>
- 我国104株艰难梭菌多位点序列分析
- ：探讨来源于我国不同地区不同宿主人群的艰难梭菌之间是否存在遗传多态性及各遗传谱系之间的关系,并进一步研究我国艰难梭菌的起源与进化.方法：收集来自北京、山东、广州共104株艰难梭菌,提取DNA进行管家基因(adk,atpA...
- 严其容周海建杜鹏程崔志刚陈晨程颖卢金星
- 关键词：艰难梭菌基因多态性
- 实时荧光定量TaqMan-MGB探针法检测杆菌样巴尔通体被引量：4
- 2015年
- 【目的】应用Taq Man探针实时荧光定量PCR技术建立特异性强、敏感性高和稳定性好的快速杆菌样巴尔通体检测方法。【方法】应用生物信息学方法查找杆菌样巴尔通体特有基因,从中筛选出一段特有的基因序列为模板设计探针和引物。通过比较Ct值和荧光强度确定扩增反应的最佳退火温度、探针和引物浓度;将扩增产物连接到p EASY-T载体上制备标准品,绘制标准曲线,分析扩增效率和线性关系;评估方法的特异性、敏感性及重复性。【结果】优化后退火温度为60°C,探针和引物浓度均为200 nmol/L,反应体系20μL。特异性实验显示只有杆菌样巴尔通体扩增出荧光信号,其他种属细菌均未见荧光信号;标准曲线线性关系良好(R2=1),扩增效率E=98.18%;最低检出限为每个PCR反应3个拷贝;组内和组间的变异系数CV值分别为0.21%–0.42%和0.29%–0.59%,在允许范围内。【结论】研究建立的实时荧光定量Taq Man-MGB探针法特异性强、灵敏度高、稳定性好,可快速检测鉴定杆菌样巴尔通体,为这种巴尔通体所引起的一系列疾病的早期快速诊断、监测和流行病学调查等研究提供有效手段。
- 栗冬梅刘云彦杜鹏程宋秀平刘起勇
- 关键词：TAQMAN探针
