王宏伟
- 作品数：4 被引量：7H指数：2
- 供职机构：长春农牧大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- HIV-1核心蛋白p24在大肠杆菌中的表达与纯化被引量：3
- 1999年
- 目的：探索进一步提高ＨＩＶ１ ｐ２４ ｇａｇ 蛋白在大肠杆菌中的表达效率，增加产物的纯化手段。方法：通过改造原核表达载体ｐＢＶ２２０ 和ｐＥＴ２８ ，构建了一种新的通用型温控原核表达载体ｐＶＶ５ ，将ＨＩＶ１ ｇａｇ 基因的１ １４８ ～１ ８５７ 编码序列，插入到ｐＶＶ５ｂ 和ｐＥＴ２８ｂ 的相应位点中，构建了重组表达质粒ｐＥＧ１ｂ 和ｐＥＧ７ｂ ，转化到大肠杆菌中进行表达，产物利用ＩＭＡＣ 金属螯合层析柱进行纯化，纯化的表达产物用ＨＩＶ１ 标准阳性血清进行鉴定。结果：构建的重组表达质粒ｐＥＧ１ｂ 和ｐＥＧ７ｂ 在相应受体菌中表达重组蛋白的量为４１ ％ 和２８ ％ ，表达的外源蛋白经ＩＭＡＣ 柱一步纯化后纯度超过８０ ％ ，纯化后的重组蛋白可与ＨＩＶ１ 阳性血清发生ＥＬＩＳＡ 反应。结论：构建的通用型温控原核表达载体可以高效地表达外源蛋白，在大肠杆菌中高效地表达ＨＩＶ１ ｐ２４ 可用于制备ＨＩＶ１ 感染的诊断试剂。
- 王宏伟金宁一戴炜李体远郭志儒殷震
- 关键词：原核载体人免疫缺陷病毒核心蛋白纯化
- 温控表达载体的构建及HIV-1p24的表达与纯化被引量：2
- 1999年
- 通过改造原核表达载体ｐ Ｂ Ｖ２２０ 和ｐ Ｅ Ｔ２８，构建出了一种新的通用型温控原核表达载体ｐ Ｖ Ｖ５，该载体携带 Ｐｒ Ｐｌ串联温控启动子以及 Ｈｉｓ Ｔａｇ 的纯化标签，利于目的蛋白的表达与纯化将 Ｈ Ｉ Ｖ１ ｇａｇ 基因的１１４８１８５７ 编码序列分别插入到ｐ Ｖ Ｖ５ｂ、ｐ Ｅ Ｔ２８ｂ 的相应位点，构建了重组表达质粒 ｐ Ｅ Ｇ１ｂ、ｐ Ｂ Ｇ７ｂ，二者在不同受体菌中，表达重组蛋白的量分别占全菌体蛋白总量的 ４２％ 和２８％ 表达产物为融合蛋白并主要以包涵体的形式存在 该蛋白 Ｎ 端与含６ 个组氨酸在内的３０ 个氨基酸残基的多肽相连，利用 Ｉ Ｍ Ａ Ｃ金属螯和层析柱，对包涵体中的重组ｐ２４ 蛋白进行纯化， 其纯度超过 ８０％ ；对上清中的可溶性ｐ２４ 蛋白进行纯化，产物最终纯度超过６７％ 纯化后的重组蛋白可与 Ｈ Ｉ Ｖ１
- 王宏伟金宁一龚伟苏忠兰殷震
- 关键词：HIV-1衣壳蛋白原核表达载体纯化PBV220
- HIV-2 gag蛋白在大肠杆菌中的表达纯化被引量：1
- 1999年
- 目的 在原核系统中高效表达及纯化人II型免疫缺陷病毒 (HIV 2 )gag蛋白 ,以期作为检测试剂的原料。方法 采用基因工程手段将编码II型人免疫缺陷病毒 (HIV 2 )核心蛋白的部分p5 5 gag1(G1)及全部 p5 5 gag2 (G2 )基因片段分别克隆到原核高效表达载体 pET2 8a的T7噬菌体启动子下游 ,构建出重组表达质粒pET2 8aG1和 pET2 8aG2 ,将其转入不同的受体菌后 ,IPTG诱导下进行表达。经SDS PAGE以及免疫印迹分析鉴定表达产物。在变性和非变性条件下 ,使用Ni NTA亲和层析对 gag蛋白进行了纯化。结果 构建出两个重组表达质粒pET2 8aG1和 pET2 8aG2 ,它们在受体菌BL2 1(DE3 )plysS中有高的表达。pETY2 8aG1的表达产物相对分子质量为 5 5 0 0 0 ,表达的重组蛋白约占菌体总蛋白的 10 % ,pET2 8aG2的表达产物相对分子质量为 610 0 0 ,表达的重组蛋白约占菌体总蛋白的 6 8% ,经免疫印迹分析表明 ,纯化前后的目的蛋白均可与HIV 2患者全血清发生特异性反应。结论 在大肠杆菌中表达及纯化了HIV 2Gag蛋白 ,具有良好的反应原性 ,认为可作为HIV
- 苏忠兰金宁一段正芳王宏伟李体远李钟洙王玉红王洪军殷震
- 关键词：大肠杆菌纯化
- HIV-1Gag蛋白在大肠杆菌和重组杆状病毒系统中的高效表达及通用型温控原核表达载体的构建被引量：1
- 1999年
- 将中国株HIV－1B亚型的gag全基因序列，克隆到杆状病毒表达载体pfastbacI中，构建了重组质粒pfastGag，利用细菌／杆状病毒表达系统筛选重组杆状病毒，在昆虫细胞中高效表达了HIV－1Gag蛋白。通过改造原核表达载体pBV220和pET28，构建了一种新的通用型温控原核表达载体质粒pVV5，该载体携带PrPl串联温控启功子及His—Tag纯化标签，利于目的蛋白表达与纯化。将HIV－1gag基因的1148一1857编码序列，分别插入到pVV5b、pET28b的相应位点，构建了重组表达质粒pEG1b、pEG7b，二者在不同受体菌中，表达重组蛋白的量分别占全菌体蛋白总量的42％和28％。利用IMAC金属螯合层析柱，对包涵体中的重组p24蛋白进行纯化，纯度超过80％；纯化后的重组蛋白可与HIV－1型标准阳性血清发生较强的免疫学反应。
- 金宁一王宏伟张应玖张东威邹啸环王铁东
- 关键词：HIV-1GAG蛋白纯化大肠杆菌
