李相志
- 作品数：7 被引量：5H指数：2
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- 一种用于弓形虫病防治的可复制型RNA疫苗及构建方法和应用
- 本发明涉及一种用于弓形虫病防治的可复制型RNA疫苗，所述疫苗是将弓形虫抗原基因NTPase‑II插入到甲病毒载体RREP上，获得重组质粒pRREP‑NTPase‑II，免疫前，将该重组质粒体外转录成RNA后，即可获得所述...
- 谭峰郑丽娜骆方军谢桂珍万玉静李相志林佳鑫刘阳阳
- 文献传递
- 刚地弓形虫自噬相关蛋白3基因的克隆表达与多抗制备被引量：2
- 2014年
- 目的克隆、表达刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)自噬相关蛋白3(Tg Atg3)基因,并制备能特异性识别该蛋白的多克隆抗体。方法以弓形虫RH株c DNA为模板,构建p ET28a-Tg Atg3重组质粒,转化入大肠埃希菌(E.coli)Rosetta感受态细胞,经自诱导培养基诱导表达,用镍柱亲和层析法纯化诱导表达产物,以小鼠抗His标签单克隆抗体作为一抗,蛋白质印迹(Western blotting)进行鉴定。以纯化的Tg Atg3蛋白作为抗原皮下多点注射免疫日本大耳白兔,125μg/(只·次),免疫4次后心脏取血,制备血清,获得特异性抗Tg Atg3多克隆抗体。对制备的多克隆抗体进行Western blotting与间接免疫荧光法(IFA)鉴定。结果双酶切、PCR扩增及测序结果证实目的片段序列正确,原核表达质粒p ET28a-Tg Atg3构建成功。SDS-PAGE和Western blotting结果表明,重组E.coli中可见相对分子质量(Mr)约44 000的可溶性Tg Atg3蛋白的高效表达。抗体检测Western blotting结果显示,制备的多克隆抗体能特异性识别弓形虫RH株的Tg Atg3蛋白。IFA结果显示,该多克隆抗体可与虫体胞浆内Tg Atg3结合。结论获得重组可溶性Tg Atg3蛋白,制备的多克隆抗体能特异性识别弓形虫RH株的天然Atg3蛋白。
- 华倩倩李相志万玉静陈弟赵徐寒晖蒋凯胡昕潘长旺谭峰
- 关键词：刚地弓形虫克隆多克隆抗体
- 一种用于弓形虫病防治的可复制型RNA疫苗及构建方法和应用
- 本发明涉及一种用于弓形虫病防治的可复制型RNA疫苗，所述疫苗是将弓形虫抗原基因NTPase-II插入到甲病毒载体RREP上，获得重组质粒pRREP-NTPase-II，免疫前，将该重组质粒体外转录成RNA后，即可获得所述...
- 谭峰郑丽娜骆方军谢桂珍万玉静李相志林佳鑫刘阳阳
- 抗弓形虫β微管蛋白小分子抗原肽多克隆抗体的制备及鉴定被引量：2
- 2014年
- 对弓形虫GT1株、ME49株和人的β微管蛋白的氨基酸序列进行生物信息学分析。根据生物信息学分析结果,人工合成弓形虫β微管蛋白氨基酸序列C端小分子抗原肽。用合成的抗原肽免疫日本大耳兔,每2周免疫1次,0.5 mg/(只·次),共5次。末次免疫后2周,收集兔血清,ELISA检测血清中特异性抗体效价,蛋白质印迹(Western blotting)检测该多克隆抗体与弓形虫RH株、ME49株和PRU株速殖子蛋白的免疫反应。生物信息学分析结果表明,弓形虫GT1株与ME49株的β微管蛋白的氨基酸序列完全一致,与人的β微管蛋白氨基酸序列同源性为98%,差异氨基酸主要集中在C端。经5次免疫后,ELISA证实兔血清中抗体效价为1∶52 800。Western blotting分析结果显示,该多克隆抗体可分别与弓形虫RH株、ME49株和PRU株的β微管蛋白特异性结合。
- 毛小勇华倩倩李相志姚丽丽谭峰
- 关键词：刚地弓形虫Β-微管蛋白多克隆抗体
- 刚地弓形虫自噬相关蛋白8(TgAtg8)多克隆抗体制备及初步应用被引量：1
- 2014年
- 目的制备、评价特异性抗刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)自噬相关蛋白8(autophagy protein 8,TgAtg8)多克隆抗体。方法生物信息学方法分析弓形虫基因组中自噬相关蛋白的基因序列和氨基酸序列。以刚地弓形虫RH株速殖子cDNA为模板,PCR扩增TgAtg8编码基因,克隆入pGEX-6p-1载体,构建pGEX-6p-1-TgAtg8重组质粒,转化至大肠埃希菌(Escherichia coli)BL21。异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达后,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Western blotting)分析重组蛋白表达情况。谷胱甘肽-S-转移酶(GST)标签亲和层析法纯化表达产物。以纯化的TgAtg8蛋白为抗原免疫日本大耳白兔,获得特异性抗TgAtg8多克隆抗体。以制备的多克隆抗体作为一抗,进行Western blotting分析和间接免疫荧光(IFA)检测。结果双酶切和测序结果证实,原核表达质粒pGEX-6p-1-TgAtg8构建成功。SDS-PAGE和Western blotting结果表明,TgAtg8蛋白在E.coli BL21中获得高效表达,其融合蛋白相对分子质量(Mr)约40 000,与理论值相近。Western blotting结果证实,所制备的多克隆抗体能特异性识别融合蛋白TgAtg8和虫株体内天然的TgAtg8蛋白。IFA实验表明,TgAtg8均匀分布于虫体胞浆中,但在自噬诱导培养后,TgAtg8逐渐聚集成颗粒状。结论制备的特异性抗TgAtg8多克隆抗体可用于检测虫体内TgAtg8蛋白在弓形虫自噬形成过程中的变化情况。
- 谭峰华倩倩李星潘李相志梁韶晖
- 关键词：刚地弓形虫细胞自噬多克隆抗体
- 一种弓形虫自杀性DNA疫苗及构建方法和应用
- 本发明涉及一种弓形虫自杀性DNA疫苗，所述疫苗由弓形虫NTPase-II基因和甲病毒复制子载体DREP组成，所述NTPase-II是弓形虫的核苷三磷酸水解酶，与弓形虫的生存和繁殖有关，其核苷酸序列如SEQ？ID？NO.1...
- 谭峰郑丽娜骆方军谢桂珍万玉静李相志林佳鑫刘阳阳
- 文献传递
- 刚地弓形虫自噬参与了速、缓殖子转化
- 目的 研究弓形虫自噬在速、缓殖子转化中的调控作用.方法 利用不依赖连接酶的克隆技术在弓形虫自噬相关蛋白7(TgAtg7)的C端添加HA标签,构建两个转基因虫株：RH TgAtg7-HA和Pru TgAtg7-HA.基于这...
- 李相志谭峰
- 关键词：刚地弓形虫自噬速殖子
