张赛
- 作品数：12 被引量：48H指数：5
- 供职机构：温州医科大学更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划国家自然科学基金浙江省中医药科学研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生文化科学更多>>
- 三七总皂苷通过抑制ADAM10/Notch3信号通路改善野百合碱诱导的大鼠肺动脉高压被引量：2
- 2023年
- 本研究旨在探讨三七总皂苷(Panax notoginseng saponins, PNS)对肺动脉高压(pulmonary arterial hypertension, PAH)肺血管重构的作用及对ADAM10/Notch3通路的影响。建立PAH大鼠模型,随机将雄性Sprague Dawley (SD)大鼠分为对照组、野百合碱(monocrotaline, MCT)组、MCT+PNS组,每组各10只。对照组每日腹腔注射等体积生理盐水;MCT组第一天腹腔注射60 mg/kg MCT,之后每日腹腔注射等体积生理盐水;MCT+PNS组第一天腹腔注射60 mg/kg MCT,之后每日腹腔注射50 mg/kg PNS,各组造模时间持续21天。造模结束后,采用右心导管插管技术测量肺动脉平均压(meanpulmonaryarterialpressure,mPAP),计算右心室肥厚指数(right ventricular hypertrophy index, RVHI),HE和Masson染色观察肺血管壁微观形态与变化,Western blot和qPCR检测大鼠肺血管组织ADAM10、Notch3、Hes-1、P27、PCNA、Caspase-3蛋白及mRNA的表达,免疫荧光染色检测Notch3和α-SMA蛋白表达和定位,免疫组织化学染色检测ADAM10蛋白表达量。结果显示:与对照组相比,MCT组mPAP、RVHI明显升高,肺血管明显增厚以及胶原纤维显著增多,ADAM10、Notch3、Hes-1、PCNA mRNA及蛋白的表达显著升高;同时P27、Caspase-3 mRNA及蛋白的表达则明显降低;与MCT组相比,MCT+PNS组mPAP、RVHI降低,肺血管得到明显改善以及胶原纤维显著减少,ADAM10、Notch3、Hes-1、PCNA mRNA及蛋白的表达有所下降,同时P27、Caspase-3 mRNA及蛋白的表达则轻微升高。免疫荧光染色结果显示Notch3和α-SMA染色可以重叠,证明Notch3表达于平滑肌细胞,MCT组Notch3表达量明显增加,给予PNS干预后,Notch3的表达量低于MCT组。免疫组织化学染色结果显示,与对照组对比,MCT组ADAM10表达量明显增多,与MCT组相比,MCT+PNS组ADAM10表达量减少。这些结果表明,PNS可改善MCT诱导的大鼠PAH,其机制可能是通过抑制ADAM10/Notch3信号通路而实现的。
- 张赛田云娜宋正阳王肖婷王新雨徐俊鹏袁琳波王万铁
- 关键词：肺动脉高压三七总皂苷野百合碱
- NLRP3炎症小体介导的细胞焦亡在大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞缺氧/复氧损伤中的作用机制研究被引量：9
- 2021年
- 目的:探讨核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体介导的细胞焦亡在大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AEC Ⅱ)缺氧/复氧(H/R)损伤中的作用及其机制。方法:常氧培养AEC Ⅱ,并建立H/R损伤模型,随机分为:正常组(Con组,不做处理)、H/R组、NLRP3炎症小体激动剂(脂多糖和ATP,LPS+ATP)组(在H/R组的基础上用NLRP3炎症小体激动剂)及NLRP3炎症小体抑制剂(MCC950)组(在H/R组的基础上用NLRP3炎症小体抑制剂)。实验结束后,收集细胞,采用CCK-8法检测各组细胞活力;试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)和caspase-1活性;免疫荧光染色法观察各组细胞NF-κB和caspase-1表达变化;Western blot检测细胞焦亡相关蛋白NF-κB、NLRP3、gasdermin D(GSDMD)和白细胞介素1β(IL-1β)的表达水平。结果:与Con组相比,其余3组细胞活力显著下降(P<0.05),LDH释放显著增加(P<0.05),caspase-1活性显著升高(P<0.05),NF-κB和caspase-1荧光表达显著增加(P<0.05),细胞焦亡相关蛋白NF-κB、NLRP3、GSDMD-N和IL-1β表达显著增加(P<0.05);与H/R组相比,MCC950组细胞活力显著升高(P<0.05),LDH释放显著减少(P<0.05),caspase-1活性显著下降(P<0.05),NF-κB和caspase-1荧光表达显著减少(P<0.05),NF-κB、NLRP3、GSDMD-N和IL-1β蛋白表达显著减少(P<0.05),而LPS+ATP组与H/R组相比,结果则与MCC950组呈相反趋势(P<0.05)。结论:H/R可激活NF-κB信号通路,上调细胞焦亡相关蛋白表达,导致大鼠AEC Ⅱ损伤;NLRP3炎症小体抑制剂MCC950可减轻H/R引起的大鼠AEC Ⅱ损伤,其机制可能与其抑制NF-κB,减轻细胞焦亡有关。
- 周卓琳刘秀洁王新雨王淑远宋正阳田云娜张赛黄丹娜王万铁
- 关键词：肺泡II型上皮细胞
- 三七总皂苷通过激活PI3K/AKT/mTOR信号通路调控低氧高二氧化碳环境下大鼠PASMCs的自噬和增殖被引量：8
- 2021年
- 目的:探讨三七总皂苷(PNS)在低氧高二氧化碳(HH)环境下对大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)自噬和增殖的作用及其机制。方法:将大鼠PASMCs随机分为5组:对照(CON)组、HH组、HH+PNS组、PI3K抑制剂LY294002组(HH+LY组)及HH+PNS+LY组。CON组置于常氧细胞培养箱(21%O_(2)、5%CO_(2))培养24 h,其余4组置于造模培养箱(5%O_(2)、6%CO_(2))并加入各组对应的药物培养24 h。CCK-8法检测细胞活力;RT-qPCR和Western blot法检测自噬相关指标AKT、mTOR、LC3和P62的mRNA和蛋白水平;Western blot检测增殖细胞核抗原(PCNA)的表达水平;通过透射电镜观察细胞内部自噬小体形成情况。结果:与CON组比,HH组PASMCs的活力减弱,AKT、mTOR和P62的mRNA及p-AKT、p-mTOR和P62的蛋白水平降低,而LC3的mRNA和蛋白水平升高,PCNA表达上调,自噬小体数量增多(P<0.05);与HH组比,HH+PNS组PASMCs的活力减弱,AKT、mTOR和P62的mRNA及p-AKT、p-mTOR和P62的蛋白水平升高,LC3的mRNA和蛋白水平降低,自噬小体数量减少,PCNA表达下调(P<0.05);与HH组相比,HH+LY组PASMCs的活力减弱,AKT、mTOR和P62的mRNA及p-AKT、p-mTOR和P62的蛋白水平降低,而LC3的mRNA和蛋白水平升高,自噬小体数量增多,PCNA表达上调(P<0.05);与HH+PNS组相比,HH+PNS+LY组AKT、mTOR和P62的mRNA及p-AKT、p-mTOR和P62的蛋白水平降低,LC3的mRNA和蛋白水平升高,自噬小体数量增加,PCNA表达上调(P<0.05)。结论:在HH环境下,PNS可能通过激活PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制大鼠PASMCs的自噬和增殖。
- 陈玲珑武垣伶张赛黄丹娜王万铁
- 关键词：肺动脉平滑肌细胞三七总皂苷自噬
- 三个携带线粒体ND1T3866C突变的中国汉族Leber遗传性视神经病变家系
- 本文主要从以下几部分进行论述： 第一部分 中国汉族Leber遗传性视神经病变患者ND1基因突变频谱 目的： 1、在全国范围内收集临床上诊断为Leber遗传性视神经病变(Leber hereditaryoptic n...
- 张赛
- 关键词：LEBER遗传性视神经病变基因突变
- 线粒体DNAT8821G新变异与Leber遗传性视神经病变的相关性被引量：2
- 2015年
- 目的分析两个Leber遗传性视神经病变（Leber’s hereditary optic neuropathy，LHON）家系的临床和分子遗传学特征，阐明-LHON的分子机制。方法对两例具有典型LHON临床特征的先证者和家系成员进行眼科学及临床检查。对这2个家系的先证者使用24对有部分重叠的引物进行线粒体DNA全序列扩增分析。结果检查发现这两个家系中视力损害的外显率分别为12．5％、30％。经线粒体全基因组测序分析，在ATPase6编码区发现了未报道过的T8821G同质性变异位点。线粒体全序列分析显示两个家系呈现线粒体DNA多态性，均属于东亚单倍型M10a。T8821G变异位于线粒体ATPase6高度保守性区，编码位于ATPase6第3个跨膜区第99位的丝氨酸，可能导致ATPase6的空间结构发生改变，导致合成ATP的功能受损，最终发生视力损伤。结论线粒体ATPase6 T8821G可能是与LHON相关的致病性线粒体基因变异。
- 高敏张赛张增君赵福新张娟娟梁敏刘晓玲韦企平童绎瞿佳管敏鑫
- 关键词：LEBER遗传性视神经病变线粒体DNA点突变视力损伤
- 三个携带线粒体ND1 T3866C的中国汉族Leber遗传性视神经病变家系被引量：1
- 2015年
- 目的分析3个中国Leber遗传性视神经病变（Leber’s hereditary optic neuropathy，LHON）家系的临床和分子遗传学特点。方法收集临床诊断为LHON的3个中国汉族家系。对3个家系的先证者进行眼科相关检查，PCR扩增3个原发位点G3460A、G11778A、T14484C所在的线粒体ND1、ND4、ND6基因。并对3个先证者线粒体基因组全序列进行PCR扩增。结果3个家系先证者的视力损伤程度不同，外显率分别12．5％、11．1％和33．3％。3个家系先证者及母系成员均未携带ND1G3460A、ND4G11778A、ND6T14484C这3个常见原发位点，但均携带同质性ND1T3866C突变。线粒体ND13866位点T〉c碱基的改变使线粒体复合体IND1亚基跨膜区的第187位进化高度保守的非极性异亮氨酸转变为极性苏氨酸。结论线粒体ND1T3866C突变可能与LHON相关。
- 张赛高敏张增君刘晓玲管敏鑫
- 关键词：LEBER遗传性视神经病变先证者外显率线粒体DNA
- 三七总皂苷通过Notch3/Hes-1/p27Kip1信号通路抑制低氧性肺动脉高压大鼠肺血管重构被引量：7
- 2022年
- 目的:探讨Notch3/Hes-1/p27;信号通路与低氧性肺动脉高压大鼠肺血管重构的关系及三七总皂苷(PNS)的干预作用。方法:将SPF级雄性SD大鼠采用随机编号分为3组:正常组(C组),低氧组(H组)和PNS组(P组),检测肺动脉压,称量右心室重量,HE染色和Masson染色观察肺血管重构情况,RT-qPCR检测大鼠肺组织中Notch3、Hes-1和p27;的mRNA表达水平,Western blot检测大鼠肺组织中Notch3、Hes-1、p27^(Kipl),增殖细胞核抗原(PCNA)和caspase-3的蛋白水平。结果:与C组相比,H组大鼠的肺动脉压和右心室肥厚指数明显增加;肺血管重构现象明显;Notch3、Hes-1和PCNA的蛋白水平增加,p27;和caspase-3的蛋白水平降低;Notch3和Hes-1的mRNA表达增加,p27;的mRNA表达降低(P<0.05)。经PNS干预后,与H组相比,P组大鼠的肺动脉压和右心室肥厚指数降低;肺血管重构现象改善;Notch3、Hes-1和PCNA的蛋白水平降低,p27;和caspase-3的蛋白水平增加;Notch3和Hes-1的mRNA表达降低,p27;的mRNA表达增加(P<0.05)。结论:PNS可通过抑制Notch3/Hes-1/p27;信号通路,减少低氧诱导的肺动脉高压大鼠肺血管重构。
- 张赛宋正阳王淑远田云娜王肖婷林青青王万铁
- 关键词：肺动脉高压低氧三七总皂苷信号通路血管重构
- 中国人群携带m.14484T>C突变的Leber’s遗传性视神经病变线粒体单体型及多态位点分析被引量：11
- 2014年
- 线粒体ND6基因（MT-ND6）上的m.14484T＞C突变是Leb er＇s遗传性视神经病变（Leber＇s hereditary optic neuropathy,LHON）的一个原发性突变,但该突变自身不足以产生视力损伤.为研究线粒体单体型对携带该突变人群LHON发病的影响,文章对1 177例中国汉族LHON患者MT-ND6基因进行了全面系统的筛查,共筛查到67例患者携带m.14484T＞C同质性突变,在该研究群体中所占比例为5.7％.携带m.14484T＞C突变的51例家系LHON的外显率从5.6％～100.0％不等,平均外显率为21.5％.对家系中51例先证者线粒体全基因组进行分析,各表现为不同的多态性,分别属于18个东亚线粒体单体型.其中单体型A和单体型F在病例组频率均明显低于106例对照组.另外,单体型M10a在病例组中占9.8％,在对照组中未被发现,进一步发现该单体型家系LHON的平均外显率（46.13％）显著高于其他单体型家系的平均外显率,提示线粒体单体型M10a可能增加视力损伤的风险.
- 孟祥娟朱金萍高敏张赛赵福新张娟娟刘晓玲韦企平童绎张铭连瞿佳管敏鑫
- 关键词：LEBER遗传性视神经病变突变单体型外显率
- MT-ND1 3571C>T突变与Leber遗传性视神经病变相关研究被引量：2
- 2014年
- 目的探讨3个携带m.3571C>T突变的中国Leber遗传性视神经病变家系(Leber's hereditary optic neuropathy,LHON)的临床和分子遗传学特征。方法对3个LHON家系中66名成员和116例正常对照者线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)相关区域进行PCR扩增突变、纯化及测序,并对测序结果进行生物信息学分析。结果线粒体DNA序列分析结果显示,3个家系所有受试者和正常对照者均未发现m.3460G>A、m.11778G>A和m.14484T>C这3个常见的原发突变位点,而3个先证者及其母系成员均携带m.3497C>T和m.3571C>T突变位点,非母系成员和116例正常对照均不携带m.3497C>T和m.3571C>T突变位点。m.3497C>T是已知与LHON相关的突变位点。结论 m.3497C>T和m.3571C>T突变可能协同增加LHON的发生,考虑为LHON的易感位点。
- 朱金萍孟祥娟张赛高敏张娟娟赵福新刘晓玲童绎管敏鑫
- 关键词：LEBER遗传性视神经病变线粒体DNA
- 基于AMPK/mTOR信号通路的细胞自噬对大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖和凋亡的影响被引量：7
- 2022年
- 目的:探讨在低氧高二氧化碳(hypoxia and hypercapnia,HH)条件下,基于AMP活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路的细胞自噬的变化及其对大鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cells,PASMCs)增殖和凋亡的影响。方法:以大鼠PASMCs为研究对象,饥饿24 h后随机分为5组:正常对照(normal control,N)组、模型组(HH组)、溶剂二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)组(D组)、AMPK激动剂阿卡地新(acadesine;5-aminoimidazole-4-carboxamide riboside,AICAR)组(AI组)和AMPK抑制剂dorsomorphin(compound C,CC)组(CC组)。N组置于常氧环境(21%O_(2)、5%CO_(2)和74%N2)下培养24 h,其余4组预先加入相对应的干预药物置于HH条件(5%O_(2)、6%CO_(2)和89%N2)下培养24 h进行造模。造模结束后用CCK-8法测各组细胞活力;5-乙炔基-2’-脱氧尿苷(5-ethynyl-2’-deoxyuridine,EdU)法检测细胞增殖;TUNEL检测细胞凋亡;qPCR法检测微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)、p62及caspase-3的mRNA表达;免疫印迹法检测AMPK、p-AMPK、mTOR、p-mTOR、LC3、p62、caspase-3和增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)蛋白水平;透射电镜观察自噬小体。结果:与N组相比,HH组PASMCs活力增强,EdU阳性率增加,凋亡率降低;LC3的mRNA表达上调,p62和caspase-3的mRNA表达下调;p-AMPK/AMPK比值、LC3-II/LC3-I比值和PCNA蛋白表达上调,p-mTOR/mTOR比值及p62和caspase-3蛋白表达下调;电镜下观察到细胞内有少量自噬小体。与HH组相比,AI组PASMCs活力进一步增强,EdU阳性率增加,凋亡率降低;LC3的mRNA表达上调,p62和caspase-3的mRNA表达下调;p-AMPK/AMPK比值、LC3-II/LC3-I比值和PCNA蛋白表达上调,p-mTOR/mTOR比值及p62和caspase-3蛋白表达下调;电镜形态表现为细胞自噬小体数量增加。而CC组较HH组PASMCs活力和EdU阳性率显著降低,凋亡率显著升高;LC3的mRNA表达下调
- 宋正阳施晓倩田云娜王新雨张赛王肖婷张聪聪王万铁
- 关键词：细胞自噬哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路免疫印迹法乙炔基
