赵俊生
- 作品数：4 被引量：5H指数：1
- 供职机构：浙江大学动物科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金浙江省自然科学基金浙江省重点科技创新团队项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 基于鸡卵清蛋白启动子的纳豆激酶慢病毒表达载体表达特性的研究
- 2019年
- 纳豆激酶(nattokinase,NK)是一种有效的抗血栓药物。基于已构建的纳豆激酶慢病毒表达载体,旨在比较其在鸡输卵管上皮细胞和鸡胚成纤维细胞中特异性表达的有效性。提取含卵清蛋白启动子(ovalbumin promoter,OV2)和雌激素反应元件(estrogen response element,ERE)的pLV-OV2-ERE-NK-2A-EGFP重组质粒。通过PCR和双酶切进行初步鉴定,经生物公司测序、包装和滴定得转染传代培养的鸡输卵管上皮细胞和鸡胚成纤维细胞,并采用荧光显微镜和qPCR法检测细胞表达产物。结果表明,载体pLV-OV2-ERE-NK-2A-EGFP构建成功;且荧光显微镜下,鸡输卵管上皮细胞的绿色荧光多于成纤维细胞;qPCR检测发现 NK 正常表达。提示成功构建纳豆激酶慢病毒表达载体且在鸡输卵管上皮细胞中正常表达。
- 蔡薇吴志鹏赵俊生徐宁迎郭晓令
- 关键词：纳豆激酶慢病毒载体鸡胚成纤维细胞
- 鸡卵清蛋白启动子慢病毒载体构建及荧光定量PCR检测重组慢病毒滴度
- 2016年
- 构建鸡卵清蛋白启动子(OV 2.8kb)与含有eGFP基因的慢病毒表达载体,采用实时荧光定量PCR(QPCR)检测重组慢病毒滴度。将鸡卵清蛋白启动子基因OV连接到慢病毒载体p LVshRNA-eGFP中替换质粒上CMV promoter元件,经酶切、测序鉴定获得携带OV与eGFP融合基因的重组慢病毒质粒,用QPCR检测病毒浓度滴定。结果显示,重组慢病毒质粒p LVshRNA-OV-eGFP酶切鉴定结果与目的基因条带吻合,克隆测序结果与NCBI收录的OV基因序列完全一致。在QPCR试验过程中,发现空白组和载体组的溶解曲线和扩增曲线较好,证明基因组抽提和QPCR过程无问题。最终测得病毒滴度约为1.6×10~7IU/m L。成功构建了携带OV与eGFP融合基因的慢病毒表达载体,为进一步研究卵清蛋白启动子基因的相关功能提供了优质的稳定转染载体。
- 吴志鹏刘健赵俊生徐宁迎郭晓令
- 关键词：慢病毒载体实时荧光定量PCR病毒滴度
- 猪miR-let-7i的组织表达谱分析被引量：1
- 2015年
- Let-7是最早发现的miRNA之一,参与动物多个器官发育的调控过程,也在多种癌症发生中发挥抑癌作用。本研究采用Rt-qPCR(PCR)方法首先检测金华猪不同发育时期肝脏组织中let-7家族成员之一的miR-let-7i的表达变化,同时比较金华猪和大约克猪心、肝、脾、肺、肾、胰脏、小肠和皮脂中miR-let-7i的表达差异。结果表明:miR-let-7i在金华猪肝脏发育过程中表达总体趋势为胚胎期低于生长阶段,幼年期低于成年期;比较不同猪种间组织表达差异发现,在胚胎80d时,miR-let-7i在小肠中的表达量最高,在心、肝、脾、肺、小肠、皮脂中,金华猪的相对表达量极显著高于大约克(P<0.01),而在肾和胰脏中的表达却极显著低于大约克(P<0.01)。在出生后90日龄时,miR-let-7i在金华猪的心、肺和小肠中表达较高,在约克猪的胰、心和脾脏中表达较高;金华猪的肝、脾、胰脏中miR-let-7i的表达量极显著低于大约克(P<0.01),而在肺、肾、小肠、皮脂中极显著高于大约克(P<0.01)。本研究为探究miR-let-7i在动物发育过程的功能和分子机制奠定了基础。
- 赵俊生李艳华周辉云徐宁迎
