周辉云
- 作品数：19 被引量：62H指数：5
- 供职机构：浙江大学动物科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- PRLR、RBP_4基因与苏姜猪繁殖性能的相关性分析被引量：11
- 2011年
- 采用PCR-RFLP方法对71头苏姜猪的PRLR基因、RBP4基因的多态性进行了检测,分析不同多态性间繁殖性能的差异,探讨将PRLR基因、RBP4基因作为标记辅助选择用于苏姜猪核心群选育的可行性,从DNA水平上为苏姜猪的选育提供技术性支持。结果表明:PRLR、RBP4两个基因位点在苏姜五世代母猪中均存在多态性。在该试验中,PRLR基因、RBP4基因各自基因型的效应差异均不显著(P>0.05),合并基因型的效应显著(P<0.05),可以联合标记用于苏姜猪核心群的选育。
- 何庆玲王宵燕经荣斌李碧春王升智周辉云
- 关键词：苏姜猪PRLR基因RBP4基因繁殖性能
- 影响猪精子介导基因转移效果的因素研究
- 2012年
- 为优化猪精子载体法技术参数,利用荧光定量PCR、荧光显微镜检测和精液常规检测方法,分析不同DNA转染剂、不同孵育温度和不同形态DNA对猪精子转染外源DNA的影响。结果表明,PEI和TransFast转染剂能极显著提高猪精子转染效果,且PEI优于TransFast,而NanoFect转染剂包裹DNA不能转染精子。随着转染温度的升高,精子的活力和活率均明显下降,而转染率和内化外源DNA量基本保持稳定,而吸附外源DNA量呈下降趋势。环状DNA和线性化DNA在与精子共孵育后,两者的精子活力、活率、转染率和内化外源DNA量差异均不显著,精子吸附线性化DNA量极显著高于环状DNA量。综合分析表明,外源DNA形态对猪精子转染效果无显著影响;PEI和TransFast能够显著提高猪精子转染效果;共孵育温度以17℃为最佳,本结果为开展精子载体法制备转基因猪研究提供了基础试验依据。
- 宋成义吴晗周辉云谢雨琇李庆平高波王宵燕李碧春毛九德
- 关键词：精子
- 猪垂体特异性转录因子1基因cDNA的克隆及序列分析被引量：3
- 2009年
- 本试验根据公开发表的猪POU1F1基因序列设计1对引物,提取猪垂体总RNA,通过RT-PCR方法扩增出POU1F1基因cDNA全序列,扩增产物用琼脂糖凝胶检测为预期的876 bp特异性条带。将扩增产物克隆入PTZ57R/T载体进行序列测定。经DNAStar软件分析序列与已发表序列同源性为99.7%,克隆获得的序列为进一步对猪POU1F1基因不同拼接形式功能性研究奠定了基础。
- 孙丽亚宋成义高波赵芹王宵燕周智慧王升智周辉云李碧春
- 关键词：POU1F1CDNA克隆
- SPMI基因在公母猪生殖道的时空表达特性研究
- 2011年
- 为揭示猪精子运动抑制因子(Seminal plasma motility inhibitor,SPMI)基因在公母猪生殖道的时空表达特性,本研究运用定性RT-PCR分析了SPMI在生殖道的组织表达谱,利用半定量RT-PCR技术分析了SPMI在公猪精囊腺和尿道球腺组织的发育性表达。定性RT-PCR分析结果发现,SPMI基因在精囊腺中的表达丰度最高,在尿道球腺和子宫角中呈中等丰度表达,在前列腺、子宫颈和卵巢中的表达较弱,在其它生殖道组织未检测到mR-NA表达。半定量RT-PCR分析结果显示,SPMI基因在公猪精囊腺和尿道球腺中的发育性表达规律相似,都在初生时即启动,表达水平随着日龄的增加不断提高,直至性成熟(150日龄)。其中SPMI基因在精囊腺中的表达在60、90和150日龄均有显著提高(P<0.05);而在尿道球腺中,SPMI基因的表达在30、90和150日龄均有显著提高(P<0.05),而60日龄的表达较30日龄时有所提高,但差异不显著(P>0.05)。这些结果提示SPMI基因在公母猪生殖道呈广泛表达,其发育性表达呈日龄依赖性特点,表达水平在初情期至性成熟期有显著提高。
- 宋成义高波王宵燕吴晗周辉云李碧春陈国宏毛九德
- 关键词：生殖道RT-PCR
- 猪miR-let-7i的组织表达谱分析被引量：1
- 2015年
- Let-7是最早发现的miRNA之一,参与动物多个器官发育的调控过程,也在多种癌症发生中发挥抑癌作用。本研究采用Rt-qPCR(PCR)方法首先检测金华猪不同发育时期肝脏组织中let-7家族成员之一的miR-let-7i的表达变化,同时比较金华猪和大约克猪心、肝、脾、肺、肾、胰脏、小肠和皮脂中miR-let-7i的表达差异。结果表明:miR-let-7i在金华猪肝脏发育过程中表达总体趋势为胚胎期低于生长阶段,幼年期低于成年期;比较不同猪种间组织表达差异发现,在胚胎80d时,miR-let-7i在小肠中的表达量最高,在心、肝、脾、肺、小肠、皮脂中,金华猪的相对表达量极显著高于大约克(P<0.01),而在肾和胰脏中的表达却极显著低于大约克(P<0.01)。在出生后90日龄时,miR-let-7i在金华猪的心、肺和小肠中表达较高,在约克猪的胰、心和脾脏中表达较高;金华猪的肝、脾、胰脏中miR-let-7i的表达量极显著低于大约克(P<0.01),而在肺、肾、小肠、皮脂中极显著高于大约克(P<0.01)。本研究为探究miR-let-7i在动物发育过程的功能和分子机制奠定了基础。
- 赵俊生李艳华周辉云徐宁迎
- 重组大肠杆菌DH5α生长曲线的测定被引量：14
- 2010年
- 为了探讨重组大肠杆菌适宜的培养时间,试验将携带质粒的重组大肠杆菌DH5α单菌落液体培养至OD600值为0.6左右,按一定比例接种于LB液体培养基中进行培养,分别在0,1.5,3,4,6,8,10,12,14,16,18,20小时时取菌液,用分光光度计测定OD600值,以培养时间为横坐标、OD600值为纵坐标作重组菌生长曲线图,同时提取质粒比较不同培养时间质粒量的变化。结果表明:重组大肠杆菌DH5α的生长经历了迟缓期、对数期、稳定期、衰亡期4个时期,符合细菌生长的规律;重组大肠杆菌生长至平台期时提取质粒的量最多。
- 王升智高波周智慧周辉云吴晗岑宁
- 关键词：质粒DNA
- 精浆浓度对17℃保存下猪精子活率和活力的影响被引量：2
- 2011年
- 为了解精浆浓度对精子常温保存的影响,对含不同浓度精浆的商业化CXM稀释剂和自制稀释剂的精液于17℃下的保存效果进行比较。结果表明:当稀释剂为CXM时,25%精浆获得了最好的保存效果,含0、5%精浆也有较好的保存效果;而使用自制稀释剂时,含50%、75%精浆获得了较好的保存效果,其次是含25%精浆。说明在常温保存中一定浓度的精浆有利于维持精子的活力和活率,但这与稀释剂组成有关。在实际生产应用中,在稀释剂中约添加25%精浆对维持精子在常温保存中的活力和活率可能有较好效果。
- 宋成义周辉云查丽莉黄继荣吴晗
- 关键词：精浆精子活率
- 猪POU1F1基因启动子区多态分析及其与生长性状的关联被引量：6
- 2011年
- 【目的】获得猪POU1F1基因启动子区的多态信息,揭示其在不同品种中的分布特点,阐明其与生长性状的关联性。【方法】采用PCR克隆、DNA测序和PCR-RFLP技术进行POU1F1基因启动子区多态分析,利用一般线形模型分析其与生长性状的关联性。【结果】在POU1F1基因1.5 kb的启动子区域内发现5个多态位点;其中,5 bp短片段插入或缺失突变的A等位基因频率在引入品种猪中最高,在培育品种中中等,在中国地方品种最低。一般线形模型分析表明,该多态位点与猪的生长性状存在显著相关。多重比较分析发现,AA基因型个体的体高、体长、胸围和体重显著高于AB和BB基因型个体(P<0.05),而AB和BB基因型个体的体高、胸围和体重差异不显著(P>0.05),但AB基因型个体的体长显著高于BB基因型个体(P<0.05)。【结论】5 bp短片段插入或缺失突变的A等位基因是生长性状的优势等位基因,是生长性状可能的分子标记。
- 宋成义赵芹高波王宵燕吴晗周辉云经荣斌毛九德
- 关键词：POU1F1基因多态生长性状
- 若干精子抗原基因在猪生殖道及成熟精子中的mRNA表达研究
- [目的] 揭示若干精子抗原基因(SPAG1、SPAG5、SPAG6、SPAG11C和SPAG11E)在梅山公母猪生殖道及成熟精子中的mRNA时空表达规律.【方法】利用RT-PCR技术分析各基因在生殖道和精子中组织表达谱,...
- 宋成义高波吴晗王霄燕王升智周辉云陈国宏毛九德
- 关键词：精子抗原生殖道精子
- 精子抗原基因在猪生殖道及成熟精子中的表达特性被引量：4
- 2010年
- 【目的】揭示若干精子抗原基因(SPAG1、SPAG5、SPAG6、SPAG11C和SPAG11E)在梅山公母猪生殖道及成熟精子中的mRNA时空表达规律。【方法】利用RT-PCR技术分析各基因在生殖道和精子中组织表达谱,利用半定量RT-PCR分析其在初生至150d梅山公猪睾丸中的发育性表达特性。【结果】5个基因在梅山公母猪生殖道组织中呈现不同的表达特性。其中SPAG1在睾丸中表达丰度最高,在精囊腺、前列腺、附睾体、子宫角和输卵管呈现中等丰度表达,而在附睾尾、子宫颈和卵巢的表达信号较弱。SPAG5在睾丸中表达丰度最高,在前列腺、附睾体和子宫颈中表达信号较弱。而SPAG6在睾丸中高丰度表达,在输卵管中呈现中等丰度表达,在子宫角的表达信号很弱。SPAG11C在附睾体和睾丸中高水平表达,而SPAG11E则在附睾体和附睾尾中低水平表达。在成熟精子中只有SPAG11E有mRNA表达。SPAG1、SPAG5、SPAG6和SPAG11C基因在公猪睾丸中发育性表达分析表明,总体上所检测的4个精子抗原基因的表达水平都随着日龄增加而提高,但存在一些差异。其中SPAG1和SPAG11C呈现相似的表达规律,在初生和30日龄时表达相对较低,但在60、90、150日龄都有显著提高(P<0.05)。而SPAG5在初生和30日龄时表达也相对较低,在60和90日龄时均有显著提高(P<0.05),但150日龄时略有下降,但差异不显著。SPAG6在初生和30日龄时表达水平很低,至60日龄有显著提高(P<0.05),90日龄时维持这一水平,而到150日龄时则有显著下降(P<0.05)。【结论】SPAG1、SPAG5、SPAG6、SPAG11C和SPAG11E在梅山公母猪生殖道组织广泛表达,在睾丸组织中其mRNA表达水平变化与性发育相一致,SPAG11E在精子中存在低丰度mRNA表达。
- 宋成义高波吴晗王霄燕王升智周辉云陈国宏毛九德
- 关键词：精子抗原生殖道精子
