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长链非编码核糖核酸UCA-1对胰腺癌细胞侵袭转移能力的影响被引量：2: 2015年; 目的探讨尿路上皮癌胚抗原1(UCA-1)在胰腺癌细胞侵袭转移中的作用。方法采用实时荧光定量PCR检测5株胰腺癌细胞长链非编码核糖核酸UCA-1的表达;采用UCA-1表达质粒提高PaTu8988细胞的UCA-1水平,小干扰RNA用于降低BxPC-3细胞的UCA-1表达。用Transwell侵袭实验和迁移实验观察转染后的PaTu8988细胞和BxPC-3细胞的侵袭和迁移能力变化,Western blot检测基质金属蛋白酶2(MMP-2)和MMP-9的表达。结果 UCA-1差异性表达于5株胰腺癌细胞。过表达UCA-1后,PaTu8988细胞的MMP-2和MMP-9的蛋白水平均增加,侵袭和迁移能力增强(P<0.001);而干扰UCA-1后,BxPC-3细胞的MMP-2和MMP-9的蛋白表达均降低,侵袭和迁移能力减弱(P<0.001)。结论 UCA-1的高表达能增强胰腺癌细胞的体外侵袭转移能力。; 赵义张尤历王国英张行行龚爱华葛璐李杰倪鑫刘鑫徐岷; 关键词：胰腺癌

上调miR-200a的表达减弱TGF-β1刺激的大鼠胰腺星状细胞活化和胶原合成: 2015年; 目的探讨miR-200a对转化生长因子β1(TGF-β1)刺激的大鼠胰腺星状细胞(PSCs)活化和胶原蛋白合成的影响。方法用组织块法培养分离PSCs,免疫荧光染色检测结蛋白(desmin)、神经胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达鉴定PSCs;取新鲜培养的第2代PSCs,设空白对照组、TGF-β1组、TGF-β1+miR-NC组、TGF-β1+miR-200a mimic组,Western blot法和细胞免疫荧光染色法检测α-SMA和Ⅰ型胶原蛋白(collagenⅠ)的表达,荧光定量PCR检测α-SMA、collagenⅠmRNA及miR-200a的表达。结果 TGF-β1可刺激大鼠PSCs活化及促进胶原蛋白的合成(P<0.05),且呈时间依赖性;转染miR-200a mimic后,在相同浓度的TGF-β1刺激下,α-SMA和collagenⅠ的蛋白和mRNA表达明显降低(P<0.01)。结论上调miR-200a的表达,可减弱TGF-β1对大鼠PSCs活化和胶原蛋白合成的刺激作用,其可能的机制是抑制TGF-β1的生物学作用。; 张尤历王国英赵义李萍刘鑫倪鑫徐岷; 关键词：TGF-Β1 纤维化

血浆miRNA-21和miRNA-29c水平对非小细胞肺癌的诊断意义被引量：10: 2017年; 目的:探讨血浆miRNA-21、miRNA-29c水平对非小细胞肺癌(NSCLC)的诊断意义。方法:采用实时荧光定量PCR法检测56例NSCLC患者和47例良性肺病患者血浆miRNA-21和miRNA-29c的相对表达水平。建立受试者工作特征(ROC)曲线,根据ROC曲线下面积判断它们诊断NSCLC的效能。依据ROC曲线分析设定的临界值计算血浆miRNA-21和miRNA-29c诊断NSCLC的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值和准确性。并将这些结果与NSCLC患者血清癌胚抗原检测结果进行比较。结果:NSCLC患者血浆miRNA-21水平显著高于良性肺病患者(P<0.001),而血浆miRNA-29c水平明显低于良性肺病患者(P<0.001)。NSCLC患者血浆miRNA-21和miRNA-29c水平与肿瘤的临床(TNM)分期显著相关(P=0.008和P=0.011),血浆miRNA-21水平与肿瘤的分化程度也明显相关(P=0.001)。根据ROC曲线分析取miRNA-21和miRNA-29c诊断NSCLC的临界值分别为4.026和0.985,血浆miRNA-21诊断NSCLC的敏感性和特异性分别为76.8%和76.6%,血浆miRNA-29c诊断NSCLC的敏感性和特异性分别为78.6%和72.3%。血清癌胚抗原诊断NSCLC的敏感性明显低于miRNA-21和miRNA-29c,特异性相似。结论:血浆miRNA-21和miRNA-29c诊断肺癌的效能优于血清癌胚抗原,有可能成为诊断NSCLC的血液标志物。; 刘鑫李坚夏贤斌李前文王正军; 关键词：非小细胞肺癌血浆 MIRNA-21

下调长链非编码RNA PVT1表达对胰腺癌BxPC-3细胞凋亡、侵袭及转移的影响被引量：4: 2016年; 目的研究下调长链非编码RNA PVT1的表达对胰腺癌细胞增殖、凋亡及侵袭转移能力的影响。方法体外转染PVT1干扰序列si PVT1-1和si PVT1-2降低胰腺癌细胞系Bx PC-3 PVT1表达,同时转染阴性对照si PVT1-NC作为对照组。CCK-8实验检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,细胞划痕实验和Transwell实验检测细胞侵袭转移;qRT-PCR检测E-cadherin、N-cadherin、β-catenin、vimentin和PVT1 mRNA表达;Western blot检测凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2、caspase-3)和上皮间质转化相关蛋白(E-cadherin、N-cadherin、β-catenin、vimentin)表达。结果下调胰腺癌细胞Bx PC-3 PVT1表达能明显抑制细胞增殖、促进细胞凋亡和减少细胞侵袭转移数目(P<0.05);E-cadherin蛋白和分子水平升高,N-cadherin、β-catenin、vimentin蛋白和分子水平降低(P<0.05);Bax和caspase-3蛋白水平升高,而Bcl-2蛋白水平降低(P<0.05)。结论下调长链非编码RNA PVT1表达能抑制胰腺癌细胞增殖和侵袭转移能力,促进胰腺癌细胞凋亡,且能够逆转胰腺癌细胞上皮间质转化。; 张行行赵义王珏倪鑫刘鑫葛璐徐岷; 关键词：长链非编码RNA 胰腺癌上皮间质转化

长链非编码RNA UCA1对胰腺癌PANC-1细胞系侵袭转移的影响被引量：9: 2015年; 目的:探讨尿路上皮癌抗原1(urothelial carcinoma antigen 1,UCA1)在胰腺癌细胞中的表达及其对胰腺癌PANC-1细胞系侵袭转移的影响。方法:用荧光定量PCR法检测4种胰腺癌细胞系中UCA1的表达水平,选取PANC-1细胞系,将其随机分为对照组和实验组,对照组细胞转染空载Vector,实验组细胞转染UCA1表达质粒,比较两组细胞UCA1表达水平;Transwell迁移实验和Transwell侵袭实验分别检测两组细胞迁移和侵袭能力;蛋白质印迹检测两组细胞MMP14、MMP2和MMP9蛋白表达。结果:UCA1差异性表达于4种胰腺癌细胞系中;与对照组相比,实验组细胞的迁移和侵袭能力明显增强(P<0.01),细胞中MMP14、MMP2和MMP9的蛋白表达水平均明显增加(P<0.01)。结论:上调UCA1促进胰腺癌PANC-1细胞的体外侵袭转移。; 赵义张尤历张行行王国英龚爱华刘鑫徐岷; 关键词：胰腺癌肿瘤转移长链非编码RNA

转化生长因子-β_2诱导大鼠胰腺星形细胞活化及上皮间质转化的研究被引量：1: 2015年; 目的探讨转化生长因子-β2(TGF-β2)诱导大鼠胰腺星形细胞(PSCs)活化及上皮间质转化(EMT)的作用。方法组织块法分离、培养及鉴定大鼠PSCs后,10 ng/ml TGF-β2刺激PSCs 72 h,光镜下观察细胞形态学改变;免疫荧光染色及Western blot法检测α-SMA、Col-Ⅰ的蛋白表达;q RT-PCR及Western blot法分别检测E-caderin、Vimentin基因及蛋白的表达;荧光显微镜观察E-caderin和Vimentin在细胞内的表达情况。结果免疫荧光染色显示新分离PSCs神经胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)、结蛋白(desmin)表达阳性,α-SMA表达阴性,符合其生物学特性。TGF-β2处理PSCs后,光镜下观察细胞体积及胞核变大,伪足发达,脂滴消失;免疫荧光染色及Western blot结果显示α-SMA和Col-Ⅰ表达量显著增加,呈典型活化状态;q RT-PCR、Western blot及免疫荧光染色结果显示Vimentin的表达明显高于空白对照组,而E-caderin的表达明显降低(P<0.05)。结论 TGF-β2可诱导PSCs活化及上皮间质转化。; 张尤历李萍王国英赵义王国乙蔡菁郭柔玉刘鑫徐岷; 关键词：转化生长因子-Β2 胰腺星形细胞活化上皮间质转化

MicroRNA-429对TGF-β1诱导的大鼠胰腺星状细胞活化和上皮-间质转化的调控作用: 2015年; 目的探讨miR-429对大鼠胰腺星状细胞（PSCs）活化和上皮-间质转化（EMT）的调控作用.方法用组织块法提取、培养和分离PSCs,通过免疫荧光染色法检测结蛋白（desmin）、神经胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达鉴定PSCs.取新鲜分离的第2代PSCs,采用脂质体法将miR-429的模拟物（miR-429 mimic）和无意义小分子阴性对照片段（miR-NC）分别转染大鼠PSCs,再用10 μg/L TGF-β1刺激PSCs.采用蛋白质印迹法检测细胞a-SMA、波形蛋白（vimemin）、E-钙黏蛋白（E-cad）及EMT相关蛋白TGF-β1、Smad2/3、p-Smad2/3的表达量;实时荧光定量PCR法检测a-SMA、vimentin、E-cad mRNA和miR-429的表达量.结果培养后PSCs细胞体积变大,伪足发达,细胞间连接减少,脂滴消失,GFAP、desmin表达阳性,α-SMA表达阴性,符合星状细胞的生物学特征.TGF-β1刺激后,大鼠PSCs α-SMA、vimentin、E-cad蛋白的表达量分别为对照组的（1.369 ±0.878）、（1.518±0.041）、（0.549±0.076）倍,差异均有统计学意义（P值均＜0.05）.转染miR-429 mimic且经TGF-β1刺激后,PSCs的α-SMA、vimentin、E-cad mRNA表达量是转染miR-NC组的（0.423±0.038）、（0.652±0.043）、（2.235±0.045）倍,蛋白表达量是（0.683±0.053）、（0.548±0.049）、（1.548±0.038）倍,差异均有统计学意义（P＜0.05或＜0.01）;TGF-β/Smad通路的TGF-β1、p-Smad2/3的相对表达量是miR-NC组的（0.459±0.038）、（0.525±0.029）倍,差异均有统计学意义（P ＜0.05或＜0.01）.结论上调miR-429的表达可减弱TGF-β1对大鼠PSCs活化的影响及逆转EMT,其可能的机制是抑制TGF-β1介导的TGF-β/Smad信号转导通路。; 徐岷王国英赵义蔡菁倪鑫刘鑫张行行张尤历; 关键词：微RNAS 胰腺星形细胞上皮-间质转化

长链非编码RNA PCGEM1促进胰腺癌细胞增殖和迁移被引量：7: 2016年; 该文的目的为探讨长链非编码RNA PCGEM1(long non-coding RNA PCGEM1,lnc RNAPCGEM1)对胰腺癌细胞增殖和迁移的影响。通过荧光定量PCR检测三种胰腺癌细胞以及人胰腺癌组织和癌旁组织中PCGEM1的表达水平,分别在Bx PC3和Pa Tu8988细胞中转染p CDH-PCGEM1及其空载质粒p CDH,在SW1990细胞中转染si RNA和其对照si RNA,分别上调或下调PCGEM1在不同胰腺癌细胞中的表达;细胞克隆形成、CCK-8实验检测细胞增殖能力;Transwell实验检测细胞迁移能力;Western blot法检测MMP2、MMP9和E-钙黏着蛋白的蛋白表达以及荧光定量PCR检测MMP2和MMP9水平。结果表明,PCGEM1差异性表达于三种胰腺癌细胞中,其中SW1990表达水平相对较高,Bx PC3和Pa Tu8988表达水平相对较低。胰腺癌组织中PCGEM1水平高于癌旁组织。过表达PCGEM1后,细胞增殖和迁移能力增强,MMP2和MMP9的蛋白质水平增加,E-钙黏着蛋白的蛋白质水平降低;相反,降低PCGEM1表达,细胞增殖和迁移能力减弱,MMP2和MMP9的蛋白质水平降低,E-钙黏着蛋白的蛋白质水平升高。由此说明,lnc RNA PCGEM1可促进胰腺癌细胞的增殖和迁移。; 徐岷倪鑫葛璐刘鑫周海浪黄红梅蒋小猛彭琬昕张尤历龚爱华; 关键词：长链非编码RNA 胰腺癌增殖迁移

长链非编码RNA aHIF和ANRIL在胃癌中的表达被引量：5: 2016年; 目的:探讨长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)中的反义缺氧诱导因子(antisense hypoxia inducible factor,a HIF)和位于细胞周期激酶抑制因子4(INK4)基因座中反义非编码RNA(antisense noncoding RNA in the INK4 locus,ANRIL)在胃癌组织与血浆中的表达。方法:收集20例胃癌患者癌组织及对应的癌旁组织、33例胃癌患者和20例健康者血浆,采用实时荧光定量PCR测定胃癌组织和血浆中lncRNA a HIF和ANRIL的表达水平,分析lncRNA a HIF、ANRIL在血浆中的表达与胃癌组织表达的相关性。结果:胃癌组织中lncRNA a HIF和ANRIL的表达水平均明显高于癌旁组织(t分别为-4.463,-4.886,P均<0.01);胃癌患者血浆中lncRNA a HIF和ANRIL的表达水平均明显高于健康者(t分别为-4.232,-4.450,P<0.01),且与胃癌组织中的表达水平呈正相关(r分别为0.536,0.524,P<0.05)。结论:lncRNA a HIF和ANRIL在胃癌组织和患者血浆中均高表达,且血浆与组织中的表达水平呈正相关。; 刘鑫张尤历秦岩倪鑫龚爱华张行行徐岷; 关键词：胃癌长链非编码RNA

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刘鑫

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