杨剑峰
- 作品数：12 被引量：12H指数：2
- 供职机构：苏州大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 免疫性血小板减少性紫癜患者血浆协同刺激分子B7-H2和B7-H3与血小板自身抗体之间的相关性分析被引量：3
- 2015年
- 目的:探讨免疫性血小板减少性紫癜(ITP)患者血浆中的协同刺激分子B7-H2和B7-H3与血小板膜糖蛋白自身抗体水平之间是否具有相关性。方法:选取2012年6月至2013年8月期间于苏州大学附属第一医院就诊的ITP患者61例及同期健康体检者25例,通过流式免疫微球(FCIA)方法检测血浆中血小板5种糖蛋白(GPⅨ、GPⅠb、GPⅢa、GPⅡb及P选择素)的自身抗体,同时采用酶联免疫吸附(ELISA)方法检测血浆中可溶性协同刺激分子B7-H2(s B7-H2)和B7-H3(s B7-H3)水平,采用SPSS软件进行统计分析。结果:ITP患者血浆中5种血小板膜糖蛋白的自身抗体水平明显升高(P<0.01);ITP患者血浆s B7-H2水平升高(P<0.05),s B7-H3无明显变化;相关性分析显示,s B7-H3与血小板P-选择素自身抗体呈负相关(r=-0.46,P<0.05),并且s B7-H2和s B7-H3水平在P-选择素自身抗体阳性的ITP患者中降低(P<0.05);ITP患者血小板计数与s B7-H2水平之间呈负相关(r=-0.3907,P<0.01)。结论:ITP患者血浆中可溶性协同刺激分子s B7-H2升高,s B7-H3水平与P选择素自身抗体有关,提示协同刺激分子B7-H2和B7-H3可能参与了ITP自身免疫的病理机制。
- 左斌赵赟霄杨剑峰何杨
- 关键词：免疫性血小板减少性紫癜协同刺激分子自身抗体P选择素
- 人血清白蛋白-干扰素α2b融合蛋白在CHO细胞中的表达被引量：5
- 2016年
- 干扰素α2b(interferonα2b,IFNα2b)是一种用于病毒性疾病和肿瘤性疾病治疗的多功能细胞因子,因其在体内的半衰期短限制了其在临床上的应用。将IFNα2b连接到人血清白蛋白(human serum albumin,HSA)的C端,构建融合蛋白HSA-IFNα2b。构建含融合蛋白的真核表达质粒p MH3/HSA-IFNa2b,经电转的方法转入中国仓鼠卵巢(Chinese hamster ovary,CHO)细胞中。经G418抗性压力筛选和目的蛋白的表达量筛选,最终获得一株高表达的稳定细胞株(CHO/p MH3/HSA-IFNa2b)。表达的目的蛋白经Western blot验证显示,产物具有IFNα2b和HSA的双抗原性。经悬浮驯化稳定后,通过批次筛选得到一株稳定的高克隆表达株,产量约为65mg/L,进一步选取高表达克隆株在悬浮驯化中不同代数进行批次培养,不同代数之间蛋白质的表达量和生长情况没有明显的差异,获得一株稳定遗传表达的单克隆细胞株,3L摇瓶的流加培养结果显示,最佳发酵时间为15天,蛋白质表达量为121mg/L。经离心获得的发酵液,经两步纯化后获得蛋白质纯度高达96.8%的目的蛋白,总回收率为22.3%。参照《中国药典》2015版对IFNα2b的检测方法,结果显示,CHO表达的HSA-IFNα2b比活性为4.16×106IU/mg。首次将HSA-IFNα2b在哺乳动物细胞CHO中构建表达,表达获得高活性的HSA-IFNα2b融合蛋白。
- 李成媛张晶晶钱凯缪亚娜蔡燕飞杨剑峰何杨金坚
- 关键词：人血清白蛋白干扰素Α2B中国仓鼠卵巢细胞
- 血栓与出血性疾病相关抗体诊疗药物的研发及其临床应用
- 阮长耿何杨江淼赵益明季顺东杨剑峰沈飞赵贇霄费敏
- 抗体药物以其高特异性、有效性和安全性正在发展成为一大类新型诊断和治疗药剂。多年来，我们依据在抗体技术领域的积累，研制了一系列以血栓和止血相关蛋白为靶点、以"SZ（苏州）"冠名的单克隆抗体和基因工程抗体。通过产学研结合，这...
- 关键词：
- 关键词：出血性疾病基因工程抗体抗体药物诊断试剂
- 可溶性活化matriptase-2抑制乳腺癌细胞侵袭被引量：1
- 2016年
- 目的探讨可溶性活化的matriptase-2对乳腺癌细胞的侵袭作用及其可能机制。方法构建表达matriptase-2胞外区片段且与C末端V5标签形成融合表达的真核表达质粒,转染CHO卵巢细胞,潮霉素筛选稳定表达重组蛋白的细胞克隆,收集上清液过镍琼脂糖凝胶柱。采用Western blot法鉴定matriptase-2活化,Transwell侵袭实验观察重组可溶性活化的matriptase-2对MDA-MB-231乳腺癌细胞侵袭能力的影响,Western blot法检测MMP-9的表达。结果建立了稳定分泌matritpase-2蛋白的CHO细胞克隆,可溶性matritpase-2蛋白过镍柱后自身活化。可溶性活化的matripase-2蛋白能显著抑制MDA-MB-231细胞的侵袭能力以及MMP-9的表达。结论可溶性活化的matriptase-2可能通过降低MMP-9的表达,从而抑制乳腺癌细胞的体外侵袭作用。
- 杨剑峰左斌陈颖何杨
- 关键词：乳腺癌
- SMAD7在多发性骨髓瘤中的表达及对细胞增殖和耐药的影响被引量：1
- 2022年
- 目的·分析Sma和Mad相关蛋白7 (Sma-and Mad-related protein 7,SMAD7)在多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)中的表达,以及其对MM细胞的增殖和耐药的影响。方法·获取基因表达综合(gene expression omnibus,GEO)数据库中的3个数据集,分析SMAD7在健康捐献者和MM患者中的差异表达。通过收集8例健康捐献者和20例MM患者的骨髓标本,采用实时荧光定量PCR (quantitative real-time PCR,qPCR)检测骨髓CD138+细胞中SMAD7 mRNA的相对表达,并分析其与患者临床资料的关系。在MM细胞KMS11中过表达SMAD7后,通过CCK8实验、细胞周期实验观察SMAD7对MM细胞增殖的影响。采用不同浓度的硼替佐米处理过表达SMAD7的KMS11细胞后,观察SMAD7对MM细胞的耐药影响及细胞的凋亡情况。结果·数据集中SMAD7表达数据的分析显示,与健康捐献者相比,SMAD7在MM患者中表达较高(均P<0.05)。qPCR检测结果显示,SMAD7 mRNA相对表达水平在MM患者中有上调(P=0.002),但未显示出与临床资料间存在关联。与对照细胞相比,过表达SMAD7后,KMS11的细胞活力均较高(均P<0.05);且细胞周期分布亦发生了变化,S期细胞的比例有所下降(P=0.016)、G2/M期细胞的比例有所上升(P=0.005);而经硼替佐米处理后,过表达SMAD7细胞的药物敏感性及凋亡水平均较低。结论·SMAD7在MM中表达上调,过表达SMAD7可促进MM细胞的增殖和耐药能力。
- 丁贺曹杨琳何杨魏星杨剑峰
- 关键词：多发性骨髓瘤细胞增殖硼替佐米
- 重组人凝血因子Ⅶ在CHO细胞中的稳定表达、纯化及功能鉴定被引量：1
- 2014年
- 目的：真核表达及纯化重组人凝血因子Ⅶ（rFⅦ）。方法通过PCR方法扩增FⅦ全长cDNA，克隆入真核表达载体pcDNA3.0，利用脂质体将FⅦ基因与二氢叶酸还原酶基因共转染CHO-dhfr-/-细胞，采用氨甲喋呤药物加压，Western blot方法筛选获得稳定高表达细胞克隆。将高表达细胞克隆在摇瓶中无血清悬浮驯化培养，收集细胞培养上清，通过离子交换和亲和层析两步法进行纯化并对纯化产物进行活性鉴定。结果在CHO细胞中成功表达了rFⅦ，无血清悬浮培养条件下表达量可达3 mg·L-1·d-1，成功纯化了rFⅦ，SDS-PAGE凝胶电泳显示分子质量约50 kDa的单一多肽，生物学活性试验证实该纯化产物具有促凝活性。结论成功表达并纯化了rFⅦ，为进一步研制活化凝血因子Ⅶ药物奠定了基础。
- 杨剑峰何杨阮长耿
- 关键词：CHO细胞
- UNC5B单克隆抗体的制备及对黑素瘤细胞体外迁移能力的影响被引量：1
- 2015年
- 目的制备非协调性分子5同源蛋白B(UNC5B)的单克隆抗体(mAb),分析其功能。方法将UNC5B基因片段与原核表达载体pET-32a连接,连接产物转化大肠杆菌BL21(DE3),进行原核诱导表达并纯化重组蛋白。用UNC5B重组蛋白免疫BALB/c小鼠,经杂交瘤技术筛选可稳定分泌抗UNC5B的杂交瘤细胞株,并用Western blot法、ELISA和流式细胞术鉴定。利用细胞划痕实验观察UNC5BmAb对黑素瘤细胞迁移能力的影响。结果表达并纯化了UNC5B重组蛋白;筛选出1株高效价的2C9mAb,通过ELISA、Western blot法和流式细胞术证实该m Ab特异性识别UNC5B;划痕实验证明在netrin-1存在的条件下,UNC5BmAb可促进黑素瘤细胞迁移。结论成功制备了UNC5B的特异性m Ab,在netrin-1存在时,该抗体可促进黑素瘤细胞迁移。
- 左元玲杨剑峰何杨赵益明
- 关键词：蛋白纯化单克隆抗体细胞迁移
- 血管内皮钙黏蛋白抗原表位、抗体及其应用
- 本发明涉及分子生物学及免疫学技术领域，尤其涉及血管内皮钙黏蛋白抗原表位、抗体及其应用。本发明提供了血管内皮钙黏蛋白抗原表位、抗体及其应用。该抗原表位氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，位于CDH5蛋白的N端，具有更高...
- 何杨丁洁杨剑峰
- 文献传递
- 血管内皮钙黏蛋白抗原表位、抗体及其应用
- 本发明涉及分子生物学及免疫学技术领域，尤其涉及血管内皮钙黏蛋白抗原表位、抗体及其应用。本发明提供了血管内皮钙黏蛋白抗原表位、抗体及其应用。该抗原表位氨基酸序列如SEQ？ID？NO:1所示，位于CDH5蛋白的N端，具有更高...
- 何杨丁洁杨剑峰
- 抗血小板膜糖蛋白Ibα单克隆抗体的人源化及基于膜糖蛋白Ibα结构的活性小分子化合物研究
- 第一部分抗血小板膜糖蛋白Ibα单克隆抗体的人源化研究
研究背景血小板膜糖蛋白/(GP/) Ibα是血小板特异性的跨膜糖蛋白,高剪切力条件下在血管性血友病因子/(VWF/)的介导下与血管损伤部位暴露的胶原结合,起...
- 杨剑峰
- 关键词：嵌合抗体CHO细胞血小板化合物
- 文献传递
