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刘玉林

作品数：8 被引量：13H指数：2
供职机构：长春生物制品研究所更多>>
发文基金：吉林省科技发展计划基金吉林省重大科技攻关项目国家高技术研究发展计划更多>>
相关领域：医药卫生生物学更多>>

合作作者

文献类型

  • 8篇中文期刊文章

领域

  • 5篇医药卫生
  • 4篇生物学

主题

  • 5篇生长激素
  • 5篇激素
  • 4篇人生长激素
  • 4篇融合蛋白
  • 3篇蛋白
  • 3篇重组人生长激...
  • 3篇FC融合蛋白
  • 3篇病毒
  • 2篇生物反应
  • 2篇生物反应器
  • 2篇戊型
  • 2篇戊型肝炎
  • 2篇反应器
  • 2篇肝炎
  • 2篇CHO细胞
  • 2篇纯化
  • 1篇毒性肝炎
  • 1篇疫苗
  • 1篇原核表达
  • 1篇生殖

机构

  • 4篇长春生物制品...
  • 4篇长春生物制品...
  • 1篇长春理工大学
  • 1篇吉林大学第二...

作者

  • 8篇刘玉林
  • 4篇刘景会
  • 4篇俞露
  • 4篇刘涵
  • 3篇王莹
  • 2篇常东英
  • 2篇曹玉锋
  • 1篇陈子杨
  • 1篇杨红育
  • 1篇张宇
  • 1篇李雨桐
  • 1篇韩顺子
  • 1篇乔宏雷
  • 1篇常军亮
  • 1篇龚士卿
  • 1篇张健
  • 1篇王甲男
  • 1篇褚迪
  • 1篇徐晓明
  • 1篇刘晨

传媒

  • 8篇中国生物制品...

年份

  • 1篇2022
  • 3篇2020
  • 1篇2016
  • 2篇2015
  • 1篇2014
共 8 条 记 录，以下是 1-8
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排序方式：
表达长效重组人生长激素-Fc融合蛋白的CHO细胞培养工艺的优化及放大
2020年
目的优化表达长效重组人生长激素-Fc(recombiant human growth hormone-Fc,rhGH-Fc)融合蛋白的CHO细胞培养工艺,并进行初步工艺放大。方法采用7 L生物反应器培养表达rhGH-Fc融合蛋白的CHO细胞,操作参数:转速200 r/min,温度37℃,pH 7.2±0.1,溶氧值(DO)40%。通过改变对数增长期的pH(7.2±0.1降至6.9±0.1)及平台期降温幅度(37℃降至30及33℃),检测培养过程中细胞密度、细胞活率、培养液渗透压、葡萄糖及乳酸水平、以蛋白表达量为指标,优化7 L生物反应器培养工艺。应用优化的最佳工艺进行14 L线性放大,通气量分别设置为0.5、0.1及0.03 SLPM,检测蛋白表达量。结果7 L生物反应器培养工艺最佳pH为6.9±0.1,最佳温度为33℃,该工艺下蛋白表达量高达1200 mg/L;14 L生物反应器培养工艺最佳通气量为0.03 SLPM,该工艺下蛋白表达量为880 mg/L。结论成功优化了表达rhGH-Fc融合蛋白的CHO细胞7 L生物反应器的培养工艺,并实现了14 L生物反应器的放大,本实验为后续rhGH-Fc融合蛋白的大规模生产奠定了基础。
薛毅勇许佳慧俞露富瑞丽王莹刘玉林常东英刘涵
关键词：重组人生长激素FC融合蛋白CHO细胞生物反应器
重组戊型肝炎疫苗的生殖毒性试验
2014年
目的探讨重组戊型肝炎疫苗对大鼠的生殖毒性。方法将Wistar雌性大鼠分为4组:低剂量组(每只20μg HEV)、高剂量组(每只40μg HEV)、生理盐水对照组及佐剂对照组,每组30只。雌鼠于交配前给药2次,初次给药后2周进行2次给药,2次给药后1周,进行雌雄鼠合笼交配,于妊娠7和14 d进行3、4次给药。每天观察雌鼠一般临床症状;交配前每周称雌鼠体重1次,交配后每周称体重2次,每周定期测定1次摄食量;于妊娠21 d安乐死孕鼠,分离出胎仔,检测疫苗对雌鼠生殖能力、胎仔发育、胎仔骨化程度、胎仔内脏畸形的影响,取孕鼠和胎仔血液,分离血清,ELISA法检测抗HEV Ig G抗体水平。结果各组大鼠精神状态未见异常,皮毛光亮,灵敏,大小便色正成形,注射局部未见充血、肿胀、溃烂、硬结等;疫苗对孕鼠体重、摄食量均无明显影响(P<0.05);各剂量组窝平均着床数、窝平均黄体数、窝平均活胎数、受孕率、活胎率、吸收胎率、死胎率、畸胎率与生理盐水对照组和佐剂对照组相比,差异均无统计学意义(P>0.05);各剂量组胎仔身长、尾长、体重、胎盘重和性别比与生理盐水对照组和佐剂对照组相比,差异均无统计学意义(P>0.05);各剂量组胎仔上枕骨的骨化程度均在0级和Ⅰ级正常范围以内,胸骨骨化不全率与生理盐水及佐剂对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05);各组胎仔内脏均未见畸形;孕鼠及胎仔血清中均检测到抗HEV Ig G抗体。结论重组戊型肝炎疫苗对孕鼠及胎仔安全、有效。
王甲男曹玉锋陈子杨李雨桐刘玉林
关键词：戊型病毒性肝炎疫苗生殖毒性
长效重组人生长激素-Fc融合蛋白纯化工艺的建立被引量：1
2020年
目的建立长效重组人生长激素-Fc(recombiant human growth hormone-Fc,rhGH-Fc)融合蛋白的纯化工艺。方法rhGH-Fc融合蛋白细胞培养液经离心、低pH处理、过滤、浓缩预处理后,再经Protein-A亲和层析、CM阳离子交换层析、Q HP阴离子交换层析进行纯化,同时检测rhGH-Fc融合蛋白的蛋白含量、纯度、等电点及宿主蛋白、宿主DNA、Protein-A残留量等指标。结果Protein-A亲和层析、CM阳离子交换层析、Q HP阴离子交换层析纯化产物的蛋白含量分别为145、132、92.4 mg,纯度分别为95.40%、95.90%和99.19%,宿主蛋白残留量分别为2500、864和71 ng/mg,宿主DNA残留量分别为329、0.56和0.12 ng/mg,Protein-A残留量分别为24.5、3.2和0 ng/mg。rhGH-Fc融合蛋白相对分子质量约97300,等电点范围为5.5~6.5,可与鼠抗人生长激素(human growth hormone,hGH)抗体发生特异性结合。结论成功建立了rhGH-Fc融合蛋白的纯化工艺,该工艺的纯化产物回收率及纯度均较高,本实验为rhGH-Fc融合蛋白的大规模生产奠定了理论基础。
郭胜苍俞露富瑞丽王莹刘玉林张宇王江林刘涵
关键词：重组人生长激素融合蛋白纯化
表达长效生长激素的CHO细胞培养工艺的优化及放大被引量：1
2022年
目的在NewBrunSwick31014 L生物反应器中培养表达重组人长效生长激素(recombinant human growth hormone Fc fusion protein,rhGH-Fc)的CHO细胞,优化工艺参数以提高表达量,并进行NewBrunSwick31014 L到New-BrunSwick51040 L生物反应器的工艺放大。方法在原有14 L培养工艺基础上,调节转速、通气速率等参数,并对参数调整时期进行工艺优化。通过对渗透压、乳酸、铵离子、钾离子等代谢过程产物的检测来确保代谢正常,利用HPLC法测定表达量。再根据经验公式算出可线性放大的体积依赖型参数,保持原有培养方案及补料策略不变的情况下,结合不同放大经验方法确定操作窗口,从而进行工艺放大。结果14 L生物反应器优化工艺乳酸累积量低于20 mmol/L、最终铵离子累积量为8 mmol/L、钾离子累积量为14 mmol/L、渗透压为425 osmol/kg,降温后比耗糖速率为0.12 g/(10^(9) cells·d),表达量为0.9 g/L。经检测,放大至40 L生物反应器,整个培养过程耗糖曲线及代谢产物均与14 L生物反应器中一致,表达量为1.0 g/L。结论成功优化了rhGH-Fc工程细胞大规模培养的工艺,并进行了规模放大,为rhGH-Fc的后续开发奠定了基础。
梁久佳刘玉林刘涵俞露张凯宁刘景会李利
关键词：生长激素FC融合蛋白CHO细胞生物反应器
rhGH-Fc工程细胞的构建及筛选被引量：5
2016年
目的研制具有较长半衰期的长效重组人生长激素(recombinant human growth hormone,rhGH),构建并筛选出高表达rhGH-Fc免疫融合蛋白的细胞株。方法将hGH基因与特异位点突变后的人抗体IgG4Fc段用柔性linker连接,克隆至GS双表达载体上,构建重组表达质粒,经两次双酶切鉴定及测序分析后,将构建正确的质粒稳定转染CHO-k1细胞。通过逐渐提高蛋氨酸磺酰胺(methionine sulphoximine,MSX)浓度,ELISA法筛选高表达的细胞株;利用亲和层析初步纯化目的蛋白,并进行SDS-PAGE、HPLC、等电聚焦电泳分析;通过大鼠去垂体法测定长效rhGH的生物学活性,比较本课题研制的长效GH与其他普通GH的半衰期。结果重组质粒phGH-Fc-1经两次双酶切及测序鉴定,证明构建正确;成功筛选出高表达rhGH-Fc融合蛋白的细胞株,表达量可达1g/L;纯化的目的蛋白相对分子质量大小及等电点均与理论值一致,纯度可达95%以上;经大鼠去垂体体内活性测定,其比活为1.1IU/mg,依大鼠体重增长情况判断,其生物半衰期高于普通rhGH。结论成功构建并筛选出高表达长效rhGH的工程株,为后续长效rhGH的研制奠定了基础。
俞露刘玉林申兆兴刘涵龚士卿王莹吕效宇王诗琪张红刘景会
关键词：人生长激素半衰期
HEV ORF2截短融合蛋白的原核表达及其免疫原性
2020年
目的原核表达3型戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)第2个开放阅读框(open reading frame 2,ORF2)截短融合蛋白(HEV3-179-Fe),并检测其免疫原性。方法分别扩增HEV3-179和Fe蛋白基因片段,经Overlap PCR法连接并扩增,克隆至载体pET-28a,构建重组表达质粒pET-28a-HEV179-Fe,将其转化感受态E.coli BL21(DE3),取阳性菌株,IPTG诱导表达融合蛋白HEV3-179-Fe,进行10%SDS-PAGE分析。目的蛋白经镍离子金属鳌合亲和层析纯化后,加入硫酸铵进行病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)重构,置电镜下观察。HEV3-179-Fe蛋白VLPs与氢氧化铝佐剂吸附后免疫小鼠,ELISA法测定效价,以评价HEV ORF2截短融合蛋白的免疫原性。结果重组表达质粒pET-28a-HEV3-179-Fe构建正确。目的蛋白HEV3-179-Fe相对分子质量约40000,主要以包涵体形式存在,表达量均达35%以上,纯度约95%,可与鼠抗HEV 3多抗发生特异性反应。硫酸铵重构后于电镜下可见直径约20 nm的VLPs,其免疫小鼠的血清效价达1∶4800000以上。结论原核表达了HEV3-179-Fe,且在小鼠体内具有较好的免疫原性。本实验为以HEV ORF2-179蛋白为基础的VLPs基因工程疫苗的研发奠定了基础。
周永飞乔宏雷赵丹莹唐剑光常东英韩顺子常军亮张健刘玉林曹玉锋
关键词：戊型肝炎病毒基因重组原核表达免疫原性
重组人生长激素的分离纯化及其结构确证被引量：5
2015年
目的对重组人生长激素(recombinant human growth hormone,rh GH)进行分离纯化,并进行结构确证。方法取rh GH工程菌菌体,进行初步纯化(低渗抽提法、盐析法)及层析纯化(Sephadex G-25分子排阻层析、DEAESephadex.F.F离子交换层析、Phenyl-Sepharose.F.F疏水层析、Phenyl S-100HR分子排阻层析),收集纯化产物,进行15%SDS-PAGE分析、相关蛋白含量检测、高分子蛋白含量检测,并进行分子量检测、氨基酸组成分析、N-末端氨基酸序列分析、C-末端氨基酸序列分析和等电聚焦电泳。结果纯化产物的相对分子质量22 125,纯度可达99.5%以上,rh GH蛋白总收率为13.36%,相关蛋白含量为1.55%,高分子蛋白含量低于0.1%;相对分子质量、氨基酸组成、N-末端氨基酸序列、C-末端氨基酸序列及等电点等均与rh GH国际标准品一致。结论纯化后获得了高纯度的rh GH蛋白,该纯化工艺简单、高效,为本产品的工业化生产奠定了基础。
刘景会刘玉林刘晨徐晓明杨红育李利
关键词：人生长激素纯化结构确证
截短型人乳头瘤病毒58型L1蛋白在昆虫细胞中的表达被引量：2
2015年
目的利用昆虫细胞杆状病毒表达系统构建含截短型人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)58型主要衣壳蛋白L1基因的重组杆状病毒,并在Sf9细胞中表达。方法从NCBI中获得HPV 58 L1基因序列,应用Clustal X2软件进行序列比对后,确定相对保守的目的基因序列;人工合成HPV 58 L1基因片段,PCR法获得截短型HPV58 L1-1基因,克隆至p Fast Bac-1载体中,构建重组供体质粒p FB-HPV 58 L1-1,转化大肠埃希菌DH10Bac,构建重组Bacmid-HPV 58 L1-1,转染Sf9细胞,获得第1代(P1)重组杆状病毒BV-HPV 58 L1-1,扩增后采用快速滴定法测定病毒滴度;将重组杆状病毒感染Sf9细胞,表达HPV 58 L1-1蛋白,并进行Western blot分析和透射电镜观察。结果Bacmid-HPV 58 L1-1经PCR及测序鉴定构建正确;P2重组杆状病毒的滴度可达1.0×108 pfu/ml;HPV 58 L1-1在Sf9昆虫细胞中的表达产物经Western blot检测,可见相对分子质量约55 000的特异性反应条带,电镜观察可见L1蛋白自组装形成病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)。结论成功在昆虫细胞中表达了HPV 58 L1-1蛋白,并自组装为VLPs,为预防型HPV疫苗的研究奠定了基础。
刘景会刘玉林褚迪车薇薇
关键词：L1蛋白杆状病毒SF9细胞病毒样颗粒
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