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栀子多糖的分离纯化及其基本性质被引量：22: 1993年; 栀子经脱脂热水提取,Sevage 法脱蛋白质,乙醇沉淀得粗制品多糖 GPS1.经 DEAE—纤维素(DE—52)层析得 GPS2和 GPS3 2个组分.分别经 Sephadex G—200层析进一步纯化得精品GPS_4和 GPS_5.玻璃纤维纸电泳、乙酸纤维薄膜电泳和琼脂糖电泳均显示单一条带.GPS_4和 GPS_5不含蛋白质和核酸物质.用 SepbadeX G—150层析法测得 GPS_4和 GPS_5的平均分子量分别为14000和10000.体外试验表明此多糖对肉瘤 S—180和腹水肝癌细胞生长均有一定的抑制作用.; 孟延发刘景会李志孝王秉峰敬兰花陈耀祖; 关键词：栀子多糖纯化

酶标法检测基因工程干扰素半成品中残余宿主菌蛋白含量被引量：1: 1999年; 基因工程干扰素是一类具有抗病素、抗肿瘤和免疫调节作用的细胞因子，被广泛地应用于临床治疗中。根据《中国生物制品规程》基因工程干扰素半成品中残余宿主菌蛋白含量小于总蛋白量的２的要求，我们建立了酶标法用于该项目的检定［１，２］。１材料与方法１．１包被抗体...; 石晓丽刘景会王东倩万里姚为民张雪梅刘畅盛君; 关键词：干扰素酶标法

表达长效生长激素的CHO细胞培养工艺的优化及放大被引量：1: 2022年; 目的在NewBrunSwick31014 L生物反应器中培养表达重组人长效生长激素(recombinant human growth hormone Fc fusion protein,rhGH-Fc)的CHO细胞,优化工艺参数以提高表达量,并进行NewBrunSwick31014 L到New-BrunSwick51040 L生物反应器的工艺放大。方法在原有14 L培养工艺基础上,调节转速、通气速率等参数,并对参数调整时期进行工艺优化。通过对渗透压、乳酸、铵离子、钾离子等代谢过程产物的检测来确保代谢正常,利用HPLC法测定表达量。再根据经验公式算出可线性放大的体积依赖型参数,保持原有培养方案及补料策略不变的情况下,结合不同放大经验方法确定操作窗口,从而进行工艺放大。结果14 L生物反应器优化工艺乳酸累积量低于20 mmol/L、最终铵离子累积量为8 mmol/L、钾离子累积量为14 mmol/L、渗透压为425 osmol/kg,降温后比耗糖速率为0.12 g/(10^(9) cells·d),表达量为0.9 g/L。经检测,放大至40 L生物反应器,整个培养过程耗糖曲线及代谢产物均与14 L生物反应器中一致,表达量为1.0 g/L。结论成功优化了rhGH-Fc工程细胞大规模培养的工艺,并进行了规模放大,为rhGH-Fc的后续开发奠定了基础。; 梁久佳刘玉林刘涵俞露张凯宁刘景会李利; 关键词：生长激素 FC融合蛋白 CHO细胞生物反应器

rhGH-Fc工程细胞的构建及筛选被引量：5: 2016年; 目的研制具有较长半衰期的长效重组人生长激素(recombinant human growth hormone,rhGH),构建并筛选出高表达rhGH-Fc免疫融合蛋白的细胞株。方法将hGH基因与特异位点突变后的人抗体IgG4Fc段用柔性linker连接,克隆至GS双表达载体上,构建重组表达质粒,经两次双酶切鉴定及测序分析后,将构建正确的质粒稳定转染CHO-k1细胞。通过逐渐提高蛋氨酸磺酰胺(methionine sulphoximine,MSX)浓度,ELISA法筛选高表达的细胞株;利用亲和层析初步纯化目的蛋白,并进行SDS-PAGE、HPLC、等电聚焦电泳分析;通过大鼠去垂体法测定长效rhGH的生物学活性,比较本课题研制的长效GH与其他普通GH的半衰期。结果重组质粒phGH-Fc-1经两次双酶切及测序鉴定,证明构建正确;成功筛选出高表达rhGH-Fc融合蛋白的细胞株,表达量可达1g/L;纯化的目的蛋白相对分子质量大小及等电点均与理论值一致,纯度可达95%以上;经大鼠去垂体体内活性测定,其比活为1.1IU/mg,依大鼠体重增长情况判断,其生物半衰期高于普通rhGH。结论成功构建并筛选出高表达长效rhGH的工程株,为后续长效rhGH的研制奠定了基础。; 俞露刘玉林申兆兴刘涵龚士卿王莹吕效宇王诗琪张红刘景会; 关键词：人生长激素半衰期

重组人生长激素的分离纯化及其结构确证被引量：5: 2015年; 目的对重组人生长激素(recombinant human growth hormone,rh GH)进行分离纯化,并进行结构确证。方法取rh GH工程菌菌体,进行初步纯化(低渗抽提法、盐析法)及层析纯化(Sephadex G-25分子排阻层析、DEAESephadex.F.F离子交换层析、Phenyl-Sepharose.F.F疏水层析、Phenyl S-100HR分子排阻层析),收集纯化产物,进行15%SDS-PAGE分析、相关蛋白含量检测、高分子蛋白含量检测,并进行分子量检测、氨基酸组成分析、N-末端氨基酸序列分析、C-末端氨基酸序列分析和等电聚焦电泳。结果纯化产物的相对分子质量22 125,纯度可达99.5%以上,rh GH蛋白总收率为13.36%,相关蛋白含量为1.55%,高分子蛋白含量低于0.1%;相对分子质量、氨基酸组成、N-末端氨基酸序列、C-末端氨基酸序列及等电点等均与rh GH国际标准品一致。结论纯化后获得了高纯度的rh GH蛋白,该纯化工艺简单、高效,为本产品的工业化生产奠定了基础。; 刘景会刘玉林刘晨徐晓明杨红育李利; 关键词：人生长激素纯化结构确证

蓖麻β-半乳糖苷酶的纯化及其基本性质被引量：2: 1993年; 蓖麻籽黄化苗中存在高活性β-半乳糖苷酶。经硫酸铵分级分离、DEAE-纤维素离子交換层析、Sephadex G-100、CM-Sephadex和DEAE-Sephadex层析纯化。活性收率为6.4％,纯化倍数达107倍。纯化了的酶经聚丙烯酰胺凝胶电泳显示单一蛋白带,SDS-PAGE显示两条蛋白带,其相应分子量分别为3.25×10~4和2.94×10~4。用Sephadex G-200分子筛层析法测得分子量为6.7×10~4。综合上述结果推测该酶是由两个不同的亚基构成。以邻硝基苯酚-β-半乳糖苷为底物测得该酶的表观Km为5.9×10^(-3)mol/L。最适pH和最适温度分别为4.5和50℃。酸碱稳定区域在pH4.6—7.5之间。不同浓度缓冲液以及不同种类缓冲液、不同金属离子对酶活性影响均进行了讨论。; 孟延发刘景会李志孝孟雪琴陈耀祖; 关键词：蓖麻半乳糖苷酶提纯

截短型人乳头瘤病毒58型L1蛋白在昆虫细胞中的表达被引量：2: 2015年; 目的利用昆虫细胞杆状病毒表达系统构建含截短型人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)58型主要衣壳蛋白L1基因的重组杆状病毒,并在Sf9细胞中表达。方法从NCBI中获得HPV 58 L1基因序列,应用Clustal X2软件进行序列比对后,确定相对保守的目的基因序列;人工合成HPV 58 L1基因片段,PCR法获得截短型HPV58 L1-1基因,克隆至p Fast Bac-1载体中,构建重组供体质粒p FB-HPV 58 L1-1,转化大肠埃希菌DH10Bac,构建重组Bacmid-HPV 58 L1-1,转染Sf9细胞,获得第1代(P1)重组杆状病毒BV-HPV 58 L1-1,扩增后采用快速滴定法测定病毒滴度;将重组杆状病毒感染Sf9细胞,表达HPV 58 L1-1蛋白,并进行Western blot分析和透射电镜观察。结果Bacmid-HPV 58 L1-1经PCR及测序鉴定构建正确;P2重组杆状病毒的滴度可达1.0×108 pfu/ml;HPV 58 L1-1在Sf9昆虫细胞中的表达产物经Western blot检测,可见相对分子质量约55 000的特异性反应条带,电镜观察可见L1蛋白自组装形成病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)。结论成功在昆虫细胞中表达了HPV 58 L1-1蛋白,并自组装为VLPs,为预防型HPV疫苗的研究奠定了基础。; 刘景会刘玉林褚迪车薇薇; 关键词：L1蛋白杆状病毒 SF9细胞病毒样颗粒

胸腺肽对人红细胞免疫功能的影响被引量：7: 1999年; 证明胸腺肽对人红细胞免疫功能的影响。方法：采用红细胞Ｃ３ｂ受体花环试验．对３１份样本在无胸腺肽或有不同浓度胸腺肽存在下的花环率进行检测，观察胸腺肽是否可影响红细胞的免疫粘附活性。结果：对照组花环率为２１．４２±２．２１％，实验组花环率因胸腺肽浓度不同而不同。当胸腺肽浓度分别为１０或５０μｇ／ｍｌ０．０１）。结论：一定浓度的胸腺肽可增强红细胞免疫功能，而当胸腺肽浓度过高时，反而抑制红细胞免疫功能。; 冯来坤杨洪兴江文正刘景会闫肃王轶文; 关键词：胸腺肽红细胞免疫药理免疫抑制

从理论角度看免疫核糖核酸的疗效被引量：8: 1999年; 冯来坤闫肃刘景会江文正; 关键词：免疫核糖核酸药理疗效

重组α_(2b)型人干扰素工程菌菌种稳定性试验被引量：6: 1999年; 重组α2b型人干扰素 (rIFN 2b)PBV889/JM10 3工程菌菌株传 10 0代后 ,经一系列检定表明 ,干扰素表达水平、质粒性状及其遗传稳定性、染色特性、菌落形态、电镜检查及其他理化特性均与原始菌种差异无显著意义 ,且无支原体及其他微生物污染。; 石晓丽万里王东倩刘景会周华盛君郝维杰; 关键词：稳定性传代人干扰素工程菌

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刘景会

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