朱运峰
- 作品数：35 被引量：158H指数：7
- 供职机构：中国人民解放军总医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金首都医学发展科研基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- RNAi抑制MCF7细胞Lon基因后的生物学效应被引量：5
- 2007年
- 目的通过构建Lon基因表达下调的哺乳动物细胞模型,观察Lon基因对肿瘤细胞增殖及凋亡的影响。方法设计针对Lon蛋白酶基因的小干扰RNA(siRNA),构建pSilencer U6 2.1-Lon真核表达载体,并用脂质体法转染人乳腺癌细胞MCF7。RT-PCR法检测Lon基因下调的水平,通过采用高温、紫外线照射、顺铂处理,观察Lon基因下调后细胞敏感性的变化(MTT法);流式细胞术检测siRNA诱导细胞凋亡的作用。结果RT-PCR显示重组质粒pSilencer U6 2.1-Lon转染MCF7细胞后,Lon基因明显下调,RT-PCR未见扩增目的条带,细胞培养结果显示细胞增殖能力明显减弱。MTT结果显示,pSilencer U6 2.1-Lon转染的MCF7细胞经紫外线照射和顺铂处理后,增殖能力明显下降,与空载体转染组和未转染组相比有显著差异(P<0.05)。加热应激实验显示,41℃处理后,RNA干扰转染组(pSilencer U6 2.1-Lon)与空载体转染组(pSilencer U6 2.1)、未转染组相比有显著性差异(P<0.05)。而在43℃和45℃时,3组之间均无显著性差异(P>0.05)。流式细胞术检测pSilencer U6 2.1-Lon质粒组细胞凋亡率为(22.47±3.15)%,相对于空载体转染组的(2.3±0.9)%和无质粒转染组的(1.14±0.79)%有明显提高,而空载体转染组和无质粒转染组相比无明显差异。结论RNAi能有效下调Lon蛋白的表达。Lon基因的下调可抑制乳腺癌细胞MCF7的增殖,诱导细胞凋亡,并可增加MCF7细胞对紫外线和顺铂的敏感性。
- 薛霞朱运峰毛建平
- 关键词：RNA干扰细胞凋亡
- 乳腺癌演变过程中胰岛素样生长因子-1的表达和临床意义被引量：4
- 2007年
- 目的:探讨胰岛素样生长因子-1(IGF-1)在乳腺癌演变过程中的表达变化规律和意义。方法:采用ELESIA方法检测28名健康女性,51例乳腺良性肿瘤患者,8例非典型增生患者,60例乳腺癌患者血清中IGF-1的表达水平;采用免疫组织化学方法检测30例正常乳腺组织,52例乳腺良性肿瘤组织、35例非典型增生组织、49例乳腺癌组织中IGF-1的表达程度。结果:IGF-1在非典型增生组织中表达程度与在乳腺癌组织、乳腺良性肿瘤组织和正常组织相比呈高表达,P值分别为0.0208、0.048和<0.001。乳腺癌组织和良性肿瘤组织的IGF-1表达程度与正常乳腺组织相比呈高表达,P=0.0008,P=0.0004。非典型增生患者和乳腺癌患者血清中IGF-1表达水平与乳腺良性肿瘤患者血清和正常女性血清相比差异均有统计学意义,P=0.019;绝经前乳腺癌患者血清的IGF-1表达水平比绝经后乳腺癌患者的高,P=0.039。结论:IGF-1在乳腺癌的发生和演变过程中起重要作用。IGF-1可能在非典型增生组织向癌的转变过程中发挥关键作用。血清高水平的IGF-1可能与绝经前女性乳腺癌的发病风险增加有关。IGF-1可能为乳腺癌的发病风险预测和靶向治疗提供新的途径。
- 朱坤兵尉承泽黄焰朱运峰王钢乐宋志武赵立黄长江
- 关键词：乳腺肿瘤胰岛素样生长因子-1免疫组织化学增生
- RT-PCR定量检测GST-π mRNA的表达被引量：19
- 1998年
- 目的：建立一个用于测定临床样本中胎盘型谷胱甘肽Ｓ－转移酶（ＧＳＴ－π）ｍＲＮＡ表达水平的逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）定量技术。方法：根据共扩增ＰＣＲ定量原理，通过多对引物的特异性分析和动力学筛选，建立了以β－ａｃｔｉｎ作内参，底片扫描定量的ＲＴ－ＰＣＲ法，并对３０例食管癌组织和癌旁组织ＧＳＴ－πｍＲＮＡ表达水平进行了检测。结果：本方法灵敏度高、重复性好（批内ＣＶ＜１６％；批间ＣＶ＜３０％）、不用同位素标记，ＧＳＴ－π／β－ａｃｔｉｎ比值不受肝素、ＳＤＳ等的影响。２３例食管癌组织的ＧＳＴ－πｍＲＮＡ表达水平（１．９８±０．７６）明显高于２１例癌旁组织表达水平（１．０２±０．５８）（Ｐ＜０．０１）。结论：所建立的方法能反映ＧＳＴ－πｍＲＮＡ表达的微小差异并能作批量分析，ＧＳＴ－πｍＲＮＡ可作为食管癌的肿瘤基因标志。
- 陈高明李春海王尧河王尧河冯东晓朱运峰
- 关键词：RT-PCR食管肿瘤GST-ΠMRNA
- 人基质金属蛋白酶-9在酵母Pichia pastoris中的表达被引量：10
- 2000年
- 基质金属蛋白酶 - 9( MMP- 9)可促进恶性肿瘤的侵袭、转移 ,并在组织重建、胚胎发育以及伤口愈合等生理过程中发挥重要作用 .为研究这一蛋白的性质 ,并以之为靶标筛选抗肿瘤转移药物 ,在酵母 Pichia pastoris中实现了重组人 MMP- 9蛋白的高效、高活性、分泌表达 .首先用 PCR扩增了 MMP- 9基因编码区 (不含信号肽序列 ) ,经测序证实后 ,将其插入 p PIC9质粒中 ,构建表达载体 .用 Li C1 - PEG法转化酵母后 ,采用明胶 -酶谱法筛选获得 5株高效分泌表达 MMP- 9的克隆 ,经PCR证实 MMP- 9基因整合在阳性克隆的染色体中 .重组蛋白分子量为 93k D,表达量为 1 0 mg/L.重组蛋白可水解明胶及 型胶原 ,并可经有机汞 APMA诱导发生自剪切 ,转换成 85k D的激活形式 ,表明重组蛋白具有与天然人 MMP- 9蛋白相似的底物水解活性和自剪切激活特性 .
- 颜春洪李春海田方朱运峰孙丽亚
- 关键词：基质金属蛋白酶-9酵母表达系统重组蛋白
- 血管内皮生长因子受体KDRmRNA和flt-1 mRNA与子宫内膜异位症相关性研究被引量：3
- 2005年
- 目的:探讨血管内皮生长因子受体(VEGFR)中的fms样酪氨酸激酶受体(flt-1)和胎肝激酶受体(KDR)在子宫内膜异位症(内异症)患者异位及在位子宫内膜组织中的表达及其意义。方法:采用RT-PCR技术,从核酸水平检测53例内异症患者(44例卵巢子宫内膜异位囊肿,30例内异症在位子宫内膜组织)中的VEGF受体KDRmRNAf、lt-1mRNA的阳性表达率及相对表达强度,以40例正常子宫内膜组织作为对照。结果:与对照组比较,研究组KDRmRNA和flt-1mRNA的阳性表达率高于对照组,差异有显著性(P<0.05);研究组在位内膜增殖期与分泌期的阳性表达率、相对表达强度高于对照组子宫内膜组织,差异有显著性(P<0.05);不同月经周期在位内膜组织KDRmRNA和flt-1mRNA的表达、两组增殖期KDRmRNA相对表达强度高于分泌期flt-1mRNA,而flt-1mRNA分泌期相对表达强度高于KDRmRNA。结论:VEGF受体KDRmRNA和flt-1mRNA在内异症中有明显表达并呈周期依赖性。VEGF受体在内异症血管生成中的作用,可能与内异症远处转移、侵袭、种植相关。
- 尼玛卓玛李亚里张韶峰杜安春朱运峰
- 关键词：血管内皮生长因子受体子宫内膜异位症子宫内膜
- GnRH及其受体在子宫内膜异位组织的表达和意义被引量：5
- 2008年
- 目的检测促性腺激素释放激素(GnRH)及其受体(GnRH-R)在子宫内膜异位症(EMS)子宫内膜组织的表达,探讨其存在的意义。方法应用免疫组化和定量竞争PCR、巢式PCR方法,从蛋白和mRNA水平检测GnRH和GnRH-R在EMS在位内膜、异位内膜和对照组子宫内膜组织中的表达。结果GnRH和GnRH-R蛋白在EMS在位内膜和对照组子宫内膜组织中持续表达,阳性物质位于上皮和间质细胞胞浆内,最强染色出现于分泌期;在异位内膜组织中二者的表达率近50%,低于对照组(P<0.01)。GnRH及GnRH-R mRNA表达情况与蛋白相符。结论EMS在位、异位内膜存在着GnRH及GnRH-R的自/旁分泌调节,GnRH-R可能成为临床GnRH类似物(GnRH-a)治疗的靶点。
- 张一萍李亚里周红辉朱运峰
- 关键词：促性腺激素释放激素促性腺激素释放激素受体
- 结直肠癌早期检测的基因标志物
- 2007年
- 研究表明,肿瘤的发生和发展与癌基因和抑癌基因有着密不可分的关系。随着分子生物学理论和技术的发展,对癌基因和抑癌基因的检测已成为肿瘤临床预警和诊断的重要途径。自Fearon和Vogelstein 1990年提出结直肠癌发生的分子模型以来,结直肠癌发病的分子机制不断被阐明,通过对与结直肠癌相关的基因改变的检测可以为结直肠癌早期预警提供帮助。尤其是对具有家族病史的人进行相关基因改变的检测,检出率已经达到相当高的水平。本文对近年来被认为与结直肠癌相关的基因作一综述。
- 李鹏朱运峰
- 关键词：结直肠肿瘤基因突变基因标志物
- 长散布核元件LINE-1的研究进展被引量：3
- 2011年
- 0引言转座子（Transposable elements,TE）又称可移动基因、跳跃基因,是一种可在基因组内插入和切离并能改变自身位置的DNA序列。TE占到人类基因组的46%,其占到基因组的比例仅次于负鼠的52%[1]。很多古老的TE在长期的进化过程中已经发生较大的变异，失去了作为标记的典型特征，
- 胡明明高旭东肖毅朱运峰
- 关键词：反转座子X染色体失活肿瘤发生
- LON基因下调对人乳腺癌细胞系MCF-7的增殖以及药物敏感性的影响
- 2006年
- 目的:应用RNA i的方法抑制丝氨酸蛋白酶LON表达,研究该丝氨酸蛋白酶的表达与肿瘤增殖以及药物敏感性之间的关系。方法:以人乳腺癌细胞MCF-7为研究对象,通过RNA i下调LON基因表达,采用RT-PCR法、MTT增殖实验、流式细胞术等技术进行检测。结果:在瞬时转染与稳定转染细胞株中,RT-PCR结果证实LON基因的表达明显下调;MTT增殖实验结果显示,LON基因的下调可导致细胞的增殖能力降低,并且能够增加对化疗药顺铂的药物敏感性。流式细胞仪检测显示LON基因的下调对细胞周期没有显著影响。结论:通过RNA i下调LON基因能够抑制肿瘤细胞的增殖并且与顺铂有协同作用,其抑制作用未造成细胞周期的改变。
- 张雁林朱运峰李莎高峻钰
- 关键词：LON丝氨酸蛋白酶RNA干扰药物敏感性
- 聚丙烯酰胺凝胶电泳在分离小分子物质中的应用被引量：7
- 1998年
- SDS-PAGE将SDS所带的大量阴性电荷和聚丙烯酰胺凝胶的高分辨率相结合,使蛋白自身的电荷被大量的阴性电荷所淹没,这样蛋白在电泳时的迁移率仅与其分子大小有关。蛋白电泳时凝胶的孔径大小和电泳介质对不同大小分子的分辨率有不同的影响,特别对相对分子量小于10000的低分子量蛋白,常规的电泳方法完全不能分辨,国外报道的尿素、缓冲液浓度及聚丙烯酰胺中的单体和双体的比例对蛋白的分辨率有较大的影响,但将几种不同因素进行综合研究,未见报道。
- 朱运峰冯东晓李春海
- 关键词：分离胶小分子物质蛋白分子蛋白电泳ELECTROPHORESIS肿瘤分子生物学
