胡明明
- 作品数：6 被引量：13H指数：3
- 供职机构：军事医学科学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人hCGβ真核表达载体的构建及稳定转染B16细胞系的建立被引量：2
- 2010年
- 目的：构建人hCGβ真核表达载体，稳定转染入小鼠黑色素瘤B16细胞，建立稳定表达人hCGβ的小鼠黑色素瘤细胞系。方法：采用PCR方法扩增出人hCGβ全长基因的cDNA编码区序列，利用DNA重组技术将其定向插入到真核表达载体pIRES—neo中，并加入酶切位点和6×His标签，得到重组表达质粒pIRES—neo—hCGβ-（His）6。利用阳离子脂质体介导法将其稳定转染入小鼠黑色素瘤B16细胞，经G418加压筛选出阳性克隆。RT—PCR、Western blot及免疫荧光检测人hCGβ在B16细胞中的表达。结果：经限制性内切酶鉴定及序列分析，pIRES—neo—hCGβ一（His）6重组体构建正确，最终建立的表达人hCGβ基因的B16细胞系阳性率高于90％。结论：成功构建了真核表达载体plRES—neo—hCGβ-（His）6，建立的稳定转染人hCGβ小鼠黑色素瘤细胞系能够高效表达hCGβ基因。该稳定转染细胞系的建立为进一步研究人hCGβ抗肿瘤基因疫苗的功能提供了良好的实验基础，为hCGβ在肿瘤免疫治疗中的应用奠定了研究基础。
- 张亮王宇江乐阎瑾琦王越胡明明于继云
- 关键词：HCGΒ稳定转染小鼠黑色素瘤细胞肿瘤免疫治疗
- 长散布核元件LINE-1的研究进展被引量：3
- 2011年
- 0引言转座子（Transposable elements,TE）又称可移动基因、跳跃基因,是一种可在基因组内插入和切离并能改变自身位置的DNA序列。TE占到人类基因组的46%,其占到基因组的比例仅次于负鼠的52%[1]。很多古老的TE在长期的进化过程中已经发生较大的变异，失去了作为标记的典型特征，
- 胡明明高旭东肖毅朱运峰
- 关键词：反转座子X染色体失活肿瘤发生
- LINE-1编码蛋白L1-ORF1的原核表达纯化和多克隆抗体制备被引量：3
- 2010年
- 目的:制备具有肿瘤组织特异性表达的L1-ORF1蛋白多克隆抗体并进行初步应用研究。方法:采取基因工程表达方法制备L1-ORF1蛋白,免疫家兔制备多克隆抗体,间接ELISA检测抗体效价,Western blot和细胞免疫荧光方法检测抗体特异性,免疫检测验证其识别肿瘤细胞内L1-ORF1蛋白的特异性。结果:制备的抗L1-ORF1蛋白多克隆抗体具有很高的敏感性与特异性,免疫学检测表明该抗体不仅能检测出正常细胞中瞬时表达的L1-ORF1蛋白,而且可检测出肿瘤细胞中天然表达的L1-ORF1蛋白。结论:制备的多克隆抗体具有较高的敏感性与特异性,为以后该抗体的进一步应用奠定了基础。
- 胡明明朱运峰王越王宇张亮高旭东董金凯于继云
- 关键词：原核表达蛋白纯化多克隆抗体间接免疫荧光
- 下调LINE-1编码蛋白ORF-1p对肺癌细胞A549生物学特征的影响被引量：7
- 2010年
- 目的:探索逆转座子LINE-1编码的ORF-1p在肺癌发病过程中的分子机制。方法:利用RNAi技术,在肺癌细胞A549中下调LINE-1编码蛋白ORF-1p,随后对下调后的A549细胞的生物学特征进行细胞增殖(MTT方法)、细胞周期(流式细胞技术)以及集落形成(软琼脂克隆形成试验)等分析,观察细胞生物学特征的改变。并利用报告基因,进一步对细胞周期相关蛋白进行分析。结果:在A549细胞中,下调ORF-1p后细胞的增殖能力明显下降(P<0.05),细胞周期出现S期明显阻滞(P<0.05),肿瘤细胞的集落形成能力明显减弱(P<0.05),p15/p21报告基因表达显示,两种蛋白被显著上调。结论:下调LINE-1基因编码蛋白ORF-1p能够抑制肺癌细胞的生长以及肿瘤的形成。
- 高旭东胡明明朱运峰
- 关键词：RNAI肺癌
- L1(ORF1)基因通过编码和非编码RNA表达对细胞增殖的影响
- 2011年
- 目的探索L1(ORF1)基因过量表达对细胞增殖的影响。方法 PCR方法制备L1(ORF1)全长以及5'端不同截短的天然序列以及各种突变体,构建真核重组表达载体,利用脂质体方法瞬时转染HEK293细胞,Western印迹方法验证蛋白表达,利用活细胞计数试剂盒(CCK-8)进行细胞增殖能力分析。结果过表达天然全长蛋白[L1(ORF1)]的重组体能明显促进细胞增殖,终止密码位于第109个氨基酸位置的全长序列重组体[L1(ORF1)109]对细胞增殖同样具有非常明显的促进作用,但仅含有氨基端109个氨基酸的基因片段的重组体对细胞增殖没有促进作用。另外,终止密码位于其他位置的全长序列重组体[L1(ORF1)48,终止突变在第48个氨基酸位置]以及含有多处突变的全长序列重组体[L1(ORF1)m]对细胞的增殖也未见有显著影响。结论 L1(ORF1)全长序列编码蛋白具有显著地促进细胞增殖作用,同时在特殊位点含有终止突变的全长序列转录产物对细胞的增殖也具有显著促进作用,L1(ORF1)全长序列可能通过其编码的蛋白以及非编码RNA两种形式对细胞增殖进行调控,位于序列中的关键位点在此过程中起着重要的作用,为探索L1(ORF1)序列在细胞增殖中的调控机制奠定了基础。
- 王越胡明明阎瑾琦张亮王宇朱运峰于继云
- 关键词：细胞增殖CCK-8
- L1编码蛋白在肿瘤中功能的初步研究
- 在基因组内存在着为数众多并能进行移动DNA元件。其中一类是需要经过RNA介导的,称为反转座子(或逆转座子)。由于RNA聚合酶和逆转录酶均无校对功能,就使得逆转座子具有高度变异性。分散在真核生物基因组中的大量逆转座子是基因...
- 胡明明
- 关键词：L1蛋白纯化多克隆抗体肿瘤
- 文献传递
