强卫东
- 作品数：8 被引量：20H指数：3
- 供职机构：吉林农业大学生命科学学院生物反应器与药物开发重点实验室更多>>
- 发文基金：吉林省教育厅科研项目国家教育部博士点基金国家大学生创新性实验计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生化学工程轻工技术与工程更多>>
- 红花油酸去饱和酶基因的克隆及序列分析
- 2014年
- 【目的】对红花油酸去饱和酶FAD2基因进行克隆和生物信息学分析,为深入研究该酶的功能提供理论依据。【方法】提取红花种子总RNA,通过RT-PCR方法进行反转录,PCR扩增得到FAD2基因全长cDNA序列。运用生物信息学方法,对红花FAD2氨基酸序列的理化性质、系统进化、蛋白定位和跨膜区域等进行预测和分析。【结果】成功克隆获得了红花FAD2基因,其开放阅读框cDNA长1 140bp,编码380个氨基酸,预测分子质量43.6ku,理论等电点8.37,带有正电残基(强酸性)30个、负电残基(强碱性)34个。FAD2蛋白含有3个极度保守的His-Box,不存在明显的信号肽,存在6个跨膜结构域,与疏水区域预测结果一致。红花FAD2核苷酸的分子进化树分析显示,其与日本栽培稻的亲缘关系较近。红花FAD2氨基酸序列比对结果表明,不同植物的FAD2具有较高的同源性,同源性平均达72.94%。【结论】成功克隆了红花FAD2基因,并对其编码的蛋白进行了生物信息学分析。
- 王文慧强卫东王清曼邹德毅吴治邦王晶晶王沥浩杨晶
- 关键词：红花基因克隆同源性分析信号肽
- 红花油体提取条件优化及稳定性研究被引量：4
- 2015年
- 油体是储藏脂肪的亚细胞单位,其表面包裹一层磷脂和油体蛋白。这种稳定的结构可以保护油体面对环境的压力,使油体可以应用在食品、化妆品及制药工业中。研究红花油体的提取方法及红花油体乳液的基本性质,旨在为以油体为基质的载体体系研究奠定基础。以pBS为介质,采用梯度离心法,比较了不同提取条件对红花油体的提取效率的影响;对其在不同pH值、NaCl浓度条件下红花油体的平均粒径和稳定性进行测定。结果表明,红花油体在pH值≥6条件下,平均粒径为1.75-2.05μm和p H值≤6条件下,平均粒径1.50-1.75μm;NaCl浓度0.2和0.4 mg/m L时,红花油体分散较为均匀,NaCl浓度1.2和2.0 mg/m L时,红花油体出现聚集现象。蔗糖浓度0.1和0.2 mg/m L时,红花油体分散较为均匀,蔗糖浓度为0.4-1.0 mg/m L时,红花油体比较密集,随着蔗糖浓度的增加,红花油体的粒径逐渐开始不均一。红花油体的最佳提取条件是pH7,NaCl浓度0.2 mg/m L,蔗糖浓度0.1 mg/m L,稀释后的红花油体溶液在不加入保护剂或者不经过物理方法处理下,保存起来不稳定。
- 杨晶韩高强刘忠良卢振吴治邦王清曼邹德毅强卫东陈伟
- 关键词：红花油体粒径稳定性
- 红花种子不同发育时期内参基因表达稳定性分析被引量：8
- 2017年
- 目的通过qRT-PCR分析对比红花开花后不同发育时期的种子中内参基因的表达稳定性,筛选出红花种子成熟过程中最稳定的内参基因。方法应用实时荧光定量PCR技术,分析6个传统内参基因ACT、EF1α、GAPDH、UBI、TUA、TUB在红花种子不同发育时期的mRNA表达差异情况;利用GeNorm和Normfinder软件评价上述内参基因在红花开花后不同发育阶段的种子中的表达稳定性。结果荧光定量及GeNorm软件分析结果显示,6种内参基因的表达性各异,但表达最为稳定的内参基因是EF1α,表达最稳定的内参组合是EF1α和TUB。为了数据的真实可靠又选用了Normfinder软件分析,结果显示UBI基因表达不太稳定,EF1α、ACT、TUB、TUA和GAPDH内参的表达稳定性都小于0.15,相对比较稳定。结论为红花开花后不同发育时期种子的荧光定量PCR分析提供了详尽的内参基因参考。
- 杨晶卢玉彬迟孟涵王清曼刘伟灿强卫东张晓美胡会龙邓思楠
- 关键词：红花种子不同发育时期荧光定量PCR内参基因
- 红花转录物组中筛选的Unigene100791基因克隆、生物信息学分析及功能预测
- 2016年
- 目的:克隆红花Unigene100791基因,研究其表达情况;并对该基因的特性进行生物信息学分析,为后续红花代谢调控及提高红花油产量,使其满足食品工业市场需求奠定理论基础。方法:从红花转录物组数据库中筛选得到转录因子Dof相关基因Unigene100791的中间片段;利用RNAiso plus试剂法提取红花种子总RNA,利用RT-PCR方法反转录得到红花种子c DNA;采用3'Race方法从红花种子中克隆Unigene100791基因的全长序列;通过生物信息学方法对其全长基因进行分析,构建该基因与相关物种的系统进化树,研究其蛋白序列的同源性及其理化性质与结构特征,预测其生物学功能。结果:成功克隆了红花Unigene100791基因,其基因全长1274 bp;开放阅读框981 bp,编码326个氨基酸,理论分子质量约为35026.5 u,理论等电点9.5,带正电残基27个,带负电残基18个,序列含有典型的加尾信号poly(A);红花Unigene100791基因编码产物与烟草Dof2.4-1亲缘关系较近,属于Dof超家族,此蛋白存在信号肽,不存在跨膜结构。结论:成功克隆了红花Unigene100791基因,并对其编码的蛋白质进行了生物信息学分析。
- 陈笑沈彦岐王清曼杜林娜卢玉彬强卫东郭咏昕王红雨杨莹杨晶魏健
- 关键词：红花转录因子DOF生物信息学
- 转VEGF_(165)基因红花的研究被引量：1
- 2014年
- 【目的】构建转血管内皮生长因子165(VEGF165)基因的红花,为利用植物生物反应器规模化生产VEGF165奠定基础。【方法】采用PCR方法,克隆获得植物偏好性的VEGF165基因,将其与pOP质粒连接,构建重组质粒pOP-VEGF165,对其进行NcoⅠ和HindⅢ双酶切及PCR鉴定。采用冻融法将质粒pOP-VEGF165转入根癌农杆菌EHA105中,通过农杆菌介导获得转化红花植株,经PCR鉴定得到转基因红花阳性植株。【结果】克隆获得了495bp的VEGF165基因片段,并成功构建了植物特异表达载体pOP-VEGF165,用其转化红花子叶后,共获得了8株转基因红花植株,其中2株鉴定为阳性。【结论】获得了转VEGF165基因的红花株系。
- 冯鹤冯雪郭咏昕强卫东王清曼邹德毅吴治邦杨晶
- 关键词：血管内皮生长因子红花
- 红花油体蛋白基因CtOleosin的克隆及表达被引量：1
- 2018年
- 【目的】克隆红花油体蛋白基因CtOleosin,研究其表达特性,为探索其功能奠定基础。【方法】以红花种子为研究对象,于开花后4,8,12,16,20,24,28,32d,提取红花种子总RNA,利用RT-PCR技术克隆红花CtOleosin全长cDNA片段,生物信息学方法分析其特性及结构功能;利用Protparam在线工具分析CtOleosin蛋白的理化性质,用Blastp比对该蛋白与其他物种相关蛋白的同源性,使用SMART软件进行功能区分析;利用荧光定量方法检测该基因在种子不同发育时期的表达量。【结果】克隆了红花CtOleosin基因,其全长639bp,编码213个氨基酸,蛋白理论分子质量约为21.48ku,理论等电点9.39,带正电荷残基18个,负电荷残基14个;红花CtOleosin基因编码产物与向日葵Oleosin的同源性高达59.11%,属于油体蛋白家族成员,此蛋白不存在信号肽,无糖基化位点,存在2个跨膜区;以EF1α作为内参基因分析发现,CtOleosin基因表达量在红花种子发育初期逐渐升高,28d时达到最高,之后又有所下降。【结论】成功克隆了红花CtOleosin基因,明了了其特性、功能、编码产物的基本理化性质,以及其在红花种子不同发育时期的表达量变化情况。
- 卢玉彬迟孟涵孙晓玉温世雄王清曼陈希强卫东杨晶
- 关键词：红花克隆生物信息学
- 红花种子cDNA文库构建及脂肪酸代谢相关基因的克隆
- 2015年
- 【目的】构建红花种子cDNA文库,挖掘红花脂肪酸代谢途径相关基因,为红花品质改良的基因工程研究奠定基础。【方法】以红花成熟种子为材料,通过Trizol法,提取红花种子总RNA,使用GeneRacer?Kit和CloneMinerⅡcDNA Library Construction Kit试剂盒构建cDNA文库。并对cDNA文库的重组率和插入片段进行鉴定,从中获得contig和singlet片段及脂肪酸代谢相关基因,通过荧光定量PCR,测定delt-12脂肪酸脱氢酶基因在不同开花时期(14,16,18,20d)红花种子中的表达量。【结果】构建的红花种子cDNA文库总克隆数为7.5×106,重组率>95%,插入片段长度均>500bp,全长基因比例达到20%。从红花cDNA文库中共拼接得到contig 543条,singlet 3 444条。delt-12脂肪酸脱氢酶基因序列在成熟红花种子中的表达量较其他时期高。【结论】成功建立了红花种子cDNA文库,克隆了delt-12脂肪酸脱氢酶基因,且该基因表达量在红花种子成熟过程中逐渐升高。
- 杨莹王沥浩邹德毅王清曼强卫东许心怡陈伟王凯杨晶
- 关键词：CDNA文库克隆
- 5种植物油体性质的比较被引量：8
- 2015年
- 【目的】对5种植物油体的大小、结构及稳定性进行考察,为选择优质的植物油体奠定基础。【方法】利用PBS作为缓冲液,采用梯度离心法,提取水稻、亚麻芥、黄豆、黑豆和红花5种植物的油体,对这5种油体的外观进行观察;在倒置显微镜(10倍目镜×40倍物镜)下对5种植物油体的显微结构进行考察;用Mastersizer 2000激光粒度仪测定5种植物油体的粒径,同时比较于4℃放置15d后5种油体的粒径变化情况;通过SDS-PAGE电泳明确5种植物油体蛋白的分布情况。【结果】与其他植物油体相比,红花油体色泽洁白、透亮,分布均匀,粒径呈单一峰型,且峰型平滑。红花油体粒径为0.4~11.0μm,多数集中在1.75~2.05μm,水稻、亚麻芥、黄豆、黑豆油体粒径分别为0.5~12.0,0.3~11.0,0.4~13.0,0.4~13.0μm。在4℃放置15d后,5种植物油体的粒径增大,油体中均有杂峰出现,峰型不规则。SDS-PAGE电泳检测结果显示,5种植物油体相关蛋白主要分布在20.1~44.3ku。【结论】红花油体较其他植物油体结构规则,分散均匀,应用前景广阔。
- 齐玉红强卫东王清曼邹德毅卢震郭咏昕官丽莉杜林娜杨晶
- 关键词：油体显微结构粒径
