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三色混合荧光HPV假病毒中和检测系统的建立及评价被引量：4: 2018年; 目的建立三色混合荧光HPV假病毒中和检测系统，并评价其在检测HPV九价疫苗免疫血清免疫原性的应用。方法分别选取红色、绿色和蓝色荧光蛋白的质粒N31-MCHREEY、N31-EGFP和N31-mTagBFP构建HPV6/11/16/18/31/33/45/52/58假病毒，利用双抗夹心法和病毒半数组织培养感染剂量法检测HPV假病毒浓度和感染滴度；利用单色荧光与三色混合荧光HPV16/33/45假病毒，检测HPV九价疫苗免疫小鼠血清的中和滴度，以验证三色混合荧光HPV假病毒系统的准确性；采用单色荧光和三色混合荧光HPV6/11/16/18/31/33/45/52/58假病毒系统检测HPV九价疫苗免疫食蟹猴血清的中和滴度，判断其是否可应用于HPV九价疫苗免疫血清的免疫原性检测。结果含有绿色、红色和蓝色荧光质粒的HPV16型假病毒的浓度为5~6 μg/ml，HPV6/11/18/31/33/45/52/58的三色混合荧光假病毒浓度为1~3 μg/ml。获得了分别含有EGFP、Mcherry和mTagBFP报告基因的9个型别的HPV假病毒，且满足中和检测需要；9个型别单色荧光HPV假病毒的滴度值均在1×104~1×105之间，即它们具有相似的感染滴度。检测HPV九价疫苗免疫的小鼠血清时，单色荧光与三色混合荧光HPV16/33/45假病毒系统所得中和滴度值差异均无统计学意义（P值均〉0.05）；检测HPV九价疫苗免疫的食蟹猴血清时，单色荧光与三色混合荧光A、B和C组HPV6/11/16/18/31/33/45/52/58假病毒所得中和滴度值差异均无统计学意义（P值均〉0.05）。结论成功地建立了三色混合荧光HPV假病毒中和检测系统；验证其与单色荧光HPV假病毒系统具有一致性；证实其可应用于检测HPV九价疫苗免疫血清的免疫原性检测中。; 魏双萍范飞陈洁柳欣林杨与柔王致萍宋硕李智海魏旻希王大宁李少伟夏宁邵; 关键词：疫苗免疫血清人乳头瘤病毒

高危型人乳头瘤病毒诱导的抗体水平与宫颈病变的相关性被引量：3: 2017年; 目的研究高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)感染相关的宫颈病变程度与抗人乳头瘤状病毒(HPV)抗体水平的相关性,探讨HPV致病的免疫学问题。方法选取2012年1月-2013年6月在该院妇产科门诊就诊的女性中选取60例病理确诊为女性宫颈病变(CINⅠ及以上),且宫颈脱落细胞的DNA检测为HR-HPV阳性者为研究组,根据组织学检测结果将研究组进一步分为低度病变组30例(CINⅠ)和高度病变组30例(CINⅡ或Ⅲ)。对照组为经核酸检测无HPV感染且病理诊断未见癌前病变的门诊患者60例,按年龄进一步分为低年龄组和高年龄组。低年龄组和高年龄组与低度病变组和高度病变组的年龄差异无统计学意义(P>0.05)。分别抽取研究组及对照组外周血,检测其抗HR-HPV L1 Ig G抗体及中和抗体滴度,比较研究组与对照组抗体阳性率及抗体滴度水平的差别。结果研究组血清中的抗HR-HPV L1 Ig G抗体阳性率及抗体滴度均高于对照组(P<0.05);低度病变组患者血清中的抗HR-HPV的中和抗体滴度高于相应对照组(P<0.05),而高度病变组的抗HR-HPV的中和抗体阳性率及抗体水平与相应对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论宫颈病变患者血清中抗HR-HPV L1 Ig G抗体升高,说明HPV感染可引起机体的体液免疫反应。低度病变组的中和抗体水平相对较高,可能是机体产生的中和抗体阻止了病毒的进一步感染。高度病变组的Ig G抗体和中和抗体均低下,说明进入CINⅡ/Ⅲ后HPV已经逃避了免疫系统的监视。; 方秀丽魏旻希李云华李少伟于杰林燕真陈珣黄莉莉李婷王大宁潘晖榕; 关键词：宫颈癌前病变人乳头瘤状病毒 IGG抗体

基于假病毒的人乳头瘤病毒小鼠感染模型的建立及HPV16VLP疫苗保护性评价被引量：3: 2015年; 目的建立基于假病毒的人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)小鼠感染模型并应用于HPV16 VLP疫苗的保护性评价。方法利用293FT细胞制备携带Luc报告基因的HPV16假病毒,纯化后检测HPV16假病毒滴度和性质;利用醋酸甲羟孕酮和β-雌二醇处理雌性BAL B/c小鼠,然后用壬苯醇醚-9(N-9)化学损伤BALB/c小鼠阴道,6 h后用HPV16假病毒感染小鼠阴道,48 h后使用活体检测仪检测小鼠阴道中Luc报告基因的表达情况;最后,利用该感染模型评价HPV16 VLP疫苗的保护能力。结果获得了含有Luc报告基因的HPV16假病毒,建立了HPV假病毒纯化方法;Western blot结果显示HPV16假病毒中含有L1和L2蛋白;建立了HPV假病毒感染小鼠模型,并通过不同剂量的假病毒感染实验表明,该感染模型所需的最低假病毒剂量是1.7×104TRLU;利用该模型获知HPV16 VLP疫苗具有较强的抵抗HPV16假病毒感染的能力,当中和抗体滴度为256时即可阻碍HPV假病毒感染。结论本研究成功地建立了HPV假病毒小鼠感染模型,并运用该模型评价了HPV16 VLP疫苗的保护作用,为HPV中和抗体研究和候选疫苗的免疫保护评价提供了有效工具。; 王大宁张丽刘亚静魏旻希夏宁邵李少伟; 关键词：人乳头瘤病毒假病毒

人乳头瘤病毒致癌蛋白E6的结构与功能研究进展被引量：5: 2019年; 人乳头瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)是一类无包膜的小DNA病毒,主要感染人皮肤上皮细胞和黏膜,持续感染HPV会引起良性和恶性肿瘤,如尖锐湿疣和宫颈癌等多种疾病。HPV早期蛋白E6是引起宿主细胞发生恶性转化的关键致癌蛋白,其参与调节宿主细胞内多个关键的生理生化过程,如促使抑癌蛋白p53的降解、激活端粒酶和降解细胞凋亡相关蛋白Bak(Bcl-2 homologous antagonist/killer)等,进而干扰宿主细胞的生长因子依赖性、细胞凋亡、细胞转录、DNA损伤反应、细胞周期和宿主细胞分化等一系列生命活动。因此,分析阐述HPV致癌蛋白E6的结构与功能,有助于阐明HPV诱发宫颈癌等恶性肿瘤的分子机理,为今后设计治疗性HPV疫苗奠定理论基础。本文就HPV致癌蛋白E6的结构及其生物学功能进行综述。; 王致萍柳欣林王大宁夏宁邵李少伟; 关键词：宫颈癌 P53蛋白

悬浮驯化HEK-293FT细胞表达人乳头瘤病毒16型假病毒及其冷冻电镜结构解析被引量：3: 2016年; 为了大量获得人乳头瘤病毒（HPV）16型的假病毒颗粒（PsV）,将贴壁生长的293FT细胞驯化成为悬浮细胞系进行大规模的悬浮培养,同时优化假病毒纯化方法,并使用冷冻电镜解析其三维空间结构。本研究通过逐步降低培养基中血清浓度和加入抗聚团剂等方法,获得了可在Wave生物反应器中大规模悬浮培养的293FT细胞,经过携有HPV16L1、L2基因和GFP报告基因的质粒转染,实现了大规模制备HPV16假病毒;利用CsCl等密度和蔗糖密度梯度超速离心的方法,获得高纯度的HPV16假病毒颗粒,滴度为8.2×10^5 TCID50/μL;蛋白印迹结果显示HPV16假病毒中含有L1和L2蛋白,定量ELISA测得L1蛋白的含量为156.0μg/mL;最后使用Tecnai G2F30冷冻电镜和Falcon电子直接探测相机采集冷冻HPV16假病毒的图像,应用AUTO3DEM软件解析其结构,结构分辨率为14A,呈现为T=7的等二十面体对称结构,直径为600A。本研究为HPV疫苗临床血清中和检测、高分辨率HPV16假病毒的结构解析及L1和L2相互作用研究奠定了良好基础。; 王大宁刘亚静郑清炳李智海范飞柳欣林宋硕顾颖夏宁邵李少伟; 关键词：人乳头瘤病毒假病毒

人乳头瘤病毒中和表位及抗体中和作用机制的研究进展被引量：5: 2019年; 人乳头瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)是一类无包膜的小DNA病毒,其衣壳蛋白由主要衣壳蛋白L1和次要衣壳蛋白L2组成,持续感染HPV将引起宫颈癌和尖锐湿疣等多种疾病。HPV衣壳蛋白L1和L2中分布着大量中和表位,并具有较强的免疫原性,HPV疫苗可诱导机体产生高滴度的中和抗体并阻碍病毒感染,进而预防宫颈癌等疾病的发生。分析阐述HPV衣壳蛋白中和表位及抗体的中和作用机理,有助于阐明HPV疫苗预防病毒感染的作用机制,为今后设计新一代保护范围更广的HPV疫苗奠定良好的基础。本文就HPV衣壳蛋白中和表位及抗体的中和作用机制进行综述。; 杨与柔柳欣林王大宁夏宁邵李少伟; 关键词：衣壳蛋白中和表位

人乳头瘤病毒预防性疫苗的研究进展和应用现状被引量：2: 2016年; 高危型人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)感染被证实是诱发女性宫颈癌的主要原因。宫颈癌已成为继乳腺癌之后世界范围内严重威胁妇女健康的疾病。目前宫颈癌治疗效果不佳,因此预防HPV感染尤为重要。国外已上市的3种HPV预防性疫苗显示出良好的安全性和有效性,但由于生产成本和售价较高,阻碍了其在发展中国家和经济较落后的地区推广应用。目前,这些疫苗尚未在我国上市,本文综述了HPV疫苗的研究进展和应用现状,为即将在我国上市的HPV疫苗提供信息。; 李韵冰宋硕王大宁李智海夏宁邵李少伟; 关键词：人乳头瘤病毒宫颈癌疫苗

人乳头瘤病毒衣壳蛋白结构生物学研究进展被引量：4: 2016年; 人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)的感染会导致人类多种疾病,尤其是女性宫颈癌。HPV衣壳是由主要衣壳蛋白L1和次要衣壳蛋白L2形成的T=7的正二十面体结构,L1蛋白具有较强的免疫原性且能在体外自组装形成与天然病毒结构相似的类病毒颗粒(virus like particle,VLP),是目前HPV疫苗的理想形式。此外,L1、L2蛋白在病毒的感染中发挥着重要作用。对HPV衣壳蛋白结构和功能的研究,有助于进一步阐明HPV的颗粒组装机制、致病机理及感染机制,为今后开展HPV相关疾病的研究提供指导方向。本文就HPV衣壳蛋白的结构、病毒颗粒组装及衣壳蛋白间相互作用研究进展进行综述。; 范飞柳欣林李智海王大宁夏宁邵李少伟; 关键词：人乳头瘤病毒衣壳蛋白结构生物学

硫酸乙酰肝素蛋白聚糖在人乳头瘤病毒感染中的作用被引量：1: 2018年; 人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)是一类无包膜的小DNA双链病毒,其衣壳蛋白由主要衣壳蛋白L1和次要衣壳蛋白L2组成,高危型HPV的持续感染是诱发宫颈癌的主要原因。HPV吸附入胞伴随着由多种受体引起衣壳蛋白L1和L2的变构,其中衣壳蛋白L1与细胞表面硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(heparan sulfate proteoglycans,HSPG)之间的多重相互作用是病毒入胞的关键。经与HSPG相互作用后,HPV衣壳蛋白L2暴露病毒与入胞受体结合位点,进而介导病毒内吞入胞。因此,阐述HPSG在HPV感染细胞中的作用有助于进一步阐明HPV感染机制及致病机制,为HPV治疗性疫苗的研究提供一定的理论基础。本文就HSPG在HPV感染细胞中的作用进行综述。; 魏双萍柳欣林王大宁夏宁邵李少伟; 关键词：人乳头瘤病毒衣壳蛋白构象变化

质粒转染比例对人乳头瘤病毒16/18型假病毒制备的影响: 2020年; 高危型人乳头瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)的持续感染与宫颈癌、阴道癌、口腔癌等恶性疾病的发生相关,目前主要通过基于L1蛋白的HPV疫苗进行预防。而假病毒(Pseudovirus,PsV)的高效稳定生产是相关预防性疫苗免疫保护性评价的重要环节。为初步探究PsV生产过程中各质粒的配比关系对不同型别PsV制备的影响。本实验采用人乳头瘤病毒的16型(HPV16)和18型(HPV18)两种型别的相应质粒转染细胞,编码L1蛋白的质粒转染质量固定为10μg,分别改变编码L2蛋白质粒与EGFP报告质粒的转染比例,通过计算PsV的TCID50值、测定L1蛋白含量以及PsV的感染率对不同质粒转染配比下的假病毒进行评估。结果显示在HPV16PsV模型中,L1与L2转染质量比为10μg∶2μg时,可以得到TCID50较高的PsV,而当HPV18 PsV达到最大TCID50时,L1与L2的配比为10μg∶1μg,其TCID50略大于10μg∶2μg组;L1与L2比例为10μg∶2μg时两种PsV皆可达到最大感染率;PsV模型对EGFP配比变化并不如L2敏感,L1与EGFP质量比在0.5~1之间时两种PsV均可获得较高TCID50,然而EGFP配比改变造成的感染率差异并不具有统计学意义。本研究探究了HPV16、HPV18 PsV生产的一般规律,为其他型别PsV高效生产提供指导,继而为疫苗保护性评价及结构生物学样品制备奠定基础。; 陈洁柳欣林徐琴王大宁夏宁邵夏宁邵; 关键词：人乳头瘤病毒16 人乳头瘤病毒18

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王大宁

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