卢芳
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
- 供职机构：中国科学院更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 乙型肝炎病毒preS1与肿瘤坏死因子融合肽基因的克隆和表达
- 1999年
- 为提高hTNFα和HBVpreS1(1～65)肽融合蛋白在大肠杆菌中的表达率,以及研究hTNFα和preS1(1～65)肽之间的联接肽段对hTNFα的影响,并引进蛋白酶切位点以利于融合蛋白中酶切制备preS1(1～65)肽,本文构建了5种含有两类不同基因接头和preS15′端经改造的hTNFα和HBVpreS1(1～65)肽的融合基因。然后分别将其插入表达载体pSB92中,并获得表达。SDSPAGE显示,不同结构的融合基因的表达水平不同,表达水平最高的pTPS5表达量达菌体总蛋白的60%。该表达产物经Westernblot验证,能分别特异地与抗hTNFα抗体与抗preS1抗体结合。稀释复性后,该融合蛋白还具有hTNFα的生理功能(对L929细胞的细胞毒活性),为一具有双功能活性的新的融合蛋白。经DNA序列测定表明,preS1(165)肽基因正确地融合在hTNFα基因之后。
- 陈波卢芳药立波苏成芝陈常庆
- 关键词：乙型肝炎病毒PRES1肿瘤坏死因子
- 低毒且高效杀伤人肿瘤细胞的新型人肿瘤坏死因子突变体的构建
- 2002年
- 采用定点突变的方法构建了两株新型人肿瘤坏死因子突变体MT1（32Trp157Phe）和MT2（2Lys30Ser32Trp157Phe）,并在大肠杆菌中得以高效表达,表达量占菌体总蛋白的50％且为可溶性蛋白.表达产物经蛋白印清法检测,均能与抗野生型hTNF-α单抗结合且经分离纯化后样品的纯度在95％以上.各突变体虽然对鼠成纤维瘤细胞L929的生物学活性比野生型下降了4～5个数量级,但却能高效杀伤人肿瘤细胞,杀伤程度与野生型相差不明显.测定突变体MT1的LD50值降至野生型的0.34％,而MT2对小鼠30％致死剂量则低于野生型LD50的1/700.
- 刘惠卢芳陈建军任红玉陈常庆
- 关键词：人肿瘤细胞突变体人肿瘤坏死因子细胞毒活性LD50
