吴伟立
- 作品数：2 被引量：6H指数：2
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 尿酸氧化酶的表达纯化及活性形式鉴定被引量：2
- 2005年
- 目的:在大肠杆菌内表达具有活性的黄曲霉尿酸氧化酶。方法:用重叠PCR从黄曲霉(Aspergillusflavus)3.1398中钓取了尿酸氧化酶(urateoxidase,UO,EC1.7.3.3)基因,克隆到原核表达载体pET22b中,转化大肠杆菌BL21(DE3),筛选到高表达的重组转化子菌株。经乳糖诱导目的蛋白表达,阴离子交换柱纯化,获得纯品。SDS PAGE分析样品纯度。用尿酸缓冲液测定酶活性,用戊二醛交联结合质谱法测定相对分子质量。结果:目的蛋白为胞内可溶性表达,表达量达菌体总蛋白的35%,纯化后的样品纯度达99%,其酶比活力可达35U/mg。经质谱测定重组UO单体的相对分子质量为34×103。交联后相对分子质量为160×103。结论:黄曲霉尿酸氧化酶可在大肠杆菌中可溶表达,并具有活性,其活性形式为四聚体。
- 吴伟立李彦英苗林徐金森方宏清陈惠鹏
- 关键词：尿酸氧化酶重组蛋白质类大肠杆菌聚合酶链反应
- 化学交联在蛋白质结构研究中的应用被引量：4
- 2004年
- 在交联剂分子两端各有一个相同或不同的活性基团 ,它们能与蛋白质侧链上的氨基、巯基、羟基等形成共价交联。利用交联反应 ,可以测定寡聚蛋白质的亚基数量、研究蛋白质的高级结构、测量氨基酸残基间的距离及研究蛋白质间的相互作用。
- 吴伟立方宏清徐金森陈惠鹏
- 关键词：交联亚基构象相互作用
