苗林
- 作品数：5 被引量：15H指数：3
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 尿酸氧化酶的表达纯化及活性形式鉴定被引量：2
- 2005年
- 目的:在大肠杆菌内表达具有活性的黄曲霉尿酸氧化酶。方法:用重叠PCR从黄曲霉(Aspergillusflavus)3.1398中钓取了尿酸氧化酶(urateoxidase,UO,EC1.7.3.3)基因,克隆到原核表达载体pET22b中,转化大肠杆菌BL21(DE3),筛选到高表达的重组转化子菌株。经乳糖诱导目的蛋白表达,阴离子交换柱纯化,获得纯品。SDS PAGE分析样品纯度。用尿酸缓冲液测定酶活性,用戊二醛交联结合质谱法测定相对分子质量。结果:目的蛋白为胞内可溶性表达,表达量达菌体总蛋白的35%,纯化后的样品纯度达99%,其酶比活力可达35U/mg。经质谱测定重组UO单体的相对分子质量为34×103。交联后相对分子质量为160×103。结论:黄曲霉尿酸氧化酶可在大肠杆菌中可溶表达,并具有活性,其活性形式为四聚体。
- 吴伟立李彦英苗林徐金森方宏清陈惠鹏
- 关键词：尿酸氧化酶重组蛋白质类大肠杆菌聚合酶链反应
- 干扰素与转铁蛋白融合蛋白在毕赤酵母中的表达及鉴定被引量：3
- 2005年
- 利用重叠PCR技术将干扰素(interferon,IFN)基因与转铁蛋白N端半分子(transferrinN-terminalhalf-molecule,TFN)基因在体外融合,融合基因和单独的TFN基因分别克隆至真核表达载体pPIC9中,转化毕赤酵母GS115,得到的转化子经诱导表达后在发酵上清中均获得了表达.经SPSepharoseFastFlow阳离子交换层析、PhenylSepharoseFastFlow疏水层析纯化,获得了纯度大于93%的重组融合蛋白IFN-TFN和纯度大于95%的重组TFN样品.生物活性实验证明融合蛋白IFN-TFN具有抗病毒活性.铁饱和实验证明融合蛋白IFN-TFN和单独的TFN具有相同的铁结合能力.因而TFN可望作为IFN的天然运输载体.
- 李晓静张豪薛冲李彦英陈璟苗林方宏清陈惠鹏
- 关键词：转铁蛋白干扰素-Α毕赤酵母
- 大肠杆菌N~α-乙酰转移酶RimL^E的表达、纯化及活性测定
- 2006年
- 目的:在体外鉴定大肠杆菌Nα-乙酰转移酶RimL(RimLE)的功能。RimL可以通过将原核生物的核糖体蛋白L12的N端氨基乙酰化,使其转化成L7。方法:通过PCR从大肠杆菌基因组中钓取RimLE和L12/L7E的基因,将其插入pET系统,转化大肠杆菌BL21(DE3),培养后提取、纯化得到RimLE和L12E。结果:RimLE在体外可将L12E的N端氨基乙酰化,最大反应速率为25.63/min。结论:为研究原核生物中Nα-乙酰化的分子机制及其功能奠定了基础。
- 苗林李彦英方宏清陈惠鹏
- 胸腺素α1的乙酰化修饰不依赖于乙酰转移酶RimL被引量：3
- 2009年
- 目的:考察大肠杆菌乙酰转移酶RimL对胸腺素α1(Tα1)乙酰化修饰的影响。方法:构建含500bp同源臂的卡那抗性基因打靶片段,利用Red同源重组系统,使大肠杆菌BL21(DE3)的rimL基因插入失活,随后导入质粒pCP20去除抗性基因,构建突变菌株rimL-BL21(DE3);将重组质粒pET-Tα1-L12分别转入出发菌株和突变菌株中进行表达,经固定金属离子亲和层析和反向高效液相层析后,将所得纯品进行质谱分析,精确测定相对分子质量。结果:PCR鉴定结果证明成功敲除rimL基因;质谱结果表明,rimL基因敲除菌中所表达的Tα1-L12融合蛋白与出发菌株一样,均有部分乙酰化修饰。结论:Tα1的乙酰化修饰并不依赖于RimL。
- 张旭苗林方宏清戴红梅李树龙沈明山陈惠鹏
- 关键词：胸腺素Α1乙酰化RED重组
- 鼠羧肽酶原B在毕赤酵母中的表达、纯化与鉴定被引量：7
- 2007年
- 为了在毕赤酵母中表达鼠羧肽酶原B(procarboxypeptidaseB,proCPB)蛋白,以RT-PCR法从SD鼠胰腺细胞中克隆了proCPB基因,将其插入pPIC9载体,PEG1000介导转入毕赤酵母GS115细胞,在甲醇的诱导下,实现了proCPB在毕赤酵母中的成功表达。通过发酵条件的优化,使用BMGY(pH6·0)培养基,添加0·5%的酪蛋白水解物,于28℃,在起始OD600达10·0时,每隔12h补加0·5%的甲醇,重组酵母GS115-proCPB表达的产物量可达到最高(500mg/L),表达时间可达120h,表达的目的蛋白占总蛋白的94%以上。通过纯化条件的优化,采用两步疏水层析,可使目的蛋白的纯度达96%以上,蛋白得率达38%,重组proCPB活化后所得CPB的比活力可达110u/mg(CPB标准品为180u/mg)。相对分子量测定表明重组蛋白的分子量与理论值极相近,N-端氨基酸测序进一步表明proCPB基因在毕赤酵母中得到了正确的表达和翻译后加工修饰。
- 王德解苗林陈宏李彦英陈惠鹏方宏清
- 关键词：羧肽酶B毕赤酵母蛋白纯化
