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王扬
作品数:
4
被引量:10
H指数:2
供职机构:
第二军医大学附属长海医院血液内科
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发文基金:
国家自然科学基金
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相关领域:
医药卫生
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合作作者
杨建民
第二军医大学附属长海医院血液内...
徐丽丽
第二军医大学附属长海医院血液内...
程辉
第二军医大学附属长海医院血液内...
唐古生
第二军医大学附属长海医院血液内...
阮婕
复旦大学生命科学学院遗传学研究...
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王扬
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骨质疏松对椎体骨折的影响机制
被引量:5
2000年
李明
王扬
单晓巍
侯铁胜
关键词:
骨质疏松
椎体骨折
生物力学机制
CD19基因过表达K562细胞株及NOD-SCID小鼠皮下移植瘤模型的建立
2015年
目的建立人CD19基因过表达的K562细胞株(CD19.K562)NOD.SCID小鼠皮下移植瘤模型。方法克隆人CD19基因构建MigRl-CD19反转录病毒载体,转入Plat—A包装细胞,病毒上清转染K562细胞,反转录聚合酶链反应(PCR)及流式细胞术检测转染细胞CD19基因和蛋白表达,体外反复传代获得CD19-K562稳定转染细胞株,锥虫蓝染色,细胞计数检测细胞增殖,AnnexinV/碘化丙啶(PI)双染流式细胞术检测细胞凋亡。CD19.K562细胞株皮下接种NOD-SCID小鼠并经体内外传代后建立移植瘤亚系CD19.K562-a,建立NOD—SCID小鼠皮下移植瘤模型。应用反转录PCR、瑞特染色、免疫组织化学等方法验证CD19.K562-a细胞性质。结果成功建立了人CD19.K562细胞稳定株,CD19阳性率(99.80±0.17)%。CD19-K562细胞增殖、凋亡未受转染及传代影响。CD19-K562细胞稳定株皮下接种NOD.SCID小鼠后经体外结合体内传代建立移植瘤亚系CD19-K562-a,其CD19阳性率为(99.78±0.04)%,CD19-K562.a和CD19.K562细胞均呈未分化形态。CD19.K562-a皮下接种NOD.SCID小鼠成功建立移植瘤模型,CD19.K562-a瘤体CD19基因表达强阳性。结论通过构建MigR1-CD19重组载体获得CD19基因过表达的K562稳定转染细胞株(CD19.K562),同时采用体外结合体内传代建立稳定成瘤的NOD.SCID小鼠移植瘤亚系CD19-K562.a并成功建立NOD—SCID小鼠皮下移植瘤模型。
王扬
程辉
陈科婷
何妙侠
阮婕
唐古生
杨建民
关键词:
K562细胞
异种移植模型
利用MigR1质粒构建CD19-CAR逆转录病毒载体优化其对人原代T细胞的转染效率
被引量:3
2015年
目的优化二代CD19嵌合抗原受体(CD19-CAR)逆转录病毒载体对人原代T细胞的转染效率。方法应用重组DNA技术将CD19.CAR构建人逆转录病毒载体,转入plat-A包装细胞收集病毒上清并转染人原代T细胞及K562细胞系,采用流式细胞术检测不同条件下的转染效率,用RT-PCR方法检测目的基因的表达情况,用ELISA法检测IFN-γ、TNF-α表达水平。结果①MigR1-CD19-CAR逆转录病毒载体成功构建后包装高滴度逆转率病毒;②相同条件下,MigR1-CD19-CAR逆转录病毒对K562细胞系转染效率显著高于T细胞;③对T细胞,离心120min组的转染率为(54.5±14.6)%,明显高于未离心组、离心30min组及离心60min组(P值均〈0.05);④CD3/CD28磁珠与rhIL-2联合对人T细胞活化扩增效率个体差异显著,根据扩增倍数优化个体转染时机可提高转染效率(最高达69.3%),且RT-PCR检测证实CD19.CAR目的基因在转染后72hT细胞中高效特异性转录;⑤CD19-CAR-T细胞与CD19.K562细胞共培养组IFN-γ、TNF-α表达水平均增加,分别为(13230±1543)pg/ml、(4217±211)pg/ml,与阴性对照组比较差异均有统计学意义(P值均〈0.01)。结论通过MigR1-CD19-CAR逆转录病毒载体转染人原代T细胞,并通过延长离心转染时间、根据扩增倍数确定个体转染时机而成功优化转染效率,RT-PCR检测CD19-CAR目的基因在转染后人T细胞中高效特异性转录,CD19-CAR-T细胞特异性识别靶细胞引发IFN-γ、TNF-α表达水平增加。
王扬
唐古生
徐丽丽
阮婕
程辉
周虹
华亦斐
胡晓霞
顾海慧
钱宝华
王健民
杨建民
关键词:
质粒
转染
细胞因子类
嵌合抗原受体T细胞在B细胞性血液肿瘤中的研究进展
被引量:2
2014年
嵌合抗原受体(CAR)转染的T细胞通过释放细胞因子及细胞毒性T淋巴细胞(CTL)效应可高效杀伤靶抗原阳性的肿瘤细胞,且不受相容性复合体(MHC)的限制.近年欧美多个癌症中心的临床试验表明,CD19靶向的CAR-T细胞输注不仅可使复发状态的B细胞急性淋巴细胞白血病(B-ALL)患者达完全缓解,且分子水平的微小残留病(MRD)也可转阴.其在慢性淋巴细胞白血病、B细胞性恶性淋巴瘤患者中也取得了显著疗效,相信不久的将来该技术必将成为肿瘤综合治疗的重要手段.
徐丽丽
王扬
杨建民
关键词:
免疫治疗
基因治疗
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