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基质金属蛋白酶-2、基质金属蛋白酶-9及其抑制剂-2在诱导多能干细胞来源神经干细胞受损中的表达: 2014年; 神经损伤与细胞外基质（ECM）中基质金属蛋白酶（MMPs）及抑制剂（TIMPs）的调节有关[1].我们通过采用H2O2的刺激在体外造成诱导多功能干细胞来源的神经干细胞（iPSCs-NSCs）的损伤,观察MMP-2、MMP-9和TIMP-2在神经损伤过程中的变化.; 舒涛庞卯戎利民刘畅王娟周葳王璇刘斌; 关键词：基质金属蛋白酶-2 基质金属蛋白酶-9 干细胞来源抑制剂-2 TIMP-2

Sox2诱导小鼠胚胎成纤维细胞直接重编程为神经干细胞被引量：2: 2015年; 目的：探讨Sox2诱导小鼠胚胎成纤维细胞（ mouse embryonic fibroblasts ， MEFs）直接重编程为神经干细胞的方法，为诱导神经干细胞（induced neural stem cells ， iNSCs）作为种子细胞治疗脊髓损伤（spinal cord injury， SCI）奠定实验基础。方法：逆转录病毒感染Sox2转录因子的MEFs在神经干细胞培养基中贴壁培养10 d。随后，悬浮、贴壁反复循环培养3次。 Real-time PCR检测神经干细胞标志基因和多潜能标志基因的表达。 iNSCs在分化培养基中贴壁培养7～14 d，免疫荧光分别检测神经干细胞、神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞的标志物nes-tin、MAP2、GFAP和MBP的表达。将iNSCs显微注射至小鼠大脑皮质，7～14 d后免疫荧光检测神经细胞标志物nestin、MAP2、GFAP和MBP的表达。结果：Real-time PCR显示iNSCs的多种神经干细胞标志基因nestin、Blbp、Pax6和zbtb16表达较诱导前显著增高（P＜0.05），且iNSCs不表达多潜能相关基因Nanog、Oct4和zfp42。免疫荧光显示iNSCs高表达神经干细胞标志物nestin。免疫荧光同时表明iNSCs可在体内外存活并分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞。结论：Sox2可以诱导MEFs直接重编程为神经干细胞。 iNSCs具有自我更新的能力，且在体内外都具有三向分化潜能，可作为修复SCI合适的种子细胞。; 刘畅戎利民刘斌; 关键词：SOX2 小鼠胚胎成纤维细胞神经干细胞

丹酚酸B联合iPSCs-NSCs对大鼠脑缺血再灌注损伤后神经功能的修复作用及机制研究被引量：1: 2016年; 目的探讨丹酚酸B联合诱导多能干细胞来源的神经干细胞（iPSCs-NSCs）对大鼠脑缺血再灌注损伤后神经功能的修复作用，以及对基质金属蛋白酶-2（MMP-2）及其抑制剂金属蛋白酶组织抑制因子-2（TIMP-2）表达的影响。并观察蛋白激酶B（Akt）信号传导通路在该过程中的作用。方法将诱导多能干细胞（iPSCs）诱导分化为神经干细胞（NSCs），并行巢蛋白（nestin）免疫荧光染色。（1）其后进一步诱导分化为神经元，并分为4组：常规培养基组、丹酚酸B组（加入丹酚酸B50μmol／L）、丹酚酸B＋GM6001组（加入丹酚酸B50μmol／L、GM6001 25μmol／L）、丹酚酸B＋LY294002组（加入丹酚酸B50μmol／L、LY294002 25μmol／L）。分化后细胞进行微管相关蛋白2（MAY2）免疫荧光染色和实时定量PCR检测，并采用Western blotting检测常规培养基组、丹酚酸B组、丹酚酸B＋LY294002组MMP-2、pAkt和Akt表达。（2）48只大脑中动脉闭塞模型大鼠按随机数字表法分为3组：PBS空白组、iPSCs-NSCs组、丹酚酸B＋iPSCs-NSCs组，分别于纹状体处局部注射PBS、iPSCs-NSCs及丹酚酸B。造模7、14d后应用Longa评分和SMA评分对各组大鼠神经功能进行评估：7d后采用免疫荧光染色检测nestin表达，14d后采用免疫荧光染色检测MAP2、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）表达；采用Western blotting检测各组MMP-2、TIMP-2表达。结果（1）与常规培养基组、丹酚酸B＋GM6001组、丹酚酸B＋LY294002组比较，丹酚酸B组神经元计数、MAP2 mRNA相对表达量明显增高，差异均有统计学意义（P〈0．05）。与常规培养基组、丹酚酸B＋LY294002组比较，丹酚酸B组MMP-2、pAkt／Akt表达明显增高，差异均有统计学意义（P〈0．05）。（2）造模7、14d后，与PBS空白组、iPSCs-NSCs组比较。丹酚酸B＋iPSCs-NSCs组Longa评分、SMA评分明显降低，差异均有统计学意义（P〈0．05）；14d后，与iPSCs-NSCs组; 舒涛刘畅庞卯王娟戎利民周葳王璇刘斌; 关键词：丹酚酸B 诱导多能干细胞

静电纺丝聚乳酸复合物纳米纤维材料与小鼠神经干细胞的生物相容性被引量：2: 2014年; 背景:聚乳酸聚乙醇酸支架材料广泛应用于组织工程学领域,但其细胞黏附性较差、缺乏活性功能基团以及疏水性较强等缺点限制了其进一步的发展和应用。目的:观察小鼠神经干细胞与静电纺丝聚乳酸聚乙醇酸/聚乙二醇共聚物纳米纤维支架材料的体外相容性。方法:自孕15 d CD-1小鼠胚胎大脑皮质分离培养小鼠神经干细胞。静电纺丝法制备聚乳酸聚乙醇酸和聚乳酸聚乙醇酸/聚乙二醇纳米纤维支架材料,扫描电镜观察材料结构;取第5代神经干细胞分别接种于聚乳酸聚乙醇酸和静电纺丝聚乳酸聚乙醇酸/聚乙二醇纳米纤维支架材料上,进行体外培养。结果与结论:扫描电镜检测显示,两种支架材料呈现相互交联的多孔网状结构。聚乳酸聚乙醇酸组和静电纺丝聚乳酸聚乙醇酸/聚乙二醇组纤维直径和孔隙率差异无显著性意义(P>0.05)。CCK-8检测显示,两种材料无明显细胞毒性。神经干细胞在支架材料中生长良好,两组吸光度值均随培养时间延长而增大,两组在培养1,3,5,7,9,11 d吸光度值差异均有显著性意义(P<0.05)。两组材料培养3,6,9 h,静电纺丝聚乳酸聚乙醇酸/聚乙二醇组的细胞黏附率明显高于聚乳酸聚乙醇酸组(P<0.05)。Hoechst染色显示两组细胞核质均染,形态正常,静电纺丝聚乳酸聚乙醇酸/聚乙二醇组细胞数量明显多于聚乳酸聚乙醇酸组(P<0.05)。扫描电镜观察显示,与聚乳酸聚乙醇酸组相比,静电纺丝聚乳酸聚乙醇酸/聚乙二醇组神经干细胞在支架上的生长情况和基质分泌更好。结果说明,静电纺丝法制备的静电纺丝聚乳酸聚乙醇酸/聚乙二醇纳米纤维支架细胞生物相容性良好,安全无毒,具备合适的孔径和孔隙率,适宜神经干细胞生长,是一种适用于组织工程优质的支架载体。; 刘畅戎利民李尚福庞卯杨阳刘斌; 关键词：静电纺丝聚乳酸聚乙醇酸生物相容性细胞毒性国家自然科学基金

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刘畅

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