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排序方式：

猪RBP-4基因原核表达载体的构建及表达被引量：1: 2014年; 为构建猪RBP-4基因原核表达载体,并在大肠杆菌中表达蛋白。取成年母猪正常卵巢组织提取总RNA,RT-PCR后回收扩增产物,构建表达载体pEASY-E1-RBP4,转化BL21(DE3)pLysS,IPTG诱导表达。测序结果显示,RT-PCR获得的cDNA全长序列与GenBank中的序列基本一致。原核表达产物经SDS-PAGE电泳鉴定,其以包涵体形式表达。试验成功构建了猪RBP4基因原核表达载体,并在大肠杆菌中表达,为后续蛋白纯化及抗体的制备奠定基础。; 孙丽娜李万宏陈树雄陈超陈璐李纯锦周虚; 关键词：原核表达

次氯酸钠对柔嫩艾美耳球虫卵囊孢子化的影响研究: 2006年; 给14日龄海兰鸡雏接种E.tenella杂交F2株(本实验室培育),7 d后扑杀,刮取盲肠卵囊制成卵囊悬浊液。用不同浓度次氯酸钠(含活性氯不低于7.5%)分别处理5 m in、10 m in、15 m in、20 m in后,离心洗涤并进行卵囊计数,加2.5%的重铬酸钾,28℃环境下孢子化。于60 h取样检查其孢子化率。结果表明,高浓度长时间的次氯酸钠处理对E.tenella球虫卵囊孢子化率有显著影响(P<0.05)。; 陈超张西臣李建华尹继刚姚龙泉陈丽凤; 关键词：次氯酸钠 E.TENELLA 孢子化率

柔嫩艾美耳球虫卵囊cDNA文库的初建被引量：5: 2005年; 利用Trizol一步法从柔嫩艾美耳球虫孢子化10h卵囊提取总RNA。利用poly(A)QuikmRNAIsolationkit分离纯化了mRNA。采用cDNASynthesisKit合成cDNA,以XR-λZAP为载体,构建了cDNA表达文库,经蓝白斑筛选,其重组率为98%,滴度为0·9×106pfu/mL,扩增后滴度为1×109pfu/mL。随机取10个克隆,提取λDNA后,经PCR鉴定,插入片段长度大于0·4Kb。该cDNA表达文库的构建为下一步功能基因的筛选等奠定了良好基础。; 李建华张西臣陈丽凤尹继刚陈超; 关键词：柔嫩艾美耳球虫 CDNA文库 CDNA文库球虫卵囊 CDNA表达文库柔嫩艾美耳球虫 PCR鉴定

犬贾第虫病毒(长春株)全基因组序列分析被引量：2: 2006年; 根据已报道的人源蓝氏贾第虫病毒序列设计了互相重叠的6对特异性引物,以犬贾第虫(长春株)纯培养滋养体总核酸为模板进行RT-PCR。PCR产物连接到pMD18-T载体进行测序,通过BLAST在GenBank进行同源性搜索,并用DNAMAN分子生物学软件进行分析。结果测得我国犬贾第虫病毒(长春株)基因组全长为6 276bp(DQ238861),编码1个有887个氨基酸残基的衣壳蛋白和1 056个氨基酸残基的融合蛋白,这2个阅读框被-1核糖体移码框分开,重叠处有220 nt。基因组中G+C占49.62%。其序列与国外报道的人源蓝氏贾第虫病毒(L13218)序列同源性为94.62%,编码的氨基酸同源性为93.50%;与国内人源蓝氏贾第虫病毒(AF525216)序列同源性为98.88%,编码的氨基酸同源性为98.30%。; 陈丽凤李建华张西臣刘全赵月萍曹利利陈超; 关键词：全长CDNA序列基因组

hERβ全长基因真核表达载体pEGFP-C1-hERβ的构建及其在PC-3M细胞中的表达被引量：1: 2006年; 目的:构建人雌激素受体β(hERβ)全长基因的真核表达载体pEGFP-C1-hERβ,并转染激素非依赖性前列腺癌细胞株PC-3M。方法:采用RT-PCR法从卵巢囊肿患者切除的部分正常卵巢组织中钓取hERβ全长基因(1 593 bp),与pMD18-T载体连接做全自动序列测定。将测序正确的克隆质粒pMD18-T-hERβ和表达载体pEGFP-C1分别用HindⅢ和BamHⅠ进行双酶切,应用基因重组技术构建hERβ全长基因真核表达载体pEGFP-C1-hERβ。质粒经HindⅢ和BamHⅠ双酶切和PCR电泳鉴定后,采用脂质体转染法转染PC-3M细胞。结果:重组质粒经限制性酶切鉴定得到与hERβ全长基因长度一致(1 612 bp)的酶切产物;测序分析证实,PCR产物与GenBank上登录的hERβ基因(NM_001437)序列完全一致,表明成功地完成了hERβ的扩增和表达载体的构建;荧光显微镜下可见转染的PC-3M细胞有绿色荧光蛋白的表达;PCR测定分析,转染细胞hERβ的表达增加。结论:构建完成真核表达载体pEGFP-C1-hER,βhERβ基因在PC-3M细胞内成功表达。; 李峰邵月婷何静春秦宣锋陈超王驭良孙连坤李扬赵雪俭; 关键词：真核表达

脑源性神经营养因子在猪卵泡中的表达被引量：2: 2012年; 以猪卵泡期和黄体期的不同直径（〈3 mm,3~6mm,〉6mm）卵泡颗粒细胞和卵泡液为研究对象,采用RT-PCR、ELISA技术检测脑源性神经营养因子（BDNF）在不同直径猪卵泡的颗粒细胞和卵泡液中mRNA和蛋白的表达情况。结果表明：BDNF在不同直径的卵泡颗粒细胞和卵泡液中均有表达。各个直径的卵泡颗粒细胞之间表达差异显著,各个直径卵泡液中的含量差异显著。大卵泡颗粒细胞表达量最低,小卵泡液中的含量最低。卵泡期和黄体期卵巢上,中等卵泡中颗粒细胞和卵泡液中BDNF的表达量差异显著。; 芭帕婉侯晓峰王春强李万宏陈超周虚; 关键词：脑源性神经营养因子颗粒细胞

miRNA-205在猪卵母细胞成熟过程中表达规律及其调控作用的研究: 2014年; 本试验旨在探索miRNA-205在猪卵母细胞成熟过程中表达规律及其调控功能。应用生物学软件TargetScan和microRNA.org对miRNA-205靶基因进行预测,利用实时荧光定量PCR方法分别检测miRNA-205及其靶基因在猪卵丘卵母细胞复合体(cumulus-oocyte complexes,COCs)成熟过程中0、24和48h表达量。结果表明,miRNA-205在猪COCs成熟过程中表达呈上升趋势,0h表达量最低,48h表达量最高。添加FSH、LH和EGF的成熟液组与成熟基液组相比,miRNA-205表达量显著下调,长正五聚蛋白(PTX3)表达量极显著上调(P<0.01),PTX3与miRNA-205的表达量呈负相关,卵丘细胞扩散标记基因肿瘤致死因子(TNFAIP6)和透明质酸合成酶(HAS2)的表达量极显著上调(P<0.01)。由此推断,miRNA-205保守序列可能与PTX3基因3′-UTR区特异性结合参与卵丘细胞扩散的调控。; 陈超李万宏孙丽娜陈树雄陈璐李纯锦周虚; 关键词：MIRNA 实时荧光定量PCR 卵母细胞成熟

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陈超