陈圆
- 作品数：3 被引量：1H指数：1
- 供职机构：江苏大学基础医学与医学技术学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省医学领军人才基金江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- TNFα-Tumstatin融合基因腺病毒载体的构建及其在人脐带间质干细胞中的表达被引量：1
- 2008年
- 目的:构建携带绿色荧光蛋白的TNFα-Tumstatin融合基因腺病毒表达载体,转染人脐带间质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUCMSCs)。方法:设计含有GM-CSF信号肽序列和BglⅡ及HindⅢ酶切位点的引物,PCR扩增TNFα-Tumstatin,将扩增产物亚克隆到穿梭质粒pAdTrack-CMV上,重组穿梭质粒经PmeⅠ线性化后转化含有腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的BJ5183中同源重组。筛选获得含有融合基因的重组腺病毒质粒,酶切鉴定并测序。重组病毒质粒用PacⅠ酶切线性化后转染293A细胞,经过包装、扩增后感染hUCMSCs并检测细胞内融合基因的表达。结果:重组腺病毒质粒经PCR和PacⅠ酶切鉴定,证实含有TNFα-Tumstatin融合基因,测序结果和设计片段的序列一致。重组腺病毒感染的hUCMSCs表达绿色荧光蛋白和融合基因。结论:成功构建了TNFα-Tumstatin融合基因的腺病毒表达载体,能高效率感染hUCMSCs,为进一步研究融合基因修饰的hUCMSCs抗肿瘤效应奠定了基础。
- 周忠海许文荣朱伟乔纯王兴忠陈圆司煜安徐静周洪兴张蕾蕾李继刚钱晖
- 关键词：腺病毒载体融合基因细胞转染
- 人Nanog基因重组腺病毒载体的构建及其在人脐带间充质干细胞中的表达
- 2011年
- 目的构建重组人Nanog基因腺病毒载体(Ad-Nanog),转染人脐带间充质干细胞(hucMSCs),用于后续研究。方法设计含有KpnⅠ及XhoⅠ酶切位点的引物,PCR扩增Nanog基因,将扩增产物亚克隆到pAdTrack-CMV穿梭质粒上,经双酶切和基因测序鉴定,重组穿梭质粒经PmeⅠ线性化后,在含有腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的BJ5183中同源重组,筛选获得Ad-Nanog重组腺病毒质粒。经PacⅠ酶切线性化,脂质体转染293A细胞,包装和扩增病毒,并感染hucMSCs。结果重组腺病毒质粒经PCR和双酶切鉴定正确,测序结果和设计片段的序列一致。荧光显微镜下观察在感染的hucMSCs中绿色荧光蛋白高效表达。结论成功构建了Nanog腺病毒表达载体,能高效转染hucMSCs,可用于后续转基因的研究。
- 孙靖徐哲钱茜严家来陈圆张徐高硕钱晖许文荣
- 关键词：NANOG脐带间充质干细胞腺病毒载体
- hHGF腺病毒载体的构建及其在人脐带间质干细胞中的表达
- 2010年
- 目的:构建人重组肝细胞生长因子(human hepatocyte growth factor,hHGF)基因腺病毒载体(Ad-HGF),转染人脐带间质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hucMSCs),为转基因治疗提供实验基础。方法:设计含有SalⅠ及XbaⅠ酶切位点的引物,PCR扩增hHGF,将扩增产物克隆到带有绿色荧光蛋白(green fluorescenceprotein,GFP)标记的pAdTrack-CMV穿梭质粒上。重组穿梭质粒经PmeⅠ线性化后,与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1在BJ5183中同源重组,筛选获得含有hHGF的重组腺病毒质粒,PCR、酶切鉴定并测序。重组病毒质粒用PacⅠ酶切线性化,脂质体转染293A细胞,经3轮扩增,制备高效表达的AdGFP/HGF,并转染hucMSCs。结果:重组腺病毒质粒经PCR和SalⅠ,XbaⅠ酶切鉴定,证实含有HGF基因,测序结果和设计片段的序列一致。荧光显微镜下发现293A细胞发光率几乎为100%,感染的hucMSCs亦可表达绿色荧光蛋白。结论:成功构建了hHGF腺病毒表达载体,并获得高滴度的病毒,能高效感染hucMSCs,为后续研究奠定了基础。
- 陈圆李汉华赵亚娟吴晓丹王梅许晓蒙谢颖许文荣
- 关键词：肝细胞生长因子人脐带间质干细胞腺病毒载体
