陆梁
- 作品数：13 被引量：69H指数：4
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 黄色素抑制血管平滑肌细胞增殖与3种蛋白激酶的关系被引量：45
- 2000年
- 目的 :研究黄色素 (SY)对血管平滑肌细胞 (VSMC)增殖的作用及机制。方法 :以培养的家兔VSMC为材料 ,用细胞计数和32 P 参入法 ,观察SY对VSMC的增殖及 3种蛋白激酶活性。结果 :SY抑制VSMC的增殖 ,且呈剂量和时间依赖性 ,1 0mg·mL-1作用最强 ,抑制率为 5 4 6% ;SY抑制VSMC的DNA合成 ,1 0mg·mL-1作用 2d ,抑制率为 80 2 % ;在一定浓度范围内 ,随着SY浓度的升高 ,VSMC中 3种蛋白激酶 (TPK ,PKC及MAPK)活性下降。结论 :SY对VSMC的增殖有抑制作用 。
- 陆梁胡书群张光毅
- 关键词：血管平滑肌细胞黄色素蛋白激酶细胞增殖
- 小鼠IL-18 cDNA克隆及在H_(22)肝癌细胞中的初步表达
- 2002年
- 目的 构建小鼠白细胞介素-18（mIL-18）逆转录病毒载体,实现mIL-18在小鼠H22肝癌细胞中表达。方法 用RT-PCR方法从小鼠肝脏细胞中扩增出mIL-18 cDNA,克隆到载体pBluscript中,测序后亚克隆到逆转录病毒载体pLNCX中。pLNCX/mIL-18重组子用脂质体介导的方法转染PA317包装细胞,用400μmL G418进行筛选。挑取筛选得到的阳性克隆扩大培养,取上清感染NIH3T3细胞和H22肝癌细胞。用感染后的H22细胞上清诱导小鼠脾细胞IFN-r生成能力来检测H22细胞分泌mIL-18的情况。结果 用NH3T3细胞测得病毒滴度为1.5×105克隆形成单位CFU/mL,转染后的H22肝癌细胞上清对小鼠脾细胞具有显著的IFN-r诱生作用。结论 pLNCX/mIL-18重组子构建成功,初步证明转染后的H22肝癌细胞能够表达IL-18。
- 周虎陆梁裴冬生赵惠仁
- 关键词：白细胞介素-18逆转录病毒载体克隆CDNA肝癌癌细胞
- 小鼠白细胞介素18在大肠杆菌中的表达、纯化及抗肿瘤作用研究被引量：5
- 2001年
- 用RT PCR从小鼠肝脏细胞中扩增出小鼠白细胞介素 18(mIL 18)的cDNA ,克隆到表达载体pJW2中 ,经热诱导后在大肠杆菌JM10 9中表达。表达的重组mIL 18(rmIL 18)主要以包涵体形式存在 ,占菌体总蛋白质的 18%。包涵体用 5mol L尿素溶解后 ,经SephadexG 10 0柱纯化。纯化的蛋白质经透析复性 ,在 0 5mg LConA存在的条件下 ,能够对小鼠脾细胞具有剂量依赖的IFN γ诱生作用。以 1× 10 5 H2 2 肝癌细胞腹腔注射昆明小鼠 ,构建小鼠H2 2 肝癌腹水瘤模型。分别在肿瘤细胞接种后 1、4和 8d ,用 10 μg纯化产物对荷瘤小鼠进行腹腔注射。结果显示rmIL 18注射组小鼠死亡速率延缓 ,生存率显著提高 (P <0 .0 1) ,达到 6 2 5 %。首次证明mIL 18对小鼠H2 2 肝癌具有显著的抑制作用 ,经rmIL 18作用后存活小鼠具有对H2 2
- 周虎赵惠仁裴冬生陆梁胡书群
- 关键词：白细胞介素18纯化复性H22肝癌抗肿瘤作用
- 小鼠白细胞介素-18抗肝癌作用的初步研究被引量：1
- 2005年
- 目的研究小鼠白细胞介素-18(mIL-18)对H22肝癌的作用。方法以1×105和1×106H22肝癌细胞腹腔注射昆明小鼠构建小鼠H22肝癌腹水瘤模型。在接种H22细胞后的1、48、天,每天用10μg mIL-18腹腔注射荷瘤小鼠,连续注射5天;或者在接种后1天,分别用5μg、10μg和20μg不同剂量的mIL-18腹腔注射小鼠。mIL-18作用后存活的小鼠,再次腹腔注射1×105H22肝癌细胞。结果构建得到小鼠H22肝癌腹水瘤模型,在接种1×105H22肝癌细胞后1、4天注射mIL-18的小鼠比对照组小鼠的存活率显著升高(P<0.05),存活小鼠能抵抗再次接种的H22肝癌细胞的攻击。结论mIL-18对小鼠H22肝癌具有显著抑制作用,mIL-18作用后存活的小鼠具有对H22肝癌细胞的免疫记忆性。
- 胡书群周虎裴冬生陆梁张光毅
- 关键词：H22肝癌免疫记忆
- 猪脾脏酪氨酸蛋白激酶的研究
- 1991年
- 采用DEAE-Sepharose CL-6B离子交换层析和Tyrosine-agarose亲和层析,首次从猪脾脏30000Xg颗粒中部分纯化了酪氨酸蛋白激酶,其比活性约为12000pmol.min^(-1).mg^(-1)。磷酸氨基酸分析表明,该酶能催化合成多肽poly(Glu.Ala.Tyr)_n(6:3:1)中的酪氨酸(Tyr)磷酸化,对该多肤废物和ATP的Km值分别约为2mg/mL和15μmol/L。Mn^(2+)对部分纯化的酪氨酸蛋白激酶的最大激活活性高于Mg^(2+),其AC_(50)分别约为1.4mmol/L和8mmol/L;发现红花素能强烈地抑制该酶活性,其IC_(50)约为125μmol/L。
- 张光毅陆梁赵文君赵升皓向仁德
- 关键词：脾脏蛋白激酶
- 大鼠βB2-晶体蛋白的表达纯化及多克隆抗体的制备被引量：2
- 2011年
- 目的表达并纯化βB2-晶体蛋白,制备其多克隆抗体,用以研究βB2-晶体蛋白聚合的机制。方法用RT-PCR的方法扩增了βB2-晶体蛋白的cDNA并克隆到原核表达载体pMON5473中。用萘啶酮酸诱导recA启动子后,蛋白质在大肠杆菌中得到了高效表达。表达的蛋白质用DEAE纤维素层析和凝胶过滤纯化,SDS-PAGE显示一条带。与佐剂混合后免疫新西兰大白兔。结果纯化了大鼠βB2-晶体蛋白,成功制备了其多克隆抗体。结论制备的多克隆抗体为下阶段的研究提供了重要的实验材料。
- 胡书群裴冬生陆梁赵惠仁
- 关键词：纯化抗体
- 人白细胞介素18的原核表达及多克隆抗体的制备被引量：8
- 2002年
- 目的 在原核系统中表达并纯化人白细胞介素 18(hIL 18) ,制备兔抗人白细胞介素 18多克隆抗体。方法 用RT PCR扩增出hIL 18的cDNA ,克隆到原核表达载体pJW2中 ,转化大肠杆菌JM10 1中诱导表达并纯化。用纯化的人白细胞介素 18免疫新西兰兔制备多克隆抗体。结果 克隆得到序列正确的hIL 18cDNA ,与载体连接后转化入大肠杆菌JM10 1中诱导表达并成功纯化 ,并用纯化的人白细胞介素 18成功制备了兔抗人白细胞介素 18多克隆抗体。
- 裴冬生孙亚锋傅奕胡书群陆梁赵惠仁
- 关键词：白细胞介素18原核表达多克隆抗体
- 人白细胞介素-10cDNA的克隆
- 2002年
- 目的 克隆人白细胞介素 10 (hIL - 10 )cDNA的全长序列 ,为其分子生物学利用奠定基础。方法 无菌条件抽取正常成人外周血 15ml,分离单核细胞 ,用刀豆素A(ConA)刺激培养 2 4h ;离心得到一定量细胞 ,加入变性液 ,一步法提取细胞总RNA ;反转录合成IL - 10的第 1条链 ,用自己设计的特异性上下游引物进行PCR扩增 ,得到期望分子量的PCR产物 ;酶切后插入PcDNA3载体 ,转染感受态细胞进行筛选制备 ,并行酶切鉴定和测序。结果 外周血单核细胞经ConA刺激后IL - 10转录水平增加 ,从提取的RNA反转录产物中容易扩增出期望分子量的PCR产物 ,酶切鉴定证明得到的IL - 10cDNA分子量与基因库报告的相近 ,测序结果表明得到的IL - 10cDNA序列与基因库报告的序列完全一致。结论 人的IL - 10cDNA全长序列被成功克隆。
- 刘俊杰陈家存胡书群陆梁裴冬生
- 关键词：CDNA克隆
- 人IL-18结合蛋白cDNA的克隆及其逆转录病毒载体的构建
- 2001年
- 目的 克隆人白细胞介素 - 18结合蛋白 (hIL - 18BP)的cDNA及构建hIL - 18BP逆转录病毒载体 ,以研究IL - 18BP与IL - 18相互作用的机制及自身免疫性疾病的基因治疗。方法 从中国汉族人胎盘组织中提取总RNA ,用RT -PCR方法扩增hIL - 18BPcDNA ,与载体pcDNA3连接 ,转化大肠杆菌DH5α。得到的重组质粒经鉴定正确后 ,再作为模板进行PCR。PCR产物插入逆转录病毒载体pLNCX中。结果 RT -PCR扩增出全长 5 85bp的hIL - 18BPcDNA ,2次酶切鉴定证明hIL - 18BP已分别与pcDNA3、pLNCX重组。 2次测序结果均与国外文献报道的hIL - 18BP的序列一致。结论 成功地克隆了中国人IL - 18BPcDNA ,并构建了重组hIL -
- 傅奕赵惠仁陆梁
- 关键词：克隆逆转录病毒载体
- 人IL-18突变体D134R的构建及其生物学活性分析被引量：1
- 2008年
- 目的研究IL-18结构与功能的关系。方法用重叠延伸PCR定点突变技术构建人白介素18(hIL-18)突变体hIL-18D134R。将突变体cDNA与原核表达载体pJW2重组并转化大肠杆菌DH5α。经热诱导表达蛋白质,SDS-PAGE证实,表达的目的蛋白质以包涵体形式存在。菌体经超声破碎后,包涵体以2 mol/L尿素洗涤,8 mol/L尿素溶解,并经Sephadex G-75柱纯化及稀释、透析复性。然后以诱导人外周血单个核细胞(PBMC)产生干扰素-γ(IFN-γ)及对核因子-κB(NF-κB)的激活能力为指标,检测突变体的生物学活性。结果构建的突变体hIL-18D134R可在大肠杆菌DH5α中高效表达,经包涵体洗涤和Sephadex G-75柱纯化后,纯度达92%以上。突变体D134R对IFN-γ的诱生能力及对NF-κB的激活能力分别为野生型hIL-18的19%和23%。结论在人IL-18的氨基酸序列中,Asp134对其生物学功能有非常重要的作用。
- 傅奕裴冬生陆梁胡书群赵惠仁
- 关键词：白细胞介素18定点突变干扰素-Γ核因子-ΚB
