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静脉血管平滑肌细胞中的多倍体细胞分析: 2014年; 目的探讨流式细胞术分析静脉血管平滑肌细胞多倍体细胞的方法和意义。方法选取普通级健康成年日本大耳白兔2只，雄性，8月龄，大约3 kg;普通级SD大鼠2只，雄性，8周龄，大约200 g。人大隐静脉为2例心脏冠状动脉旁路移植术中修补血管所得。在麻醉日本大耳白兔和大鼠后开腹腔获取下腔静脉，采用多种酶组合的消化液消化兔、大鼠以及人的静脉血管得到适合流式细胞检测的静脉血管平滑肌单细胞悬液，用碘化丙啶标记细胞，利用细胞流式仪分析兔、大鼠以及人的静脉血管平滑肌单细胞悬液各5 000个细胞，检测细胞DNA含量，DNA含量翻倍的细胞为多倍体细胞。并利用荧光原位杂交技术（FISH）验证阳性对照HEK293细胞系中的多倍体的存在。结果流式结果显示分析的5 000个细胞中，阳性对照HEK293细胞的多倍体细胞为1 355个（27.1%），从2例患者中取得的大隐静脉多倍体细胞为310个（6.2%）和250个（5.0%）;2只大鼠的下腔静脉平滑肌细胞中多倍体细胞为360个（7.2%）和450个（9%）;2只兔的下腔静脉平滑肌细胞中多倍体细胞分别为270个（5.4%）和305个（6.1%）。结论成年的静脉血管包括人大隐静脉的平滑肌细胞中普遍存在一定比例的多倍体细胞。; 邱淑兰王克芳朴春梅王绿娅刘飒杜杰; 关键词：静脉血管平滑肌细胞

iCys激光定量成像细胞仪对全心脏化学发光和荧光标记的定量分析: 2014年; 目的:利用iCys激光定量成像细胞仪(iCys research imaging cytometer,RIC)对小鼠全心脏切片中标记的化学发光或荧光信号进行大面积、高速度、高分辨率的扫描,根据所获得图像统计分析小鼠全心脏切片中荧光和化学发光的阳性细胞比例,并分群追踪分析对象的图像以排查假阳性。方法:利用血管紧张素II灌注小鼠,对心脏切片进行巨噬细胞特异性的mac-2抗体的免疫组化,通过光电二极管(photodiode,PD)检测器收集二氨基联苯胺法(DAB染色法)的化学发光信号获得全心脏相关影像,进而分析图片以统计全心脏中的巨噬细胞的阳性面积;利用小鼠心肌梗塞模型后心脏进行末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定法(terminal dexynucleotidyl transferase(TdT)-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL)标记,通过器光电倍增管(photo multiplier tube,PMT)检测器收集荧光信号获得全心脏相关影像,进而分析图片以统计全心脏中的细胞死亡率。结果:400倍放大时iCys激光定量成像细胞仪对小鼠全心脏切片的扫描花费大约20min,获得大约300张局部图片,软件自动拼合成全心脏切片图。通过对全心脏图片的统计分析显示:AngII灌注的全心脏中DAB染色法显示的mac-2抗体阳性巨噬细胞阳性面积为(2.36±0.7)%;全心脏的TUNEL标记后荧光阳性的死亡细胞比率为(32.3±4.1)%。结论:iCys激光定量成像细胞仪可以对病理切片样本中的化学发光以及荧光信号进行大面积、高速度、高清晰的扫描,分析软件可以进行后期的图像的定性定量分析,并且可以通过对分析对象的追踪图像显示以明确统计分析的正确性。; 邱淑兰王克芳王吉静朴春梅杜杰; 关键词：巨噬细胞

熊胆粉联合环磷酰胺用药通过调控肿瘤微环境抑制结直肠癌肝转移作用的研究被引量：11: 2013年; 目的:探讨熊胆粉联合环磷酰胺(cyclophosphamide,cytoxan,CTX)用药通过调节肿瘤炎症微环境对小鼠结直肠癌(colorectal carcinoma,CRC)肝转移模型的增免抑瘤抗转移作用。方法:脾脏原位注射SL4细胞制作小鼠CRC肝转移模型。随机分5组:模型组、CTX组(80mg·kg-1)和CTX联合熊胆粉高、中、低剂量组(300,150,75mg·kg-1)。术后口服灌胃给药12d,于第13天取材,解剖肝脾称重,HE染色,免疫荧光分析;外周血、脾和肝转移瘤进行流式细胞免疫表型分析。结果:CTX组及CTX联合熊胆粉各组肝脾质量明显低于模型组(P<0.05);HE染色和免疫荧光分析表明,正常组织中淋巴细胞浸润较多,肿瘤组织周围有以巨噬细胞为主的大量炎细胞浸润;流式细胞检测结果表明:外周血中,联合治疗组与CTX组相比,T淋巴细胞显著升高(P<0.05),CD4/CD8增加;脾细胞悬液中,联合治疗组与CTX组比较,淋巴细胞总数增加,以B细胞增加较为显著(P<0.05),CD11b,F4/80细胞明显降低(P<0.05);肝转移瘤中,联合治疗后比单独CTX治疗单核巨噬细胞下降(P<0.05)。结论:熊胆粉联合CTX治疗不仅能保肝增免,还可通过调节肿瘤微环境,减少对单核巨噬细胞等的募集起到抗炎进而抗肿瘤转移作用,其中熊胆粉低剂量与CTX联合用药组降低炎症细胞浸润的作用最为显著。; 崔巍刘飒杨敏张婷蔡伦邱淑兰郑娇苗艳菊赵莉敏杜杰; 关键词：熊胆粉环磷酰胺结直肠癌肝转移肿瘤微环境

小动物活体成像生物发光稳定细胞株的构建被引量：2: 2014年; 目的构建能用于小动物活体成像系统的、能稳定表达荧光素酶基因的小鼠Panc02胰腺癌细胞株制作动物模型。方法利用表达荧光素酶基因pGL4.20为载体,转染小鼠Panc02胰腺癌细胞株,通过检测荧光素酶活性,检测其表达效果,通过嘌呤霉素筛选稳定转染细胞株,挑选高表达荧光素酶基因的单克隆细胞株,并利用此细胞株在小动物活体成像系统中确认小鼠胰腺癌皮下肿瘤形成。结果构建了表达荧光素酶基因的Panc02稳定转染细胞株,并且在体内形成皮下肿瘤。结论构建了高表达荧光素酶基因的Panc02稳定转染细胞株。; 朴春梅邱淑兰刘飒王绿娅杜杰; 关键词：活体成像生物发光胰腺癌

流式细胞术分析小鼠外周血免疫细胞全血裂解试剂比较研究被引量：3: 2011年; 本研究探讨流式细胞术外周血样本制备中红细胞裂解液的作用。用流式细胞术检测进口的商品化红细胞裂解液OptiLyse C(Beckman Coulter),FACS Lysing Solution(BD Pharmingen)以及自制裂解液RBC Lysis Buffer裂解小鼠外周血红细胞后免疫细胞的表达情况并进行了对比分析。结果表明,用3种裂解液制备样本中CD3e+、CD3e+CD4+、CD3e+CD8a+、CD3e-CD19+、CD3e-NK1.1+和Gr-1+细胞的百分比均无明显差异(p>0.05);而OptiLyse C裂解液更适于Gr-1+细胞测定,不适于Foxp3+Tregs细胞测定;FACS Lysing Solution和自制RBC LysisBuffer适于Foxp3+Tregs细胞测定。结论:应用自制RBC Lysis Buffer裂解液,按标准化操作程序制备流式样本,能够达到进口的商品化裂解液OptiLyse C的效果,它不仅能满足实验要求,又可降低试剂成本,可推广应用。; 崔巍刘飒蔡伦李玉琳张聪聪邱淑兰; 关键词：流式细胞术免疫细胞

腺苷酸活化蛋白激酶α在宫颈癌中的表达及其作用机制被引量：3: 2016年; 目的研究腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）α在宫颈癌中的表达及其作用机制.方法蛋白质印迹方法检测宫颈癌细胞株HeLa、SiHa细胞中AMPKα1和AMPKα2的表达情况,采用免疫组织化学染色方法检测宫颈癌和正常组织中磷酸化AMPKα （p-AMPKα）的表达情况;采用短干扰RNA（siRNA）降低宫颈癌细胞中AMPKα1和AMPKα2表达水平后,采用蛋白质印迹方法检测相关信号通路、5-溴脱氧尿嘧啶核苷掺入法检测细胞增殖能力.结果 HeLa、SiHa细胞中AMPKα1及AMPKα2均有表达;与正常宫颈组织相比,宫颈癌组织中p-AMPKα表达明显升高[（78.140±2.525）％比（0.209±0.014）％],差异有统计学意义（P＜0.05）.将AMPKα1 siRNA和AMPKα2 siRNA联合转染细胞24 h后,与阴性对照siRNA相比,AMPKα表达水平明显降低,磷酸化雷帕霉素蛋白1（p-mTOR 1）、磷酸化真核生物转录起始因子4E结合蛋白（p-4E-BP1）水平明显升高,细胞增殖能力均明显增强[HeLa细胞：（3.23±0.24）％比（1.50±0.08）％,SiHa细胞：（2.48±0.16）％比（1.11±0.19）％],差异均有统计学意义（均P＜0.05）.结论宫颈癌细胞中AMPKα活性增强,降低AMPKα水平可促进mTOR1的激活,进而增强肿瘤细胞的增殖.; 刘赟赟王克芳邱淑兰朴春梅; 关键词：宫颈癌腺苷酸活化蛋白激酶增殖

人宫颈癌侧群细胞差异微小RNA表达分析被引量：2: 2014年; 目的筛选入宫领癌侧群细胞差异表达的微小RNA（microRNA），方法选取16例行宫颈鳞癌切除的手术标本，进行宫颈癌细胞原代培养，流式细胞仪分选侧群细胞，对比侧群细胞和非侧群细胞的体外自我更新能力和肿瘤形成能力。分别提取侧群细胞和非侧群细胞的总RNA，用microRNA芯片分刖检测侧群细胞和非侧群细胞的micl’oRNA表达谱并进行分析，筛选出差异表达的microRNAi．结果在原代培养的16株宫颈癌细胞中均分选出侧群细胞，比例占（1．67±0．94）％。培养14d后，侧群细胞的克隆形成牢为0．51±0．07，而非侧群细胞的克隆形成率仪为0．05±0．02，侧群细胞和非侧群细胞的克隆形成率比较差异有统计学意义（t=2．828，P〈0．01）．仅1×10^4个侧群细胞即可形成肿瘤，而至少1×10^6个非侧群细胞才能形成肿瘤。microRNA芯片筛选出表达差异在10倍以上的有16条microRNA，其中3条microRNA上测，13条microRNA下调；差异表达超过共同2倍的microRNA有7条，其中3条microRNA上调，4条microRNA下调，结论人宫颈癌侧群细胞具有肿瘤干细胞特性，人宫颈癌侧群细胞表达一些特异的microRNA，; 邱淑兰朴春梅王克芳; 关键词：宫颈癌侧群细胞肿瘤干细胞微小RNA

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邱淑兰

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