目的:利用iCys激光定量成像细胞仪(iCys research imaging cytometer,RIC)对小鼠全心脏切片中标记的化学发光或荧光信号进行大面积、高速度、高分辨率的扫描,根据所获得图像统计分析小鼠全心脏切片中荧光和化学发光的阳性细胞比例,并分群追踪分析对象的图像以排查假阳性。方法:利用血管紧张素II灌注小鼠,对心脏切片进行巨噬细胞特异性的mac-2抗体的免疫组化,通过光电二极管(photodiode,PD)检测器收集二氨基联苯胺法(DAB染色法)的化学发光信号获得全心脏相关影像,进而分析图片以统计全心脏中的巨噬细胞的阳性面积;利用小鼠心肌梗塞模型后心脏进行末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定法(terminal dexynucleotidyl transferase(TdT)-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL)标记,通过器光电倍增管(photo multiplier tube,PMT)检测器收集荧光信号获得全心脏相关影像,进而分析图片以统计全心脏中的细胞死亡率。结果:400倍放大时iCys激光定量成像细胞仪对小鼠全心脏切片的扫描花费大约20min,获得大约300张局部图片,软件自动拼合成全心脏切片图。通过对全心脏图片的统计分析显示:AngII灌注的全心脏中DAB染色法显示的mac-2抗体阳性巨噬细胞阳性面积为(2.36±0.7)%;全心脏的TUNEL标记后荧光阳性的死亡细胞比率为(32.3±4.1)%。结论:iCys激光定量成像细胞仪可以对病理切片样本中的化学发光以及荧光信号进行大面积、高速度、高清晰的扫描,分析软件可以进行后期的图像的定性定量分析,并且可以通过对分析对象的追踪图像显示以明确统计分析的正确性。
目的:探究溴结构域蛋白4(bromodomain-containing protein 4,BRD4)在心肌梗死后心脏损伤中的作用。方法:通过分析公共数据,明确心肌梗死小鼠心脏组织中BRD4在整体和以及各细胞群中的表达变化。构建心肌梗死小鼠模型,设立空白对照组(WT组),心肌梗死组(MI组),药物组(JQ1组,ABBV-744组),术后第6天腹腔注射BRD4抑制剂JQ1或灌胃二代抑制剂ABBV-744,持续22天。MI术后4周,小动物超声影像系统检测小鼠心功能,检测小鼠质量、心脏质量与胫骨长度,天狼星红染色评估梗死区纤维化程度,WGA染色检测心肌细胞横截面积。结果:与心肌梗死组相比,BRD4抑制剂组能够显著改善术后心功能障碍(P<0.01)。转录组学数据表明,BRD4在心肌梗死损伤区域持续高表达。单细胞数据显示,心肌梗死后,成纤维细胞中BRD4阳性细胞比例显著增加,并且在心肌梗死后7、14、30d的成纤维细胞中,BRD4表达持续上调。与心肌梗死组相比,BRD4抑制剂组显著减轻心脏纤维化(P <0.01)。与一代药物组相比,二代药物组心脏纤维化程度显著降低(P<0.01)。结论:抑制表观转录因子BRD4可减轻心肌梗死后心脏损伤,抑制心脏纤维化,并改善心功能。
