谢剑君
- 作品数：21 被引量：28H指数：3
- 供职机构：汕头大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 人食管癌细胞Fascin基因启动子区调控元件
- 本发明涉及基因表达调控，公开了一种人食管癌细胞Fascin1基因启动子区调控元件。本发明首次鉴定了人食管癌细胞Fascin1基因启动子，并将5′端序列逐渐缺失的启动子序列插入报告基因上游构建了一系列真核表达质粒，转染哺乳...
- 许丽艳郭张燕高书颖杨章民谢剑君李恩民
- 文献传递
- 哺乳动物细胞CDK3系列表达载体的构建与表达被引量：1
- 2010年
- 目的:构建一系列细胞周期蛋白依赖激酶3(CDK3)在哺乳动物细胞的表达载体,并在真核细胞NIH3T3中进行初步表达。方法:从食管癌细胞中提取总RNA,RT-PCR扩增CDK3编码区,然后将PCR产物克隆到T载体;扩增后的CDK3片段分别亚克隆入pcDNA3-4、pNTAP和pEGFP等4种哺乳动物表达载体;将获得的表达载体转染小鼠成纤维细胞NIH3T3,并用蛋白免疫印迹法进行初步的CDK3表达分析。结果:PCR扩增获得约900 bp目的片段,经T载体克隆和DNA序列分析显示重组片段是人CDK3基因序列,全长915 bp;CDK3目的片段分别亚克隆入pcDNA3-4、pNTAP和pEGFP载体,获得相应表达载体;运用构建的表达载体,可以在真核细胞中表达出CDK3蛋白。结论:成功构建了CDK3系列哺乳动物细胞表达载体,并在NIH3T3中得到表达。
- 吴健谊蒋太峰许丽艳李恩民谢剑君
- 关键词：基因克隆真核表达载体
- 高转移潜力食管癌细胞株的建立及其生物学特征被引量：2
- 2007年
- 目的建立具有高转移潜力食管癌细胞株并研究其生物学特征。方法将食管癌细胞系EC109细胞悬液异位移植到SCID小鼠胃壁,约3个月后或动物濒临死亡时处死,行病理学解剖,将肉眼可见的纵隔淋巴结转移瘤块接种于SCID鼠皮下扩增,然后取小鼠皮下瘤组织块进行细胞培养,得到性状稳定的细胞株NMC109后,用MTT法分析细胞生长曲线,Western bloting法检测与细胞分裂增殖能力密切相关的TopoIIα表达,酶谱法检测MMP-2和MMP-9的活性,划痕实验和Transwell体外移动实验检测细胞的移动能力。结果与母本细胞EC109相比,所获得的细胞株NMC109其增殖能力和TopoIIα表达明显增强,MMP-9的活性明显升高,移动能力明显增强。结论获得了具有高转移潜力的食管癌细胞株。
- 谢仰民周飞谢剑君蔡唯佳许丽艳李恩民
- 关键词：食管癌肿瘤侵袭肿瘤转移细胞株
- 食管癌细胞中fascin基因启动子区的克隆与初步鉴定被引量：2
- 2007年
- 目的:对食管癌细胞中fascin基因启动子区进行克隆鉴定.方法:应用PCR技术从食管癌细胞系EC109中扩增出fascin基因5′侧翼区5段不同长度的片段,并将其克隆至萤火虫荧光素酶报告基因表达载体pGL3-Basic(pGLB)中,然后将这些质粒与对照质粒pGLB、内参照质粒pRL-TK共转染EC109细胞,48h后用双荧光素酶检测系统分析这些重组子报告基因转染细胞的相对荧光强度,并结合生物信息学分析,以判断fascin基因启动子区所在位置.结果:用DNA重组技术成功构建了5个系列缺失重组荧光素酶报告基因表达载体.相对荧光素酶活性检测表明,与对照组相比,上述一系列重组质粒转染细胞均显示出较高的荧光素酶活性.生物信息学分析发现,在启动子区(-436^+1)有标志性调控元件TATA盒(-34^-29).结论:在食管癌细胞中fascin基因的启动子区可能位于转录起始位点上游约436bp的区段内.
- 杨章民郭张燕许丽艳高书颖谢剑君李恩民
- 关键词：食管肿瘤启动子荧光素酶类报告基因
- 血清DKK1在肿瘤临床应用的价值中被引量：4
- 2014年
- DKK1作为Wnt信号传导通路的拮抗剂,在肿瘤发生发展中发挥重要的作用。近年来的研究表明,DKK1作为一种分泌型糖蛋白,在多种肿瘤患者血清中呈高表达,可能在肿瘤中发挥重要的临床作用。本文就血清DKK1在肿瘤临床应用中的价值作一综述。
- 彭裕辉许镒洧谢剑君
- 关键词：肿瘤预后
- NGAL及其功能相关蛋白正反馈环促食管癌发生发展分子机制研究
- 李恩民许丽艳谢剑君方王楷杜则澎吴炳礼许镒洧彭裕辉谢仰民吴健
- 中国是世界上最主要的食管癌高发国，全世界每年40余万食管癌病例的一半，甚至有些年份一半以上发生在中国；广东潮汕地区是中国六大食管癌高发区之一，而且还是唯一的沿海食管癌高发区，地区疾病特色十分鲜明。因此，立足潮汕，研究解决...
- 关键词：
- 关键词：食管癌
- 哺乳动物细胞CDK2系列表达载体的构建与表达被引量：1
- 2011年
- 目的:构建一系列细胞周期蛋白依赖激酶2(cyclin-dependent kinase 2,CDK2)在哺乳动物细胞的表达载体,为研究CDK2的功能和修饰提供实验材料。方法:从食管癌细胞中提取总RNA,逆转录PCR扩增CDK2编码区,然后将PCR产物克隆到T载体;扩增后的CDK2片段分别亚克隆入pcDNA3、pcDNA4、pNTAP和pEGFP等4种哺乳动物表达载体;最后,将获得的表达载体PEGFP/CDK2转染小鼠成纤维细胞NIH3T3进行初步的CDK2表达分析。结果:RT-PCR扩增获得约900 bp的目的片段,经T载体克隆和DNA序列分析,显示重组片段是人CDK2基因序列;CDK2片段分别亚克隆入上述4种载体后获得相应表达载体;运用构建的PEGFP/CDK2表达载体,在NIH3T3细胞中表达出CDK2蛋白。结论:成功构建了CDK2的哺乳动物细胞系列表达载体,并在NIH3T3细胞中成功表达目的蛋白。
- 吴健谊蒋太峰谢剑君张锴杜则澎许丽艳
- 关键词：CDK2基因克隆真核表达载体
- 激活转录因子3的过表达对食管癌细胞生长的抑制作用被引量：1
- 2009年
- 背景与目的:激活转录因子3(activating transcription factor 3,ATF3)在食管癌中表达异常下调,但其功能仍不清楚。本研究拟探讨ATF3在食管癌细胞过表达对癌细胞生长及裸鼠成瘤的影响。材料与方法:利用分子克隆技术将ATF3基因完整编码区克隆至真核细胞表达载体pcDNA3中,获得重组表达质粒;将该表达质粒转染食管癌EC109细胞并用G418筛选稳定表达的细胞克隆;用Western blot检测ATF3的过表达效果;对ATF3过表达的细胞与相应对照细胞进行细胞克隆形成实验和裸鼠体内成瘤实验,以分析ATF3过表达对食管癌细胞生长的影响。结果:ATF3的过表达在体外可以降低食管癌细胞的克隆形成能力;在体内可以抑制食管癌细胞在雌鼠中的成瘤能力,但对雄鼠中的成瘤能力没有明显影响。结论:ATF3的过表达可以抑制食管癌细胞的生长,ATF3可能在食管癌的发生发展中发挥重要作用。
- 谢仰民谢剑君周飞侯健曹君君许丽艳李恩民
- 关键词：食管癌细胞生长
- NGAL蛋白诱导食管癌细胞发生自噬被引量：4
- 2009年
- 以往研究证明,中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白NGAL(neutrophil gelatinase-associated lipocalin)与食管癌密切相关,改变NGAL表达能够对癌细胞的形态结构产生明显影响,但确切的作用机制不明.在酵母细胞中表达NGAL蛋白,柱层析分离纯化.筛选NGALR(NGAL receptor)高表达与弱表达的人食管癌细胞系EC1.71和EC109作为实验细胞模型.5-FAM标记NGAL蛋白,加入到细胞培养上清中,对比研究NGAL蛋白入胞情况、细胞形态学改变、细胞自噬体产生、自噬相关基因表达、细胞内铁离子与铁蛋白水平以及相关细胞信号转导激酶的活性等.结果表明,NGAL蛋白可经由内吞途径进入食管癌细胞发挥作用,致使细胞发生典型的自噬性形态结构变化,自噬体大量产生,自噬相关基因的表达发生相应变化,ERK被激活,但细胞内的铁离子与铁蛋白未受明显影响.上述结果提示,诱导细胞发生自噬是外源性NGAL蛋白经由内吞途径进入食管癌细胞发挥作用的机制之一,与NGAL蛋白跨膜转铁未见直接关联,而ERK信号转导途径可能参与了这一过程.
- 张丕显方王楷许丽艳蒋纪恺沈忠英杜则澎陆晓峰周飞谢剑君吴炳礼崔有宏谢东李恩民
- 关键词：NGAL自噬细胞周期食管癌细胞
- 应用毕赤酵母系统表达人Fascin蛋白被引量：2
- 2008年
- 背景与目的:应用酵母表达系统表达人的重要肿瘤分子标志物fascin蛋白。材料与方法:利用分子克隆技术将fascin基因完整编码区克隆至毕赤酵母(Pichia pastoris)分泌表达载体pPIC9中,获得重组质粒pPIC9-fascin;以限制性内切酶MssⅠ进行线性化并转化毕赤酵母GS115菌株,用PCR方法筛选出阳性整合克隆;对阳性克隆进行0.5甲醇诱导表达重组蛋白,银染及Western blot检测培养上清中fascin重组蛋白的表达情况。结果:毕赤酵母能够分泌表达约69kD的fascin重组蛋白,表达量为40μg/L。结论:毕赤酵母可以分泌表达fascin蛋白,但由于分泌表达量较低,尚达不到工程化要求。
- 李德玲李恩民谢剑君吴炳礼张丕显许丽艳
- 关键词：FASCIN蛋白毕赤酵母分泌表达
