董阳超
- 作品数：8 被引量：4H指数：2
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- 宿主蛋白LSm1-7复合体在登革病毒RNA复制中的作用研究被引量：2
- 2013年
- 目的探讨LSm1-7复合体在登革病毒(DENV)RNA复制中的作用。方法 DENV感染HepG2细胞后,在不同时间点(2、24、36、48h)收集细胞和提取总mRNA,实时定量PCR(RT-qPCR)分析LSm1表达水平;将LSm1的siRNA和非特异对照siRNA两次转染HepG2细胞后感染DENV-2,24h后收集细胞,提取总mRNA,RT-qPCR分析LSm1表达水平与病毒RNA表达水平;利用LSm1抗体与dsRNA抗体对DENV感染细胞进行免疫荧光染色,激光共聚焦分析LSm1与dsRNA共定位情况。结果与2h比较,随着时间的推移,DENV-2 RNA和LSm1 RNA水平逐渐升高;与对照组siNC比较,siLSm1组LSm1 RNA水平明显降低,沉默效率达78.2%;与对照组siNC比较,siLSm1组DENV RNA含量降低35.6%;LSm1-7复合体在DENV感染HepG2细胞后募集到核周围,与DENV dsRNA共定位。结论 LSm1-7复合体可能作为DENV复制复合物的组成部分,正调控DENV RNA的复制。
- 董阳超雷迎峰丁天兵时莹潘鹭翔王晓霞张泽信徐志凯
- 关键词：登革病毒宿主蛋白RNA复制
- 2型登革病毒非结构蛋白NS3的表达及其相互作用蛋白的纯化被引量：2
- 2015年
- 目的构建2型登革病毒(DENV2)非结构蛋白3(NS3)与亲和标签融合蛋白的表达质粒,串联亲和纯化(TAP)法获得与NS3相互作用的蛋白。方法根据DENV2基因序列,设计引物;以DENV2 c DNA为模板,PCR扩增出NS3基因,经酶切后克隆至含有串联亲和标签(FLAG-StrepⅡ)的哺乳真核表达载体p CI-SF,获得重组表达质粒p CI-NS3-SF;将上述重组质粒通过转染试剂LipofectamineTM2000瞬时转染进入HEK293T细胞,Western blot法验证NS3融合蛋白的表达;通过TAP法分离纯化与NS3相互作用的蛋白。结果成功构建了NS3融合蛋白表达载体,利用TAP系统分离得到与NS3蛋白相互作用的宿主蛋白。结论串联亲和纯化法可以有效的分离与DENV2 NS3相互作用的细胞蛋白。
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- 关键词：登革病毒NS3串联亲和纯化
- 宿主蛋白LSm1-7复合体在登革病毒RNA复制中作用的初步研究
- 目的：探讨LSm1-7复合体在登革病毒(DENV) RNA复制中的作用。方法：DENV感染HepG2细胞后，在不同时间点(2hr、24hr、36hr、48hr)收集细胞和提取总mRNA，实时定量PCR (RT-qPCR)...
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- 关键词：登革病毒核糖核酸基因复制宿主蛋白
- 文献传递
- 宿主蛋白LSm1-7复合体在登革病毒RNA复制中作用的初步研究
- 目的探讨LSm1-7复合体在登革病毒(DENV)RNA复制中的作用。方法 DENV感染HepG2细胞后,在不同时间点(2、24、36、48 h)收集细胞和提取总mRNA,实时定量PCR(RT-qPCR)分析LSm-1表达...
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- 关键词：登革病毒宿主蛋白
- Clusterin蛋白在大肠杆菌中的表达及其多抗制备
- 2013年
- 目的:在大肠杆菌中表达Clusterin蛋白,并制备其兔抗Clusterin蛋白的多克隆抗体。方法:从MCF-7细胞提取mRNA,逆转录为cDNA,以此为模板PCR扩增Clusterin编码基因;将Clusterin编码区cDNA插入的pRSET-A原核表达载体,构建pRSET-A-clusterin;将重组质粒转化BL21(DE3)感受态细菌,以IPTG诱导6×His-Clusterin融合蛋白的表达,经亲和纯化柱与凝胶柱进行层析纯化。经SDS-PAGE和Western-blot鉴定后,将纯化的融合蛋白与弗氏佐剂混合制备成油包水悬液,常规免疫新西兰大白兔制备多抗,Western-blot检测该抗体识别内源性clusterin的特异性。结果:成功构建了Clusterin蛋白的原核表达载体pRSETA-clusterin;经表达并纯化的Clusterin蛋白纯度达到98%以上,免疫新西兰大白兔后制备得到了特异性的抗Clusterin的多抗。结论:成功地表达并纯化了Clusterin蛋白,并制备了特异性抗Clusterin多抗。
- 潘鹭翔魏莉杨敬吕欣董阳超徐志凯雷迎峰
- 关键词：CLUSTERIN原核表达蛋白纯化多抗
- 宿主蛋白LSm1-7复合体在登革病毒RNA复制中作用的初步研究
- 目的:探讨LSm1-7复合体在登革病毒(DENV)RNA复制中的作用。【方法】DENV感染HepG2细胞后,在不同时间点(2hr、24hr、36hr、48hr)收集细胞和提取总mRNA,实时定量PCR(RT-qPCR)分...
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- 文献传递
- gas6基因修饰小鼠骨髓间充质干细胞的构建及鉴定
- 2016年
- 目的:制备携带生长停滞特异性基因6(gas6)的慢病毒,并构建和鉴定稳定表达生长停滞特异性蛋白6(GAS6)的小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)。方法:采用全骨髓贴壁法分离培养MSCs,用流式细胞术检测MSCs标志分子;根据Gen Bank中小鼠gas6基因序列设计并合成上下游引物,以MSCs提取的m RNA制备的c DNA为模板扩增gas6基因片段,克隆入慢病毒表达载体,获得Lenti-gas6-GFP-zeocin质粒并测序鉴定;采用三质粒包装系统(穿梭质粒p Lenti-gas6-GZ、包装质粒p SPAX2和p MD2.G)包装慢病毒,并验证其表达目的基因情况;将浓缩的慢病毒离心感染第4代MSCs,用吉欧霉素(zeocin)筛选培养后获得稳定表达GAS6的MSCs,采用流式细胞术检测其阳性率以及表面标志分子表达情况。结果:构建了携带gas6基因的慢病毒,建立了gas6基因修饰的MSCs。结论:慢病毒载体可介导gas6基因在小鼠MSCs中过表达,且不会干扰MSCs的生物特性,为进一步研究gas6基因修饰的MSCs的治疗作用奠定了实验基础。
- 边培育叶传涛韩佩君董阳超叶伟马宏炜陈何嵩张芳琳雷迎峰贾战生
- 关键词：慢病毒载体骨髓间充质干细胞
- LSm1-7复合体在病毒复制中作用的研究进展被引量：1
- 2013年
- LSm蛋白家族属于一类RNA结合蛋白,广泛存在于真核细胞生物、细菌、古菌和植物中。LSm是Sm样蛋白的缩写。1966年Sm抗原首先在系统性红斑狼疮患者中被发现,并因患者StephanieSmith而得名[1]。随后Sm蛋白复合体被发现,由SmB′/B（B和B′是异构体）、SmD1、SmD2、SmD3、SmE、SmF、SmG 7个蛋白组成,与4个snRNAs（U1、U2、U4和U5）结合形成snRNPs。
- 董阳超雷迎峰徐志凯
- 关键词：病毒复制RNA结合蛋白
