范志宇
- 作品数：169 被引量：242H指数：10
- 供职机构：江苏省农业科学院更多>>
- 发文基金：国家现代农业产业技术体系建设项目江苏省农业科技自主创新基金公益性行业(农业)科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学经济管理更多>>
- 家兔γ干扰素基因的原核表达及其表达产物的单克隆抗体的制备
- 2014年
- 将PCR扩增的家兔γ干扰素基因克隆至pET-28a(+)原核表达载体上,构建重组载体pET-28a(+)-IFN-γ。重组载体转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导、HisTrap亲和柱纯化,获得IFN-γ重组蛋白。以IFN-γ重组蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤细胞技术获得4株抗IFN-γ单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别被命名为3H8、4G4、4F10、6C12,它们的亚型分别为IgG1、κ链,IgG2b、κ链,IgG1、κ链,IgG1、κ链。分别制备单克隆抗体腹水,结果,4株单克隆抗体腹水的间接ELISA效价在10-4~10-5之间。本试验通过制备抗家兔IFN-γ单克隆抗体,为研究和检测IFN-γ提供了一种重要的工具。
- 彭伟宋艳华胡波范志宇魏后军王芳王芳
- 关键词：家兔Γ干扰素原核表达单克隆抗体
- 兔出血症病毒衣壳蛋白N端携带双串联卵清蛋白T细胞表位嵌合体的表达及鉴定
- 在兔出血症病毒主要结构蛋白VP60的N端插入双串联OVA CD8+T细胞表位(ovalbumin,卵清蛋白第257-264位氨基酸),研究外源片段对VP60蛋白表达及病毒样颗粒(VLPs)装配的影响,分析VP60作为载体...
- 张燕胡波宋艳华范志宇魏后军姜平王芳
- 关键词：兔出血症病毒嵌合体疫苗研制
- 文献传递
- 应用噬菌体展示技术筛选兔出血症病毒抗原模拟表位被引量：8
- 2012年
- 以抗兔出血症病毒(RHDV)的单克隆抗体A3c作为靶物质,应用噬菌体展示技术筛选RHDV抗原表位。将纯化的单抗A3c包被固相载体,经3轮亲和筛选后,挑取25株噬菌体单克隆并扩增,用ELISA测定后,提取阳性克隆单链DNA并测序,用阳性噬菌体克隆免疫小鼠制备高免血清,检测筛选抗原表位的免疫原性。结果表明:3轮亲和筛选后,特异性噬菌体克隆得到了有效富集,25株噬菌体单克隆中有19株为阳性克隆;测序结果表明,获得了与抗原高度同源的序列GTDDMDPGTTAA,即抗原的模拟表位,其中,氨基酸基序DXXDP为表位中的核心氨基酸;制备的小鼠高免血清与抗原具有较好的反应性,阳性噬菌体克隆与兔RHDV高免血清也具有较好的反应性。因此,该表位具有良好的免疫原性和反应原性。该研究为RHDV抗原表位的研究和新型疫苗的探索积累了资料。
- 杨廷亚王芳姜平胡波范志宇魏后军薛家宾
- 关键词：兔出血症病毒单克隆抗体噬菌体展示技术模拟表位
- 兔支气管败血波氏杆菌不同感染途径研究被引量：1
- 2008年
- 用兔支气管败血波氏杆菌分离株BJL0504菌株(I相菌)经滴鼻、肺内、气管、静脉、皮下对30～40日龄兔攻毒,并进行临床观察和微生物学检查,比较不同攻毒方法的优势。结果显示,经静脉注射的家兔发病率和死亡率高,症状较典型;经肺内注射也可以引起部分发病和死亡;滴鼻和气管注射感染均可以复制到典型的临床症状,但是解剖病变都不明显。由此可见,支气管败血波氏杆菌经静脉攻毒可以较好的复制病例,这对支气管败血波氏杆菌的致病机理的研究、疫苗的研制和评价提供了理论基础。
- 范志宇恽时锋王芳王欣胡波张则斌徐为中奚力中
- 关键词：支气管败血波氏杆菌
- 双位点嵌合巴氏杆菌PlpE抗原表位的兔出血症病毒VP60重组抗原及其制备和应用
- 本发明属生物医学技术领域，提供了一种双位点嵌合了巴氏杆菌PlpE抗原表位的兔出血症病毒VP60重组抗原，所述重组抗原通过在分析巴氏杆菌保护性抗原PlpE表位组成的基础上，将PlpE表位集中分布的一段区域（长度合计70个氨...
- 朱伟峰王芳范志宇胡波魏后军
- 文献传递
- 家兔支气管败血波氏杆菌重组百日咳杆菌粘附素(PRN)蛋白的原核表达及其间接ELISA方法的建立被引量：1
- 2012年
- 目的表达支气管败血波氏杆菌(Bordetella bronchiseptica,Bb)PRN蛋白,并以此建立检测Bb抗体的间接ELISA方法。方法参照GenBank公布的猪源支气管败血波氏杆菌prn基因序列(AY376325)设计了一对特异性引物,PCR扩增出相应的核苷酸片段。将PCR扩增产物连接至原核表达载体pGEX-4T-1中,以E.coli BL21(DE3)为表达菌株进行诱导表达,以纯化重组蛋白PRN作为诊断抗原,通过探索最佳抗原包被量和抗体血清稀释倍数等,建立检测支气管败血波氏杆菌抗体的间接ELISA方法。结果成功克隆了prn全基因序列,并在E.coliBL21(DE3)中获得高效表达,经SDS-PAGE、Western blot分析显示重组蛋白PRN具有良好的抗原性。应用重组蛋白PRN为抗原建立了检测Bb血清抗体的间接ELISA诊断方法。试验确定重组蛋白PRN抗原的包被浓度为500ng/mL,最适血清稀释度为1∶40。结论建立的ELISA检测方法,不仅为Bb抗体检测提供了实用的血清学检测手段,也为进一步开发Bb检测试剂盒奠定了基础。
- 胡佳佳恽时锋王芳范志宇胡波
- 关键词：支气管败血波氏杆菌原核表达间接ELISA
- 新西兰兔RBM4基因的克隆、序列分析及组织表达
- 2021年
- 为分析RBM4基因在新西兰兔不同组织的表达差异情况,本研究根据GenBank中公布的穴兔RBM4基因序列设计了特异性引物,从兔肾脏中扩增出RBM4基因并进行了生物信息学分析,同时采用实时荧光定量PCR技术研究了RBM4基因在新西兰兔各组织中的表达差异。结果表明,扩增出的新西兰兔RBM4基因长度为1080 bp,编码359个氨基酸。序列比对结果显示,新西兰兔与穴兔、牛、鼠、人、鲑鱼等动物RBM4基因的核苷酸一致性为44.1%~99.8%。进化树分析结果表明,新西兰兔RBM4基因与其他哺乳动物RBM4基因亲缘关系较近。实时荧光定量PCR结果显示,RBM4基因在新西兰兔的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏和脑中均有表达,其中在肾脏中表达量最高,在脑中表达量最低。本研究成功克隆了新西兰兔RBM4基因,并研究了其mRNA在兔各组织中的表达情况,为研究兔RBM4基因的表达及其生物学功能奠定了基础。
- 魏后军胡波陈萌萌范志宇宋艳华仇汝龙朱伟峰王芳
- 关键词：克隆新西兰兔
- 一种2型兔出血症病毒灭活疫苗及其制备方法
- 本发明提供了一种2型兔出血症病毒灭活疫苗及其制备方法，属于疫苗制备技术领域，所述制备方法，包括以下步骤：1)将2型兔出血症病毒毒株SC2020接种易感家兔；2)采集接种后24～96h内死亡且具有典型组织病理变化的家兔的脏...
- 范志宇王芳胡波魏后军陈萌萌仇汝龙宋艳华朱伟峰薛家宾
- 文献传递
- 一种抗兔出血症病毒VP60蛋白的单克隆抗体及其识别的B细胞表位和应用
- 本发明提供一种抗兔出血症病毒VP60蛋白的单克隆抗体及其识别的B细胞表位和应用，涉及生物技术领域。分泌抗兔出血症病毒VP60蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞株5H3，保藏号为CCTCC？NO：C2015150。本发明所述单克...
- 宋艳华王芳范志宇胡波魏后军刘星仇汝龙薛家宾
- 新西兰白兔支气管败血波氏杆菌的分离与鉴定
- 了解支气管败血波氏杆菌在实验兔群中的感染情况,并对该菌的生物学特性进行研究。方法从江苏南京地区四家实验兔场采集有鼻炎症状的患兔鼻腔分泌物63份进行细菌的分离鉴定,并对分离菌对小鼠的毒性,对断奶幼兔的致病性,对抗生素敏感性...
- 范志宇恽时锋薛家宾徐为中王芳
- 关键词：新西兰白兔支气管败血波氏杆菌抗生素敏感性
- 文献传递
