王逸青
- 作品数：12 被引量：54H指数：3
- 供职机构：复旦大学附属中山医院消化科更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金美国中华医学基金会项目国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 反义金属蛋白酶抑制因子-1对肝星形细胞的影响被引量：2
- 2004年
- 目的 探讨体外构建的反义金属蛋白酶组织抑制因子 (TIMP 1)表达质粒在大鼠肝星形细胞 (HSC)中的表达情况及对HSC活化后Ⅰ、Ⅲ型胶原量的影响。方法 双酶灌注和梯度离心法分离正常大鼠HSC ,培养 7～ 10d后活化为肌成纤维样母细胞表型。应用巢式RT PCR和基因重组技术构建能在真核细胞中表达的反义TIMP 1质粒并测序鉴定。应用脂质体介导重组质粒和 pcDNA3空质粒转染HSC ,经含 40 0 μg/mlG418的DMEM培养液筛选 3～ 4周 ,另设立空白对照组。Northernblot和Westernblot检测筛选后的HSC中TIMP 1表达情况 ;用FITC标记的Ⅰ型胶原为底物测定培养上清液内间质胶原酶活性 ;应用Westernblot方法对HSC中Ⅰ、Ⅲ型胶原进行半定量分析。结果 外源重组质粒能较大程度地抑制活化HSC中TIMP 1的表达 ,而pcDNA3空质粒和空白对照组则无类似结果。TIMP 1/GAPDH比值分别为 0 .67,2 .41和 2 .97(mRNA水平 ,P <0 .0 5)。TIMP 1/ β actin比值分别为0 .3 1,0 .98和 1.3 2 (蛋白质水平 ,P <0 .0 5)。外源重组质粒转染显著提高了间质胶原酶活性 ,酶活性分别为 0 .3 0 49,0 .14 11和 0 .1196(P <0 .0 5)。HSC中Ⅰ、Ⅲ型胶原量明显减少。Ⅰ型胶原 / β actin比值分别为 0 .63 ,1.78和 1.92 (P <0 .0 5)。Ⅲ型胶原 / β
- 刘文滨王吉耀杨长青王逸青蒋炜贺伯明郭津生
- 关键词：肝星形细胞胶原梯度离心法基因重组技术细胞外基质
- 反义转化生长因子βⅠ型受体表达质粒对大鼠肝星状细胞功能的影响被引量：3
- 2004年
- 目的 观察反义转化生长因子 (TGF) βⅠ型受体 (TβRⅠ )表达质粒对大鼠肝星状细胞 (HSC)增殖及细胞外基质分泌的影响。方法 双酶灌注和梯度离心法分离大鼠HSC ,将构建的反义TβRⅠ真核细胞表达质粒与 pcDNA3空质粒经脂质体转染培养活化的HSC ,通过RT PCR、Western印迹检测外源导入质粒在HSC中的表达 ,采用MTT法、3 H TdR掺入法检测细胞增殖情况 ,ELISA法检测TGF β1含量变化 ,并应用Western印迹检测HSC中Ⅰ、Ⅲ型胶原表达。结果 反义TβRⅠ真核细胞表达质粒可抑制活化HSC中TβRⅠmRNA及蛋白表达。与 pcDNA3转染组相比 ,反义TβRⅠ质粒表达可抑制HSC增殖 (P <0 .0 1) ,降低TGF β1含量 (P <0 .0 5 ) ,抑制Ⅰ、Ⅲ型胶原分泌 (P <0 .0 5 )。结论 重组反义TβRⅠ表达质粒可在HSC中获得较好表达 ,并可显著抑制HSC增殖及细胞外基质分泌。
- 蒋炜王吉耀杨长青刘文滨王逸青
- 关键词：HSC反义鼠肝肝星状细胞真核细胞表达质粒
- 转化生长因子β_1对肝星状细胞迁移及细胞内Rho三磷酸鸟苷酶表达的影响被引量：11
- 2006年
- 目的观察转化生长因子(TGF)β_1刺激后肝星状细胞迁移和细胞骨架的变化,并观察TGFβ_1刺激对肝星状细胞内Rho三磷酸鸟苷(GTP)酶表达的影响。方法分离原代大鼠肝星状细胞,用Transwell Chamber观察不同浓度TGFβ_1直接及趋化刺激后细胞迁移改变,FITC标记的鬼笔环肽标记F-actin,共聚焦激光扫描显微镜观察细胞骨架的变化,GST pull-down分析检测不同浓度TGFβ_1刺激后活性RhoA、Racl及Cdc42的表达。结果FGFβ_1直接及趋化刺激后肝星状细胞迁移均比对照组增加,≥5 ng/ml浓度时增加明显(直接刺激后：130．90±7．64比102．93±1．01,趋化刺激后205．17±10．78比102．93±1．01,P＜0．05)；TGFβ_1刺激后细胞形态改变,刺激5 min后层状伪足出现,并随时间推移应力纤维逐渐增多；不同浓度TGFβ_1刺激后活性Cdc42、RhoA表达较对照组均增强,≥5 ng/ml浓度时表达明显增加(GTP-Cdc42：0．273±0．024比0．176±0．001,P＜0．05；GTP-RhoA：0．176±0．005比0．096±0．004,P＜0．05),而活性的Rac1表达无明显改变。结论TGFβ_1可导致肝星状细胞骨架改变,并可通过激活Cdc42、RhoA GTP酶信号途径,增加细胞迁移。
- 李蕾蒋炜王吉耀杨长青王逸青
- 关键词：转化生长因子Β1肝星状细胞细胞骨架
- 实验性肝纤维化的反义基因治疗研究
- 王吉耀蒋炜刘文滨杨长青王逸青贺伯明
- 该课题应用重组DNA技术构建反义TIMP-1真核细胞表达质粒，并将其转移至纤维化大鼠肝内和体外培养的大鼠肝脏星形细胞中，结果显示构建的反义TIMP-1表达质粒可在肝星形细胞中及肝纤维化大鼠体内确切表达，导致肝星形细胞培养...
- 关键词：
- 关键词：肝纤维化反义基因治疗
- 幽门螺旋杆菌与胃十二指肠疾病-临床与基础研究
- 王吉耀陈世耀刘天舒高虹王剑朱畴文王逸青沈锡中董玲方国汀
- 该课题在国内研究Hp与消化性疾病过程中，设计一些水平较高的前瞻性随机对照研究。在国内首先评价了甲硝唑治疗Hp相关性慢性胃炎的临床疗效。在国内首次应用临床经济学原理和方法来评估和分析消化性溃疡的治疗效用，指导临床医师在临床...
- 关键词：
- 关键词：幽门螺旋杆菌胃炎胃癌
- 肝硬化腹水大鼠水通道蛋白的表达被引量：2
- 2004年
- 目的 :探讨肝硬化腹水大鼠模型中水通道蛋白的变化及其作用方法采用改良的CCl4肝硬化腹水大鼠模型 ,通过免疫组织化学及半定量RT -PCR ,检测肾脏 (皮质和髓质 )中水通道蛋白AQP1和AQP2的表达以及脏层腹膜中AQP1的表达 ,并与正常对照组大鼠相比较。结果 :(1)免疫组织化学显示 ,AQP1主要表达在肾脏近曲小管上皮细胞的刷状缘和髓襻降支细段上皮细胞的顶质膜 ,AQP2主要表达在肾脏的远曲小管与集合管 ,肝硬化腹水组与正常组比较 ,皮质、外髓及内髓的AQP1和AQP2的表达均显著增加 (P <0 .0 1)。在两组中 ,AQP1均仅表达在脏层腹膜中若干小血管壁中 ,两组之间无显著差异 (p >0 .0 5 )。 (2 )半定量RT -PCR显示 ,肝硬化腹水组与正常组相比 ,在肾皮质和髓质中 ,AQP1mRNA、AQP2mRNA表达升高 (P <0 .0 1)。AQP1mRNA在两组的脏层腹膜中的表达无显著差异 (p >0 .0 5 )。结论肝硬化伴腹水大鼠模型中肾脏AQP1及AQP2的表达升高 ,与肝硬化腹水情况下水的重吸收增加有关。
- 孙剑勇王吉耀白春学贺伯明王逸青
- 关键词：AQP肝硬化腹水肾脏腹膜水通道蛋白
- 幽门螺旋杆菌感染与胃十二指肠疾病的临床流行病学研究
- 王吉耀陈世耀刘天舒高虹王剑朱畴文王逸青沈锡中董玲方国汀
- 该课题在国内研究Hp与消化性疾病过程中，设计一些水平较高的前瞻性随机对照研究。在国内首先评价了甲硝唑治疗Hp相关性慢性胃炎的临床疗效。在国内首次应用临床经济学原理和方法来评估和分析消化性溃疡的治疗效用，指导临床医师在临床...
- 关键词：
- 关键词：幽门螺旋杆菌胃炎胃癌
- 反义转化生长因子βⅡ型受体表达质粒对实验性肝纤维化的影响被引量：14
- 2004年
- 目的 观察反义转化生长因子βⅡ型受作(TGF βRⅡ)表达质粒对实验性肝纤维化的影响。方法 运用重组DNA技术中构建反义TGF βRⅡ真核细胞表达质粒,采用猪血清腹腔注射制备免疫性大鼠肝纤维化模型,实验动物分为肝纤维化模型组、反义TGF βRⅡ治疗组、pCDNA3对照组及正常对照组。反义TGF βRⅡ质粒和pCDNA3空质粒与糖化多聚赖氨酸偶联后经尾静脉分别导入大鼠体内,通过northern blot、RT-PCR、Western blot检测外源导入质粒在肝组织中的表达,检测血清转化生长因子β1(TGFβ1)、肝组织羟脯氨酸测定,Ⅰ、Ⅲ型胶原免疫组织化学与Van Gieson染色观察反义TGF βRⅡ质粒对大鼠肝纤维化的影响。 结果 反义TGF βRⅡ表达质粒可在肝组织中获得确切表达,其表达可使反义治疗组血清TGF β1含量下降,反义TGF βRⅡ治疗组为(23.16 ± 3.13)ng/ml,模型组为(32.96±3.79)ng/ml,F=36.73,P<0.01。肝组织羟脯氦酸含量下降,治疗组为(0.17±0.01)mg/g,模型组为(0.30±0.03)mg/g,F=15.48,P<0.01。减少了肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原的沉积,治疗组Ⅰ型胶原为650.26±51.51,Ⅲ型胶原为661.5 8±55.28,模型组Ⅰ型胶原为1209.44±16.60,Ⅲ型胶原为1175.14±121.44,F值分圳为69.87、70.46,P<0.01。并促进反义治疗组肝脏病理形态一定程度的改善。
- 蒋炜王吉耀杨长青刘文滨王逸青贺伯明
- 关键词：质粒肝纤维化
- 反义金属蛋白酶组织抑制因子-1表达质粒对实验性肝纤维化的影响
- 2003年
- 目的 观察反义金属蛋白酶组织抑制因子 1(TIMP 1)表达质粒对实验性肝纤维化的影响。方法 运用重组DNA技术构建反义TIMP 1真核细胞表达质粒 ,经与糖化多聚赖氨酸偶联后 ,尾静脉注射将其导入猪血清诱导的免疫性大鼠肝纤维化模型体内 ;通过Northern印迹法、RT PCR、Western印迹法检测外源导入基因的表达 ,并通过肝组织间质胶原酶活性和羟脯氨酸测定 ,以及肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原免疫组织化学与VanGieson染色观察反义TIMP 1质粒对大鼠肝纤维化的影响。结果 外源导入基因可在肝组织中获得确切表达 ,其表达可增加间质胶原酶的活性 (P <0 .0 1) ,减少羟脯氨酸含量 (P <0 .0 1) ,促进Ⅰ、Ⅲ型胶原的降解 (P <0 .0 1) ,并促进肝脏病理形态一定程度的改善 (P <0 .0 1)。结论 反义TIMP 1表达质粒对肝纤维化有较好的改善作用。
- 蒋炜王吉耀杨长青王逸青贺伯明刘文滨
- 关键词：肝纤维化基因表达
- 大鼠间质胶原酶表达质粒对实验性肝纤维化影响的体内外研究
- 王吉耀杨长青郭津生刘建军贺伯明方国汀顾秀英王逸青
- 该课题运用分子生物学技术构建了可表达融合Flag domain标记多肽的大鼠间质胶原酶哺乳动物表达质粒，通过体内外研究发现，该质粒在体内外能合成有活性的间质原酶，重组的间质胶原酶在体内可促进纤维化肝脏中Ⅰ、Ⅱ原的降解，在...
- 关键词：
- 关键词：肝纤维化
