高新胜
- 作品数：3 被引量：8H指数：2
- 供职机构：北京大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 小鼠噬菌体抗体库的构建和N-肽结合单链抗体的筛选被引量：3
- 2000年
- 成功构建一库容量为 1.7× 10 8的小鼠噬菌体抗体库 ,并从中淘选出对N 肽有结合活性的单链抗体。首先从未免疫小鼠的脾脏中提取总RNA ,分离出mRNA ,经逆转录合成其总cDNA。随后通过PCR分别扩增出抗体重链和轻链可变区VH、VL 的基因片断 ,再经重组PCR将两片断由一编码 (Gly4 Ser) 3十五肽的接头连在一起 ,并克隆到噬菌质粒 pCANTAB 5E中 ,电击转化大肠杆菌TG1。经辅助噬菌体M 13KO7超感染回收全部重组噬菌体 ,此即噬菌体抗体库。N 肽是一种新发现的神经肽 ,其N端与阿片肽高度同源 ,可与阿片肽受体相互作用。对其研究可能有助于了解成瘾机制和有临床应用价值。将生物素化的N 肽与抗体库相互作用 ,用偶联有链霉亲和素的磁珠富集与N 肽结合的重组噬菌体 ,经四轮淘选 ,得到亲和力较高的单链抗体。
- 高新胜黄仪秀郭振泉朱圣庚陈玉珍
- 关键词：噬菌体展示技术抗体库神经肽小鼠
- 从噬菌体抗体库中淘选血纤维蛋白特异的单链抗体被引量：2
- 2000年
- 为构建小鼠噬菌体抗体库 ,以获得对人血纤维蛋白特异的抗体 ,由小鼠脾脏提取 m RNA,经反转录 PCR扩增出抗体重链、轻链可变区基因片段 ,将二者和一段编码十五肽 (Gly4 Ser) 3的 DNA接头借助重组 PCR组装成为单链抗体 (single- chain antibody,Sc Ab)基因 .将单链抗体基因插入噬菌体展示载体 p CANTAB- 5E,通过电击法转化大肠杆菌 TG1细胞 ,用辅助噬菌体 M1 3K0 7超感染 ,构建了库容量在 1 0 8以上的噬菌体单链抗体库 .利用亲和选择方法 (淘选 ) ,从噬菌体抗体库中选得血纤维蛋白特异的单链抗体 .模拟抗体成熟过程 ,用 DNA改组 (DNA shuffling)技术使抗体基因重新组合 ,构建新的改组抗体库 ,并从中选择到提高了亲和力的噬菌体单链抗体 .抗体基因在大肠杆菌中表达 ,表达蛋白经 Sephadex G- 75柱层析分离 ,得到初步纯化的单链抗体蛋白 .
- 孙雷高新胜黄仪秀朱圣庚
- 关键词：噬菌体抗体库天然抗体
- 蓖麻毒素与其单克隆抗体相互作用动力学研究被引量：3
- 1999年
- 表面等离子体激元共振(SPR)是一种可微量、实时、动态地监测生物分子相互作用的生物传感技术。蓖麻毒素为核糖体失活蛋白,具有很强的细胞毒性作用。通过SPR技术研究了两种抗蓖麻毒素的单克隆抗体C5、D12与蓖麻毒素相互作用的动力学,计算出两者的亲和常数分别为2.49×108mol-1·L和7.9×108mol-1·L,并对两种抗体的抗原表位进行了分析。
- 高新胜黄仪秀朱圣庚余兴龙王冬沈平
- 关键词：蓖麻毒素SPR单克隆抗体生物分子相互作用
