高振永 作品数:12 被引量:14 H指数:3 供职机构: 华南农业大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 广东省科技计划工业攻关项目 更多>> 相关领域: 农业科学 医药卫生 生物学 更多>>
一种利用多重PCR检测鸭粪中三种原虫的方法 本发明涉及PCR检测领域,具体涉及一种利用多重PCR检测鸭粪中三种原虫的方法,其中所述原虫为贝氏隐孢子虫、环孢子虫和菲莱氏温扬球虫。本发明检测方法是根据鸭环孢子虫ITS-1基因,菲莱氏温扬球虫18S rRNA基因和贝氏隐... 李国清 程家林 岳彩玲 高振永 刘霞 朱海波文献传递 中国猴源环孢子虫的发现及巢式PCR检测方法的建立 环孢子虫是一种重要的水源性寄生原虫,可以引起人和动物的严重腹泻。本论文对首次从广州猴粪中发现的疑似环孢子虫卵囊进行了形态学观察和分子鉴定,并建立了相应的巢式PCR检测方法。
采用饱和蔗糖漂浮法、改良抗酸染色法和孢子... 高振永关键词:分子鉴定 巢式PCR检测 猴源环孢子虫的分离与分子鉴定 被引量:3 2010年 采用饱和蔗糖漂浮法、改良抗酸染色法和孢子化试验首次从广东某猴场的猴粪中分离到疑似环孢子虫卵囊。为了对其进行分子鉴定,采用巢式PCR和普通PCR方法,针对环孢子虫属18SrDNA和ITS基因设计了3对引物,扩增其目的片段,并进行了序列分析。结果显示,卵囊大小为7.5~10μm,经改良抗酸染色的卵囊染色程度不一,孢子化卵囊内含2个孢子囊,每个孢子囊内含有2个子孢子。通过PCR扩增,获得的18SrDNA目的片段长712bp,测序结果表明该猴源环孢子虫18SrDNA基因与Cyclosporacolobi、狒狒环孢子虫、人环孢子虫的相似率较高,在进化树上位于同一分支。获得的ITS-1+片段长760bp,其中ITS-1序列高度特异,在GenBank中未见同源性序列。结果表明,从猴粪中分离的疑似环孢子虫卵囊应属于环孢子虫。 高振永 李国清 刘霞 岳彩玲 程家林 徐前明关键词:巢式PCR 菲莱氏温扬球虫18S rDNA基因的扩增与克隆分析 被引量:3 2010年 菲莱氏温扬球虫是鸭球虫病的重要病原之一,为了寻找种特异性的遗传标记,本研究采集广东省某鸭场的新鲜鸭粪,通过Sheather’s蔗糖漂浮法收集球虫卵囊,经形态学鉴定为菲莱氏温扬球虫;提取该球虫DNA样品,经过PCR扩增,首次获得了该虫的18S rDNA基因部分片段;对该基因进行了克隆和测序,比较了该虫株与其他原虫的亲缘关系。结果显示,对菲莱氏温扬球虫序列与艾美耳科其他球虫关系较近,系统进化树分析属于艾美耳科的另一分支。表明18S rDNA基因在鸭菲莱氏温扬球虫的分类鉴定上是一种有效的分子标记。 程家林 李国清 徐前明 岳彩玲 高振永 朱海波 刘霞关键词:形态学 RDNA PCR 犬源环孢子虫PCR检测方法的建立 被引量:1 2010年 为了建立犬源环孢子虫的PCR检测方法,根据该环孢子虫18SrDNA基因序列,设计1对特异性引物;通过阳性参照摸索出该检测方法的最佳反应条件,进行了特异性和敏感性试验;并对临床样品进行了检测。结果显示,该PCR检测方法能特异性地扩增出犬源环孢子虫18SrDNA中379bp的片段,与牛源环孢子虫、柔嫩艾美耳球虫、人隐孢子虫、蓝氏贾第虫、刚第弓形虫、毛首线虫、大片吸虫、犬弓首蛔虫等8种虫体基因组DNA无交叉反应;最低能检测到84fg的阳性参照DNA,检测的157份临床样品中8份为阳性,比传统镜检方法多出3份。结果表明,建立的PCR检测方法具有较高的特异性和敏感性,可用于犬环孢子虫的临床检测。 岳彩玲 李国清 程家林 高振永 刘霞 朱海波 张萍关键词:特异PCR 猴源环孢子虫巢式PCR检测方法的建立 被引量:3 2010年 环孢子虫是一类可引起人和动物腹泻的重要寄生性原虫。为建立猴源环孢子虫的巢式PCR检测方法,根据该环孢子虫18S rDNA基因序列,设计一对保守引物N18SA/N18SS和一对特异性引物CYJS/CYJA,通过阳性质粒摸索该检测方法的最佳反应条件,进行特异性和敏感性试验,并应用该方法对87份猴粪样本进行了临床检测。结果显示该巢式PCR能特异性地扩增出猴源环孢子虫目的片段,与微小隐孢子虫、阿米巴原虫等8种DNA无交叉反应,最低能检测0.2 fg的阳性质粒DNA,对临床样本的检出率比传统方法(饱和蔗糖漂浮法和改良抗酸染色法)提高2.3%~3.4%。可见,该巢式PCR方法具有较高的特异性和敏感性,对于环孢子虫病的诊断和分子流行病学调查具有重要的应用价值。 高振永 李国清 岳彩玲 程家林 朱海波 李结关键词:巢式PCR 犬源环孢子虫的ITS-1序列鉴定 被引量:1 2011年 目的对犬粪中新发现的环孢子虫进行分子鉴定。方法在GenBank中登录的环孢子虫18S和5.8S rDNA序列的保守区设计一对引物ITS-1+F/ITS-1+B,扩增犬源环孢子虫ITS-1+序列;将扩增产物纯化并连接到质粒载体pMD19-T,克隆转入感受态细胞JM109,挑选阳性克隆测序并进行相似性比较和种类鉴定。结果犬源环孢子虫ITS-1+序列长为547bp,包含58bp的18S rDNA序列,333bp的ITS-1序列和156bp的5.8S rDNA序列。其中的18S rDNA和5.8S rDNA与艾美耳科原虫的相似性最大;其中的ITS-1序列与人源环孢子虫、牛源环孢子虫、狒狒源环孢子虫均不相同。结论该犬源环孢子虫可能为环孢子虫属的一个新种。 岳彩玲 李国清 程家林 高振永 朱海波 李结关键词:PCR 分子鉴定 一种利用多重PCR检测鸭粪中三种原虫的方法 本发明涉及PCR检测领域,具体涉及一种利用多重PCR检测鸭粪中三种原虫的方法,其中所述原虫为贝氏隐孢子虫、环孢子虫和菲莱氏温扬球虫。本发明检测方法是根据鸭环孢子虫ITS-1基因,菲莱氏温扬球虫18S rRNA基因和贝氏隐... 李国清 程家林 岳彩玲 高振永 刘霞 朱海波鸭粪中环孢子虫18S rDNA部分基因和ITS-1基因的克隆与分析 被引量:2 2010年 应用PCR技术对在鸭粪中发现的疑似环孢子虫的18 S rDNA部分基因和ITS-1+基因进行了扩增,将扩增出的片段纯化后连接至pMD-18T载体上,选取阳性克隆进行序列测定,并利用NCBI在线BLAST程序和MEGA 4软件对测序结果进行了同源性比较和系统发育树构建。结果显示,测得的18 SrDNA序列与环孢子虫的相似性最高(98%),且在系统树中位于同一分支上;测得的ITS-1序列高度特异,在GenBank中未发现同源性序列,可以确定其为环孢子虫的一个新种,暂命名为鸭源环孢子虫。 程家林 李国清 岳彩铃 徐前明 高振永 刘霞关键词:形态学 RDNA 犬源环孢子虫的形态学与分子鉴定 被引量:4 2010年 目的对犬粪中的疑似环孢子虫卵囊进行形态学和分子鉴定。方法对首次在犬粪中发现的疑似环孢子虫卵囊的形状、大小、抗酸染色、孢子化和自发荧光等形态特征进行了观察。根据GenBank已发表的环孢子虫序列设计并合成3条引物,对犬源环孢子虫18S rDNA部分序列进行巢氏PCR扩增,将扩增产物纯化并克隆至载体pMD19-T,挑选阳性克隆测序并进行同源性及系统进化分析。结果该疑似环孢子虫卵囊与人的环孢子虫卵囊形态特征相似,扩增的18S rDNA片段大小为715bp,与预期目的片段一致。序列同源性和系统发育分析显示该犬源环孢子虫与环孢子虫间的相似性最高,系统进化树中处于同一分支。结论首次从犬粪中发现的疑似环孢子虫卵囊可以确定为环孢子虫。 岳彩玲 李国清 颜超 程家林 高振永 刘霞关键词:RDNA