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原核生物硒蛋白的生物合成被引量：1: 2013年; 硒是包括哺乳动物在内许多生物的必需微量元素,与人类健康密切相关。硒分布的不平衡导致所在地食物中硒含量差异较大,且高硒地区的人易发生硒中毒,而低硒地区的人易硒缺乏。胞内硒酸盐经还原及硒磷酸合成酶的活化,在硒代半胱氨酸合酶(SelA)催化下利用Ser-tRNAUGAsec合成硒代半胱氨酸(selenocysteine,Sec),Sec经tRNAUGAsec特异性的类EF-TU延伸因子SelB整合入蛋白质形成硒蛋白。文中主要概述了原核生物硒酸盐的还原代谢和硒代半胱氨酸的插入机制,并提出了利用硒蛋白的合成机制作为检测硒酸盐含量的思路。; 沈林星邱洋松孙婧邬丹妮孙爱张冰倩马建辉孙梅好; 关键词：硒硒蛋白硒代半胱氨酸

基于硒蛋白生物合成机制的硒生物检测器: 2013年; 硒是许多生物的必需微量元素,与人类健康关系密切。硒在自然界中分布的不平衡导致不同地区的硒含量差异较大,易引起硒缺乏或者中毒。原核生物的硒代半胱氨酸(Selenocysteine,Sec)及硒蛋白的生物合成途径已较为清楚,此为构建硒酸盐生物检测器,进而补充目前常用硒含量测定方法提供了可能。该研究利用原核载体构建硒代半胱氨酸插入所需茎环结构(Selenocysteine insertion se-quence,SECIS)及其突变载体,通过氨苄青霉素筛选获得高效、高准确率的SECIS,并以此构建GFP超表达载体pSEGFP。通过pSEGFP和pSelABC共转化大肠杆菌BL21(DE3),并进行IPTG诱导表达,测定分析发现胞质蛋白的荧光强度与培养基硒酸盐浓度在一定范围内具有较好的线性关系。此结果表明,试验已初步构建了大肠杆菌硒生物检测器,为利用此方法进一步分析测定环境及生物样品中的硒含量奠定了基础。; 邱洋松孙婧孙爱邬丹妮张冰倩马建辉徐丽珊孙梅好; 关键词：硒蛋白硒代半胱氨酸茎环结构

大肠杆菌Ⅱ型丙酮酸激酶的纯化分析及其作为偶联酶的应用被引量：4: 2013年; 目的:分析大肠杆菌Ⅱ型丙酮酸激酶(pyruvate kinase Ⅱ,PKⅡ)的酶学特性及其作为偶联酶的可行性。方法:PCR法从大肠杆菌基因组克隆pkⅡ,构建入原核表达载体pSKB4,经IPTG诱导表达、纯化获得PKⅡ。利用乳酸脱氢酶偶联法分析其催化ADP、GDP、UDP、CDP磷酸化的能力以及不同pH、温度对其活性的影响,并利用PKⅡ作为偶联酶对球形红细菌硫酸盐活化复合体(sulfate activating complex,SAC)及其突变体进行了活性分析。结果:原核表达、纯化、分析大肠杆菌PKⅡ,发现其对ADP、GDP、UDP的催化效率与兔肌肉PK类似,且由大到小分别为:A>G>C>U;而对CDP的催化效率为兔肌肉PK的6倍。PKⅡ的最适pH为7.0,在20～50℃范围内活性稳定,且18个月的-80℃低温及24 hr的室温存放基本不影响其活性。PKII的高催化效率以及稳定性表明其可作为偶联酶进行NDP的测定。利用PKⅡ作为偶联酶对球形红细菌SAC及其突变体的活性测定表明S410和K409参与了5'-腺苷磷酰硫酸的磷酸化。; 李鸿艳周思甜马建辉王艳兴孙梅好; 关键词：丙酮酸激酶大肠杆菌球形红细菌

一种有效硒生物检测用细胞株GpSEGFP4及其构建方法: 本发明涉及有效硒生物检测用细胞株GpSEGFP4的构建方法，方法为一、pSECIS1载体的构建，1.1）pK6XhoI载体构建，1.2）pK6XhoI-CAT载体构...; 孙梅好徐丽珊马建辉邱洋松孙婧孙爱邬丹妮张冰倩; 文献传递

3’,5’-二磷酸腺苷酸特异性3’-核苷酸酶及其构建方法和应用: 本发明涉及一种特异性3’-核苷酸酶。3’，5’-二磷酸腺苷酸特异性3’-核苷酸酶，其为以下（a）或（b）的蛋白质：（a）由SEQID：NO.5所示的氨基酸序列组成的蛋白质；（b）在（a）的氨基酸序列经过取代、缺失或添加一...; 孙梅好杨洋李珍珍马建辉; 文献传递

5'-腺苷磷酰硫酸激酶及R68K突变体磷酸化5'-腺苷一磷酸的初步研究: 硫作为生命活动的必需元素,主要以-2和+6价发挥生物学功能.硫酸盐的活化是胞内同化代谢的关键反应之一,包括ATP硫酸化酶(ATP sulfurylase,ATPS)催化合成腺苷-5'-磷酰硫酸(adenosine...; 杨洋黄园波马建辉孙梅好; 关键词：蛋白质工程

一种以3’-核苷酸酶为标签的重组蛋白表达纯化系统及方法和应用: 本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种以3’-核苷酸酶为标签的重组蛋白表达纯化系统及方法和应用。一种以3’-核苷酸酶为标签的重组蛋白表达纯化系统，其特征在于该系统包括：1）3’-核苷酸酶核苷酸序列和蛋白超表达载体；2）加...; 孙梅好杨依林杨洋王艳兴李鸿艳马建辉; 文献传递

球形红细菌耐硒胁迫的机理初探: <正>球形红细菌,一种在自然界中广泛分布的紫色非硫光合细菌,具有较强耐受硒酸盐胁迫的能力.硒的细胞毒害作用主要是通过以硫的类似物进入细胞代谢,从而影响细胞的生长发育,而代谢过程中产生的过氧化物同样可引起毒害作用.最近的研...; 孙梅好王艳兴马建辉

3’,5’-二磷酸腺苷酸特异性3’-核苷酸酶及其构建方法和应用: 本发明涉及一种特异性3’-核苷酸酶。3’，5’-二磷酸腺苷酸特异性3’-核苷酸酶，其为以下（a）或（b）的蛋白质：（a）由SEQ ID：NO.5所示的氨基酸序列组成的蛋白质；（b）在（a）的氨基酸序列经过取代、缺失或添加...; 孙梅好杨洋李珍珍马建辉; 文献传递

一种以3’-核苷酸酶为标签的重组蛋白表达纯化系统及方法和应用: 本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种以3’-核苷酸酶为标签的重组蛋白表达纯化系统及方法和应用。一种以3’-核苷酸酶为标签的重组蛋白表达纯化系统，其特征在于该系统包括：1）3’-核苷酸酶核苷酸序列和蛋白超表达载体；2）加...; 孙梅好杨依林杨洋王艳兴李鸿艳马建辉; 文献传递

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马建辉