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大肠杆菌Ⅱ型丙酮酸激酶的纯化分析及其作为偶联酶的应用被引量：4: 2013年; 目的:分析大肠杆菌Ⅱ型丙酮酸激酶(pyruvate kinase Ⅱ,PKⅡ)的酶学特性及其作为偶联酶的可行性。方法:PCR法从大肠杆菌基因组克隆pkⅡ,构建入原核表达载体pSKB4,经IPTG诱导表达、纯化获得PKⅡ。利用乳酸脱氢酶偶联法分析其催化ADP、GDP、UDP、CDP磷酸化的能力以及不同pH、温度对其活性的影响,并利用PKⅡ作为偶联酶对球形红细菌硫酸盐活化复合体(sulfate activating complex,SAC)及其突变体进行了活性分析。结果:原核表达、纯化、分析大肠杆菌PKⅡ,发现其对ADP、GDP、UDP的催化效率与兔肌肉PK类似,且由大到小分别为:A>G>C>U;而对CDP的催化效率为兔肌肉PK的6倍。PKⅡ的最适pH为7.0,在20～50℃范围内活性稳定,且18个月的-80℃低温及24 hr的室温存放基本不影响其活性。PKII的高催化效率以及稳定性表明其可作为偶联酶进行NDP的测定。利用PKⅡ作为偶联酶对球形红细菌SAC及其突变体的活性测定表明S410和K409参与了5'-腺苷磷酰硫酸的磷酸化。; 李鸿艳周思甜马建辉王艳兴孙梅好; 关键词：丙酮酸激酶大肠杆菌球形红细菌

嗜热放线菌SAC的酶学分析及球形红细菌SAC的寡聚化分析: 硫作为生命活动的必需元素之一参与很多的细胞代谢过程。含硫化合物在维持细胞的氧化还原坏境、调控基因表达、缓解重金属的毒害和防御病虫害等方面具有重要的作用。土壤中，硫主要以硫酸盐和亚硫酸盐的形式存在。细胞吸收硫后经胞内ATP...; 李鸿艳; 关键词：嗜热放线菌; 文献传递

一种以3’-核苷酸酶为标签的重组蛋白表达纯化系统及方法和应用: 本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种以3’-核苷酸酶为标签的重组蛋白表达纯化系统及方法和应用。一种以3’-核苷酸酶为标签的重组蛋白表达纯化系统，其特征在于该系统包括：1）3’-核苷酸酶核苷酸序列和蛋白超表达载体；2）加...; 孙梅好杨依林杨洋王艳兴李鸿艳马建辉; 文献传递

一种以3’-核苷酸酶为标签的重组蛋白表达纯化系统及方法和应用: 本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种以3’-核苷酸酶为标签的重组蛋白表达纯化系统及方法和应用。一种以3’-核苷酸酶为标签的重组蛋白表达纯化系统，其特征在于该系统包括：1）3’-核苷酸酶核苷酸序列和蛋白超表达载体；2）加...; 孙梅好杨依林杨洋王艳兴李鸿艳马建辉; 文献传递

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李鸿艳