陈请国
- 作品数：31 被引量：82H指数：5
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖北省自然科学基金美国国立卫生研究院基金更多>>
- 相关领域：医药卫生机械工程更多>>
- 质膜钙ATP酶异构体1～3在新生大鼠耳蜗基底膜的表达
- 2016年
- 目的通过Western blot方法检测质膜钙ATP酶异构体1～3（plasma membrane Ca2＋-ATPase isoforms 1～3,PMCA1～3）在新生大鼠耳蜗基底膜（basilar membrane,BM）的表达,并检测PMCA2在单个新生大鼠耳蜗毛细胞纤毛的表达量。方法 1取出生后2天（P2）和8天（P8）健康SD大鼠各4只,断头后分离出BM,提取总蛋白,分别取20μg,通过Western blot法检测BM的PMCA1～3表达。2取P2和P8大鼠BM总蛋白3μg,通过Western blot方法检测BM的PMCA2的表达。3取4只P8大鼠,分离出BM,提取总蛋白,分别取5、10、20μg总蛋白并取100、400和800ng牛血清白蛋白（BSA）作为对照组,跑完电泳后将胶分为2部分,部分泳道用于SYPRO染胶,其余泳道用于Western blot检测PMCA2的表达。结果 1在20μg的P2和P8大鼠BM总蛋白中,PMCA1仅有微弱的表达（分别为0.126±0.024、0.131±0.012）,PMCA2表达水平较高（分别为4.16±0.528、4.25±0.319）,PMCA3几乎没有表达（均为0）,三者间差异有统计学意义（P〈0.05）。2在3μg的P2和P8大鼠BM总蛋白中,P8大鼠PMCA2的表达水平（4.571±0.336）高于P2大鼠（3.622±0.285）,差异有统计学意义（P〈0.05）。3PMCA2在单个P8大鼠BM的含量约为2.5ng。结论 PMCA1～3在新生大鼠耳蜗BM的表达水平不同,PMCA2表达量最大,这可能是由于耳蜗毛细胞对这几种PMCA亚型有不同的Ca2＋调节需求。
- 陈请国褚汉启周良强陈金刘云罗蜜陶雁玲
- 关键词：基底膜耳蜗
- 质膜钙ATP酶异构体1～4的剪接体在新生大鼠前庭器官的表达被引量：2
- 2016年
- 目的研究质膜钙ATP酶异构体(plasma membrane Ca^(2+)-ATPase isoforms,PMCAs)1~4(PMCA1~4)的A端和C端剪接变异体在新生大鼠前庭器官的表达。方法取出生2天的健康SD大鼠10只,断头后分离出前庭器官(椭圆囊斑和球囊斑),提取总RNA,通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法,检测PMCA1~4的A端和C端剪接变异体的表达。结果在新生大鼠的椭圆囊斑和球囊斑PMCA1~4表达的剪接体分别为PMCA1x/b,PMCA2w/(a、b),PMCA3z/(a、b、c)和PMCA4(x、z)/b。结论在新生大鼠前庭器官,PMCA1、PMCA2、PMCA3和PMCA4之间表达的A端和C端剪接变异体类型均不同,这可能是由于椭圆囊斑和球囊斑对这些PMCA亚型有着不同的Ca2+调节需求。
- 罗蜜褚汉启陶雁玲周良强陈金刘云潘春晨陈请国
- 关键词：剪接体
- 自制小鼠显微手术拉钩
- 2010年
- 目的 介绍一种显微手术用磁力底座拉钩及其在小鼠显微微创手术中的应用.方法 磁力底座拉钩由纽扣磁铁、螺栓、螺母及牙用不锈钢丝弯折而成的拉钩组成.螺栓倒扣在磁铁上组成简易的磁力底座 不锈钢丝拉钩经两个螺母夹持固定在磁力底座的螺栓上,组成简易的磁力底座拉钩 纽扣磁铁具有较强的磁性,可使磁力底座拉钩吸附在不锈钢手术平台上.利用该拉钩辅助小鼠听泡暴露手术,并与传统常规拉钩进行比较.结果 磁力底座拉钩可方便并有效牵引手术切口及肌肉等软组织,牵引方向、高度及强度均可调节,可获得良好的术窗暴露效果 与常规拉钩相比,可明显缩短手术切口,对肌肉及血管损伤少,减少意外出血机会.结论 磁力底座拉钩可方便有效地暴露小鼠听泡显微手术窗口,具有微创特点,可作为一种简单有效且易于推广的小鼠显微手术器械.
- 周良强褚汉启崔永华黄孝文黄红彦熊浩王燕陈请国张平
- 关键词：外科器械显微外科手术小鼠动物实验
- 卡那霉素联合呋塞米快速诱导小鼠耳蜗损伤被引量：12
- 2010年
- 目的探讨卡那霉素和呋塞米联合应用对小鼠耳蜗的毒性作用，建立一种可靠的小鼠感音神经性聋模型。方法选用3～4周龄的CBA／J小鼠为实验对象，按1g／kg的剂量皮下注射卡那霉素，30～45min后按0．4g／kg的剂量腹腔注射呋塞米。在注射前、注射后12h、24h、48h、7d、2周、4周及12周分别应用听性脑干反应（ABR）检测小鼠听觉功能的改变；应用异硫氰酸荧光素标记的鬼笔环肽及碘化丙啶染色、半薄切片甲苯胺蓝染色、脱氧核苷酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记技术、扫描电镜等观察小鼠毛细胞死亡的模式和程度；同时通过透射电镜观察记录耳蜗血管纹形态及厚度的变化。结果序贯应用卡那霉素及呋塞米后12h小鼠ABR阈值开始上升，随后的36h内持续进行性上升，继而稳定在90dB左右。应用激光共聚焦显微镜在药物注射后12h观察到耳蜗底回外毛细胞开始出现死亡，24h时底回外毛细胞基本全部消失，同时顶回外毛细胞开始出现死亡，至48h时整个耳蜗外毛细胞绝大部分死亡；而内毛细胞的损伤至给药后7d时才开始出现，随时间推移仍有部分内毛细胞完好无损。死亡的毛细胞均具有典型的凋亡细胞特征。扫描电镜观察发现在药物注射后受损毛细胞出现纤毛消失、表皮板塌陷，随后支持细胞增生并在该处形成瘢痕。血管纹表面边缘细胞在给药后出现部分胞体融合并且有坏死物自胞内排出，随后边缘细胞表面大部分微绒毛消失，胞体呈“石块”样改变。透射电镜结果显示血管纹厚度在给药后进行性下降，主要为边缘细胞萎缩造成。结论单次序贯应用卡那霉素及呋塞米能快速诱导小鼠耳蜗毛细胞大量死亡，适合应用于建立小鼠感音神经性聋模型。
- 熊浩褚汉启黄孝文崔永华周良强陈金李建玲王燕陈请国李志勇
- 关键词：卡那霉素呋塞米耳蜗小鼠
- L型钙离子通道蛋白α1D亚基与老年性耳聋关系的研究被引量：2
- 2014年
- 目的研究L型钙离子通道蛋白α1D亚基（Cav1．3）在老年性耳聋小鼠耳蜗组织中的表达和意义。方法应用听性脑干反应（ABR）分别检测4、14、24、48周龄的C57BL／6小鼠的听力，苏木素-伊红（HE）染色观察内耳形态的变化。免疫荧光方法观察Cav 1．3在内耳组织中的分布，同时采用反转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测其基因CACNA1D在内耳组织的mRNA表达。结果Cav 1．3主要分布在小鼠耳蜗内外毛细胞、螺旋神经节、螺旋韧带、血管纹、螺旋（板）缘细胞。与4周龄小鼠比较，[短声（27．08±9．19）dBSPL、4KHz（23．79±13．31）dBSPL、8KHz（18．83±12．18）dBSPL3，14、24、48周龄ABR反应阈值提高（F=95．86，P〈0．05）；48周龄小鼠ABR反应阈值[短声（87．81±8．36）dBSPL、4KHz（85．63±9．88）dBSPL、8KHz（79．50±9．83）dBSPL3，较4、14、24周龄大鼠均提高（F=115．97，P％0．01）。随着鼠龄的增长，内耳毛细胞和螺旋神经节细胞逐渐出现缺失；血管纹和螺旋韧带也呈现萎缩；Cav 1．3表达含量逐渐减少，4周218．94±11．29，14周184．67±11．92，24周148．18±8．35与48周98．04±4．52比较，差异有统计学意义（F=119．17，P〈0．01）。结论老年性耳聋小鼠Cav 1．3钙离子通道蛋白表达含量随年龄增长而减少，其功能的异常和缺失可能在老年性耳聋的发病中起一定作用。
- 陈金褚汉启周良强余洋陈请国冰丹刘云王少立张平黄孝文崔永华
- 关键词：听觉丧失钙通道毛细胞听觉
- 听觉系统中的钙联蛋白
- 2007年
- 钙联蛋白(calnexin)广泛存在于人和动物内耳听觉系统,在调节细胞质 Ca^(2+)浓度方面发挥重要作用,在胞质高 Ca^(2+)浓度的情况下能起到保护细胞的作用。因此,钙联蛋白的相关研究有助于进一步了解和认识其与内耳听觉系统的关系。本文就钙联蛋白在毛细胞内的分布,作为毛细胞早期标志物及其与老化鼠耳蜗退化的关系做一综述。
- 陈请国吴小慧王宝凤李欣龚树生
- 武汉地区汉族人群T淋巴细胞免疫球蛋白黏蛋白4基因多态性与变应性哮喘的相关性
- 2009年
- 变应性哮喘是一种以气道高反应性和慢性炎症为特征的气道炎症性疾病。其病因既受环境影响，又有明显的遗传倾向。有学者采用定位克隆法，在世界不同种族中发现人5q31-33是哮喘的重要基因候选区。人T淋巴细胞免疫球蛋白黏蛋白蛋白（T cells immunoglobulin mucin，TIM）基因家族位于5q33．2，包括TIM-1、TIM-3和TIM-4。国内外有研究表明，TIM-1和TIM-3基因多态性与变应性哮喘易感性相关。TIM4是最近才发现的TIM家族成员，且证明是TIM-1的天然配体。因此，推测作为TIM-1天然配体的TIM-4可能与哮喘易感性有关。本研究检测武汉地区汉族人群TIM-4外显子2区8579G／A、外显子3区11522G／A单核苷酸多态性，以探讨其与哮喘易感性的关系。
- 吴小慧李一荣陈请国王琳胡丽华
- 关键词：细胞免疫球蛋白变应性哮喘基因多态性汉族人群黏蛋白气道高反应性
- 良性阵发性位置性眩晕的复发影响因素分析被引量：22
- 2015年
- 目的探讨良性阵发性位置性眩晕（BPPV）复发的相关影响因素。方法搜集300例BPPV患者的相关资料，给予手法复位治疗后电话随访一年，将完成随访228例患者按照是否复发分为复发组60例和未复发组168例，并对2组患者的年龄、性别、发病部位、伴发基础疾病和生活相关因素情况进行比较，采用Logistic回归模型对BPPV复发的影响因素进行多因素分析。结果经单因素统计分析发现，过度劳累（P〈0．01），年龄≥45岁（P〈0．01）、经常出差（P〈0．01）、长期使用电脑（P=0．003）、有睡眠障碍（P=0．002）、口服钙片（P=0．002）及伴发后循环缺血（P=0．025）和高脂血症（P=0．004）与BPPV复发相关；二元Logistic回归分析发现年龄≥45岁（OR=10．20，P〈0．01）、过度劳累（OR=2．612，P=0．006）、经常出差（OR=5．257，P=0．006）、长期使用电脑（OR=3．870，P=0．003）、有睡眠障碍（OR=2．612，P=0．039）、伴发后循环缺血（OR=3．4ll，P=0．043）或伴发高脂血症（OR=2．299，P=0．047）是BPPV复发的危险因素，而年龄〉145岁对患者复发的影响最大。结论年龄是BPPV患者复发的最大危险因素；而后循环缺血、高脂血症、过度劳累、睡眠障碍、长期使用电脑以及经常出差也是BPPV复发的危险因素。
- 陈请国王兴龙毛忠瑶郑烨贤刘静彭利艳
- 关键词：良性阵发性位置性眩晕复发年龄
- TIM-4基因多态性与湖北地区汉族人群支气管哮喘易感性的研究被引量：2
- 2008年
- 目的探讨T细胞免疫球蛋白域及黏蛋白域蛋白4（Tcells immunoglobulin domain and mucin domain protein-4，TIM-4）基因外显子2区Lys65Lys（G／A）、外显子9区Val365Met（G／A）的单核苷酸多态性（SNP）与湖北地区汉族人群支气管哮喘易感性的关系。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）的方法对湖北地区185例哮喘患者和162例健康者TIM-4基因外显子2区Lys65Lys（G／A）、外显子9区Val365Met（G／A）的多态性进行分析，计算基因型和等位基因频率。结果（1）湖北地区汉族人群健康者TIM-4基因外显子2区Lys65Lys（G／A）位G／G、G／A、A／A基因型频率分别为0．840、0．160、0，而哮喘人群其频率分别为0．859、0．141、0，其基因型和等位基因型频率与对照组相比差异均无统计学意义（P=0．603，P=0．618）；（2）本试验未检测到TIM-4外显子9区Val365Met（G／A）的多态性。结论湖北地区汉族人群TIM4基因外显子2区Lys65Lys（G／A）存在单核苷酸多态性变异，但该位点的变异与湖北地区汉族人群支气管哮喘易感性无关；TIM-4基因外显子9区VaD65Met（G／A）在湖北地区汉族人群中未发现单核苷酸多态性。
- 吴小慧李一荣陈请国陈凤花胡丽华
- 神经干细胞与乳鼠基底膜共培养后分化为毛细胞样细胞的研究被引量：5
- 2008年
- 目的探讨体外培养和鉴定胚胎大鼠神经干细胞及诱导其分化为毛细胞样细胞。方法从SD系胚鼠大脑分离神经干细胞,在无血清培养基中培养。取乳鼠基底膜与神经干细胞一起培养,14～21天后通过免疫荧光和免疫组化法检测毛细胞标志物myosin VIIa和calretinin。结果培养的神经干细胞胞体透亮,折光性好,Nestin鉴定阳性。诱导分化后的细胞免疫荧光和免疫组化示myosin VIIa和calretinin阳性。结论无血清条件下能培养出活性很好的神经干细胞,乳鼠基底膜能引导其朝毛细胞方向分化。
- 陈请国付勇王显红吴小慧谢静李哲文龚树生
- 关键词：神经干细胞基底膜分化
