王易伦
- 作品数：31 被引量：57H指数：4
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- 发文基金：国家自然科学基金上海市科学技术发展基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 热休克后表达受抑基因的差别显示及克隆
- 1997年
- 热休克反应是生物体对高于其正常生长温度环境而作出的一系列分子应答反应。热休克基因及其表达的正调控机制现已得到广泛而深入的研究。
- 戴建新王易伦刘宇健陆惠萍孙树汉
- 关键词：热休克基因分子遗传学热休克反应计算机辅助分析全长CDNA克隆
- 特异性转移因子对人AFP促进小鼠H22腹水肝癌细胞RNA合成的拮抗效应被引量：2
- 1993年
- 用亲和层析法从3～5月龄引产胎儿肌肉组织中提纯AFP.用纯化AFP免疫小鼠,取其脾脏按匀浆透析法制备AFP特异转移因子(SP-TF),取正常未免疫鼠脾脏制备非特异转移因子(N—TF),从预接种小鼠腹水中分离Hz2腹水肝癌细胞(H22细胞),体外用[3H]—UR参入方法,从转录水平观察SP—TF对AFP促进小鼠H22细胞生长的拮抗效应。结果表明:SP—TF对AFP促进H22细胞RNA合成具有非常显著的拮抗效应。此效应具有抗原特异性和供体依赖性。
- 许卫民李树凯王易伦赵忠良王国华苏成芝
- 差别显示mRNA法的改良被引量：2
- 1995年
- 本文介绍了一种筛选和克隆差异表达基因的新方法——差别显示mRNA法。并在模板、引物、反应体系、反应条件等方面,对该方法作了深入的探索和改进,与原方法相比,改良法具有高效、可靠性高、经济等优点。实验表明,该方法能有效地筛选到一对细胞或组织在不同状态下表达差异的基因。为新基因的发现和克隆提供了新的手段。
- 戴建新王易伦郭嘉刘宇健隆德如
- 关键词：基因信使RNAPCR
- 一种优化翻译起始效率的方法
- 1995年
- 本文以人分裂细胞核抗原(PCNA)基因作为目的基因,把包括PCNA基因5′端非翻译区(5′NTR)的24bp和编码38个氨基酸114 bp的顺序插入pTZ19R,构建与LacZ’5′端的融合基因。用寡核苷酸定点突变法在PCNA 5′NTR形成SD顺序,再用PCR法在SD顺序左右两侧分别随机突变6个和7个碱基,使它们与结构基因5′端顺序自发地形成各种可能的翻译起始区(TIR)二级结构。重组质粒转化JM109(DE3),以T7 RNA聚合酶-T7启动子调控转录。对288个重组子的β-gal活性测定表明,不同重组的表达量可相差55倍,其中9个表达量不同的重组子的RNA dot blot证实它们在转录水平无明显表达差异。由此提示,该研究策略和方法能有效地改变目的基因的TIR二级结构和捕获具有高翻译起始效率的表达克隆。
- 王易伦郭瀛军戴建新裘敏燕陆长德
- 关键词：翻译起始T7RNA聚合酶Β-半乳糖苷酶
- 改良酸性胍一步法提取RNA技术被引量：11
- 1989年
- 酸性胍一步法提取RNA具有省时、量高和质纯等优点,但是不易在国内现有条件下进行,因此本文对该法进行了改良。实验表明,与CsCl法和酸性胍一步法比较,改良一步法保持了RNA产量、poly(A)+RNA产率、260/280比值和分子完整性等参数水平,并且易于在国内现有条件下推广使用,由此为酸性胍一步法提取RNA提供了可行的方法。
- 孙仑泉王易伦毛积芳万芷芳
- 关键词：核糖核酸离心法
- mRNA翻译起始区构效关系的研究被引量：1
- 1995年
- 本文分析了9个表达量相差55倍的5′PCNA-LacZ′重组子的TIR二级结构与翻译起始效率的关系。在5′NTR顺序确定为28个核苷酸(从转录起始位点起)时,TIR范围在约编码第12个密码子(第33至37核苷酸)处存在一个二级结构及其△G的变化阈位,在该阈位处按表达量调正重组子TIR的范围,得到△G与表达量之间相关系数为0.97的曲线;在TIR二级结构中,起始密码子处于配对的空间位置对翻译起始效率有明显抑制作用,但SD顺序的空间位置与表达量之间无明显相关性。
- 王易伦陈农安陆长德郭瀛军戴建新陆德如
- 关键词：翻译起始MRNA
- 一种简单、快速、经济的mRNA分离方法被引量：1
- 1995年
- 对ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）纤维素纯化ｐｏｌｙ（Ａ）ＲＮＡ的方法进行了改良。缩小了层析柱床的体积，使填料用量仅为常规量的１／５０—１／１００，即在移液器尖嘴中进行层析。与常规方法相比，它具有实验时间短、洗脱的ｍＲＮＡ可直接合成ｃＤＮＡ和得率较高等优点。
- 王易伦戴建新郭瀛军陆德如
- 关键词：MRNARNA
- E.coli中mRNA翻译起始区构效关系的研究进展被引量：1
- 1995年
- 在翻译水平调控基因的表达是一种较为普遍的形式,尤其在原核生物中,细菌和噬菌体的基因组结构的基本形式为操纵元(operon),位于同一转录单位的基因在转录水平的调节是相同的,因此,它们的表达差异主要与翻译水平调控相关。近年来,随着外源基因在E.coli系统中表达的广泛应用,促进了对该系统有关转录和翻译调控元件及其规律的研究。然而,在实践中,一个目的基因能否在E.
- 王易伦
- 关键词：翻译起始区起始密码子核糖体翻译水平
- 重组人α8干扰素在大肠杆菌中的克隆与高表达被引量：1
- 1995年
- 利用基因重组技术构建了人干扰素α８（ＩＦＮ－α８）高表达菌株Ｅ．ｃｏｌｉＸＬｌ－Ｂｌｕｅ／ｐＢｍ，经酶切鉴定、ＤＮＡ测序、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ及生物活性测定等分析，表明能特异性地表达具有生物活性的ＩＦＮ－α８，表达量达到总菌体蛋白的２３％，经复性后比活为４．８×１０７ＩＵ／ｍｇ，具有良好的应用前景。
- 张平武王易伦陆德如
- 关键词：基因重组克隆基因表达大肠杆菌
- 人促红细胞生成素在大肠杆菌中融合高表达：稀有密码子对外源蛋白翻译速率的影响被引量：1
- 1995年
- 本实验分别用两种融合表达载体（ｐＧＥＸ－２Ｔ及ｐＤＳ－６Ｈ）在大肠杆菌ＸＬ１－Ｂｌｕｅ中表达人促红细胞生成素（ｈ－ＥＰＯ）。结果发现，虽然ｈ－ＥＰＯ基因中大肠杆菌使用频率为０％或１％的密码子占密码子总量的１４．３％，但实验中却取得了较高的蛋白表达量。ｐＧＥＸ－２Ｔ和ｐＤＳ－６Ｈ中表达的融合蛋白（分子量：４４４００和２３８００）分别占细菌总蛋白的２９．７％和１７．５％。从而提示，一个基因中的密码子使用频率与翻译延长速率之间可能不是一种简单的对应关系。表达载体ｐＧＥＸ－２Ｔ中５＇融合基因长度达１３００ｂｐ，而ｐＤＳ－６Ｈ中仅为３６ｂｐ，而ｐＤＳ－６Ｈ但两者表达水平却无显著差异，因此作为翻译起始限制因素的翻译起始区的ＡＴＧ下游顺序仅需长约３６个核苷酸。
- 郭瀛军王易伦陆惠萍陆德如
- 关键词：促红细胞生成素密码子基因表达大肠杆菌
