王建峰
- 作品数：23 被引量：87H指数：6
- 供职机构：宁波出入境检验检疫局更多>>
- 发文基金：国家质检总局科技计划项目宁波市自然科学基金浙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生轻工技术与工程生物学更多>>
- 大鼠脂肪因子Vaspin基因的克隆与原核表达被引量：1
- 2014年
- 目的构建大鼠脂肪因子Vaspin高效原核表达载体,并获得纯化的Vaspin蛋白。方法以大鼠睾丸脂肪细胞总RNA为模板,RT-PCR扩增Vaspin基因,亚克隆到原核表达载体pET-30a(+)获得重组质粒pET-30a-Vaspin,转化至E.coli BL21(DE3)菌株中进行诱导表达,SDS-PAGE电泳检测表达产物,用Ni柱进行纯化重组蛋白,Western blot鉴定其特异性。结果测序结果表明克隆的Vaspin基因序列正确,构建的原核表达载体可以成功表达分子量为50 kDa的重组蛋白,Western blot结果证实该蛋白为大鼠脂肪因子Vaspin。结论完成了大鼠脂肪因子Vaspin基因的克隆,成功构建了原核表达载体,并在BL21(DE3)菌株中高表达,为进一步研究Vaspin在胰岛素抵抗及肥胖中的作用机制奠定了基础。
- 于纪棉王建峰张玉琳孟香红倪晶晶陶冬英
- 关键词：脂肪因子原核表达
- 赤羽病病毒Real-time RT-PCR检测方法的建立与初步应用被引量：7
- 2010年
- 为了研究赤羽病病毒的检测方法，试验根据GenBank中已发表的赤羽病病毒（Akabanevirus，AKAV）的s基因序列建立了检测AKAV的Real-timeRT—PCR方法。结果表明：该方法对AKAV的检测有高度的特异性，与牛病毒性腹泻病毒（BVDV）、传染性牛鼻气管炎病毒（IBRV）等13种病毒均无交叉反应；Real—timeRT—PCR能够扩增稀释度为1×10^-5的病毒RNA（核酸含量约1．18ng／μL），比普通RT—PCR高出1000倍；用此方法检测130份奶牛血清样品与1份流产胎儿病料，均未检测到阳性样本；AKAV在血清模拟样品中可被有效检出。
- 张吉红闻伟刚李如松黄素文倪健波王建峰
- 关键词：核酸检测
- 猪捷申病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用
- 猪捷申病(porcine Teschen disease,PTD)是由微RNA病毒科捷申病毒属的猪捷申病毒(porcine teschovirus,PTV)引起的以猪脑脊髓灰质炎、母猪繁殖障碍、腹泻、皮肤损伤及无症状等为...
- 王建峰倪健波李如松张强杨德全黄素文熊炜李健
- 关键词：荧光定量聚合酶链反应
- 柯赫法则在橘子罐头商业无菌检验中的应用被引量：1
- 2011年
- 参照国家标准对一批出现胖听和泄漏的橘子罐头进行商业无菌检验,接种酸性肉汤和麦芽浸膏汤均未见微生物生长,无法判断是否为非商业无菌。根据柯赫法则的原理,将胖听罐的汤汁接种到正常的糖水橘子汤汁中,汤汁产气变浑浊,经分离鉴定为酿酒酵母。研究表明,柯赫法则可以成功应用于罐头商业无菌检验,解决现行标准不能检测的难题。
- 黄素文杨文潮倪健波胡桃燕王建峰
- 关键词：橘子罐头商业无菌酿酒酵母
- 牛副结核分枝杆菌LAMP快速检测方法的建立被引量：11
- 2012年
- 为建立牛副结核分枝杆菌(MAP)的快速检测方法,本研究采用环介导等温扩增(LAMP)技术,以MAP的IS900基因序列为靶基因设计特异性引物,建立了MAP特异性的LAMP快速检测方法。经反应条件优化,检测结果显示,建立的LAMP检测方法具有良好的特异性,最低见测量为0.53 pg;与其他病原菌无任何交叉反应。临床样品检测与行业标准的符合率为100%。该LAMP检测方法可以用于MAP的常规检疫。
- 王建峰黄素文刘思国倪建波王春张吉红于纪棉朱堂明黄绍棠
- 关键词：环介导等温扩增
- 淡水小龙虾主要过敏原原肌球蛋白基因的克隆、表达及其免疫活性鉴定被引量：18
- 2011年
- 目的:克隆、表达淡水小龙虾肌肉中主要过敏原原肌球蛋白(tropomyosin),并对其免疫活性进行鉴定。方法:根据甲壳类的泛过敏原tropomyosin基因的高度保守性设计简并引物,通过RT-PCR克隆出淡水小龙虾虾肉中过敏原tropomyosin的全长基因。将该基因与pET-28a载体连接并转化大肠杆菌Rosetta(DE3),经诱导异丙基-B-D-硫代乳糖苷(IPTG)诱导表达,Ni2+亲和层析柱纯化后,用Western blot检测该重组蛋白的免疫活性。结果:序列分析显示该基因包括一个编码284个氨基酸的开放阅读框,与已知虾、蟹、龙虾等的过敏原tropomyosin基因有较高同源性(>80%)。根据过敏原的命名规则,将其命名为Proc 1,并提交GenBank数据库,登录号为FJ769183。重组小龙虾tropomyosin在大肠杆菌中能高效的表达,Western blot检测结果显示该重组蛋白具有良好的免疫活性。结论:研究成功表达了具有免疫活性的淡水小龙虾原肌球蛋白,为虾过敏性疾病的诊断和治疗奠定了基础。
- 黄素文杨文潮朱海王建峰倪健波吕志平冼静雯刘志刚
- 关键词：淡水小龙虾原肌球蛋白免疫活性
- 马动脉炎病毒RT-LAMP检测方法的建立被引量：1
- 2011年
- 为建立一种快速、简便、特异性高的马动脉炎病毒反转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法,针对马动脉炎病毒膜基质蛋白M基因的保守序列设计特异性引物,优化反应条件,建立了马动脉炎病毒的RT-LAMP检测方法并对其特异性和灵敏性进行了检测。结果显示,建立的RT-LAMP检测方法具有良好的特异性,灵敏度为0.12pg,是普通RT-PCR的100倍,检测时间仅需1h,肉眼即可观察检测结果。表明建立的RT-LAMP检测方法可用于进出口马动脉炎病毒的检疫。
- 黄素文于纪棉倪健波王建峰杨文潮张超张吉红相文华
- 关键词：马动脉炎病毒检疫
- 赤羽病病毒real-time RT-PCR检测方法的建立与初步应用
- 根据GenBank中已发表的赤羽病病毒(Akabanevirus,AKAV)的S基因序列,建立了检测AKAV的real-timeRT-PCR方法。特异性试验表明,该方法对AKAV的检测有高度的特异性,与牛病毒性腹泻病毒(...
- 张吉红闻伟刚李如松黄素文倪健波王建峰
- 关键词：赤羽病病毒核酸检测
- 文献传递
- DiversiLab系统用于食品中单增李斯特菌同源性分析被引量：3
- 2013年
- R]DiversiLabSystemDNA指纹分型系统（DiversiLab系统）对食品中分离到的91株单增李斯特菌进行分子分型，分析菌株之间的同源性，评价该系统的分析能力。结果显示91株单增李斯特茵可以分成22群，菌株之间的相似性64．8％--09．8％，未表现地区特异性。DiversiLab系统分析结果准确揭示了91株单增李斯特茵的遗传特征和亲缘关系，可以作为一种单增李斯特茵的快速分型和溯源方法。
- 劳华均李如松孙萍倪健波王建峰王春
- 关键词：单增李斯特菌同源性分析
- 淡水小龙虾过敏原胶体金快速检测试纸条的研制被引量：4
- 2014年
- 目的研制虾过敏原胶体金快速检测试纸条。方法利用克隆表达的具有变应原活性的重组淡水小龙虾原肌球蛋白制备虾过敏原单抗和多抗,用胶体金偶联虾过敏原单抗;将过敏原多抗和羊抗鼠IgG分别包被在硝酸纤维膜上,分别作为检测线和质控线,依次将样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水纸组装切割成胶体金免疫层析快速检测试纸条。结果使用研制的试纸条检测淡水小龙虾、日本沼虾、虾蛄、河鲫鱼、带鱼、猪肉和牛肉等样品提取液,只有淡水小龙虾出现阳性条带,其余样品均为阴性,无明显交叉反应。此试纸条的检测灵敏度也很高,达到100 ng/ml。结论该试纸条重复性好、操作简单、灵敏度高、特异性强,能快速检测食品中的淡水虾过敏原,具有很重要的应用推广价值。
- 黄素文王建峰朱海倪健波刘志刚杨文潮
- 关键词：淡水小龙虾胶体金试纸条
