王小英
- 作品数：4 被引量：9H指数：2
- 供职机构：南京医科大学基础医学院卫生部抗体技术重点实验室更多>>
- 发文基金：南京市科技发展计划项目南京市医学科技发展项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 人源抗EGFR抗体-鱼精蛋白融合蛋白的制备及活性分析被引量：1
- 2011年
- 目的:构建人抗EGFR单链抗体(scFv)/鱼精蛋白截短体(truncated protamine,tP)融合蛋白基因,在大肠杆菌中表达并纯化,分析该融合蛋白的生物学活性。方法:设计引物扩增人抗EGFR单链抗体编码序列,将其克隆于原核表达载体pBAD-A;人工合成tP序列,将其克隆于原核表达载体pBAD-AscFv上,构建成scFv/tP融合基因,在大肠杆菌TOP10F′中诱导表达,表达产物经SDS-PAGE和Western blot鉴定后,用His-trap镍亲和层析柱纯化。ELISA分析scFv/tP融合蛋白抗原亲合活性,凝胶迁移阻滞实验检测scFv/tP融合蛋白与DNA的结合活性。结果:成功构建了人源抗EGFR抗体/tP融合基因,经L-Ara诱导后在大肠杆菌中实现了可溶性表达。表达的scFv/tP融合蛋白保持了与抗原的结合活性,同时具有结合DNA的能力。结论:scFv与tP融合后,同时具有与抗原和DNA结合的活性,该scfv/tP融合蛋白为EGFR表达阳性肿瘤的靶向基因治疗奠定了基础。
- 张峰王小英唐奇刘玉张慧林苏亦平冯振卿朱进
- 关键词：EGFR
- 人源抗Trop-2抗体Fab片段在胰腺癌靶向治疗中的应用
- 胰腺癌是恶性程度极高的消化道肿瘤,病死率逾90%,肿瘤无法切除患者的中位生存期仅6个月。全世界每年约有20万人死于此病,且发病率有逐年增高的趋势。外科手术是目前能够根治胰腺癌的唯一手段,但因早期症状不明显,多数患者在确诊...
- 王小英
- 关键词：胰腺癌靶向治疗
- 文献传递
- 人源抗Trop-2抗体Fab的制备及条件优化被引量：5
- 2012年
- 目的 :探讨人源抗Trop-2抗体片段Fab在大肠杆菌中的诱导表达,优化蛋白表达及纯化的条件。方法 :将含有抗Trop-2 Fab抗体基因的质粒转化宿主菌E.coli TOP10F′大肠杆菌,比较诱导前培养液更换对抗Trop-2 Fab片段表达量的影响;比较不同诱导温度、诱导时间及诱导前加入葡萄糖对蛋白表达的影响;大量表达的抗Trop-2 Fab经亲和层析纯化后,用免疫荧光和流式细胞术检测其免疫学特性。结果:在培养液中加入5 g/L的葡萄糖,人源抗Trop-2抗体Fab片段的表达产量明显增加;16℃的诱导温度比其它温度能表达更多的Fab分子;加诱导剂12 h,目的蛋白的表达量至峰值。结论:本实验结果为在原核系统中大量制备抗Trop-2抗体片段及后续的肿瘤靶向治疗提供了基础。
- 王小英林红张慧林仇金荣丁贵鹏唐小军陈汐敏唐甜刘琼琼冯振卿朱进
- 关键词：原核表达免疫学检测
- BRCA2在卵巢肿瘤组织中的表达及临床意义被引量：3
- 2012年
- 目的:乳腺癌易感基因2(breast cancer suscepbility gene 2,BRCA2)是近几年发现的新的抑癌基因,本研究旨在分析BRCA2在卵巢癌组织中的表达及其临床意义。方法:采用1对引物扩增BRCA2基因第14外显子,应用聚合酶链反应和基因测序技术检测BRCA2基因,并且应用免疫组化和Western blot检测肿瘤组织BRCA2蛋白的表达。结果:卵巢黏液性囊腺瘤和正常组织BRCA2基因未发生突变,浆液性肿瘤和黏液性囊腺癌的BRCA2第14外显子的128位碱基T突变为C。Western blot检测结果显示BRCA2在卵巢囊腺癌上的表达低于正常卵巢组织和卵巢囊腺瘤,免疫组化检测结果发现BRCA2在卵巢黏液性囊腺瘤和黏液性囊腺癌中的阳性率分别为87.50%和53.33%,差异有统计学意义(P<0.05);而BRCA2在卵巢浆液性囊腺瘤和浆液性囊腺癌中阳性率分别为53.85%和73.17%,差异没有统计学意义(P>0.05)。BRCA2蛋白在不同年龄、组织学分型、分化程度和临床分期各组间差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:BRCA2在卵巢癌组织中的表达不仅可以用于诊断,也可能为治疗提供一个途径。
- 刘琼琼张慧林李琥张万东王小英李凤山冯振卿朱进
- 关键词：卵巢癌BRCA2基因DNA测序
