张慧林
- 作品数：35 被引量：86H指数：6
- 供职机构：南京医科大学更多>>
- 发文基金：南京市科技发展计划项目南京市医学科技发展项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 抗Trop-2 IgG抗体联合顺铂对卵巢癌细胞特性的影响
- 2022年
- 目的探讨抗Trop-2 IgG抗体联合顺铂对卵巢癌上皮细胞的影响。方法转染Trop-2质粒至293F细胞,利用Protein A亲和柱纯化,获得人源抗Trop-2 IgG抗体。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测Trop-2质粒转染效率;聚丙烯酰胺(SDS-PAGE)鉴定抗Trop-2 IgG抗体纯化效率;分子互作Biacore T100检测抗Trop-2 IgG抗体与Trop-2抗原的亲和力。蛋白免疫印迹、流式细胞术和免疫荧光检测HO8910细胞和Iose 386细胞中Trop-2蛋白表达水平。实验分为4组:磷酸盐缓冲液(PBS)组、Trop-2 IgG组、cisplatin组、Trop-2 IgG+cisplatin组。CCK8检测卵巢癌细胞存活率,Transwell检测卵巢癌细胞迁移和侵袭能力。结果成功转染并纯化人源抗Trop-2 IgG抗体,并且其与Trop-2具有较高的结合力和免疫活性。抗Trop-2 IgG抗体在HO8910细胞中高表达,在Iose 386细胞中不表达。当顺铂存在时,Trop-2蛋白表达水平在HO8910细胞中高于Iose 386细胞,差异有统计学意义(P<0.05),并且Iose 386细胞中Trop-2蛋白表达水平不受影响。在HO8910细胞中,与PBS组相比,Trop-2组细胞存活率显著降低,且随着时间的增加,存活率逐渐降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与cisplatin组相比,Trop-2 IgG+cisplatin组中HO8910细胞和Iose 386细胞存活率都降低,差异有统计学意义(P<0.05)。在HO8910细胞中,与PBS组相比,其余3组细胞迁移和侵袭能力降低,并且Trop-2 IgG+cisplatin组中迁移和侵袭细胞数量少于cisplatin组,差异均有统计学意义(P<0.05);而在Iose 386细胞中无效果。结论抗Trop-2 IgG联合顺铂后可特异性识别卵巢癌细胞表面的Trop-2抗原,且能加强顺铂对HO8910细胞的抑制效果,为卵巢癌抗体-药物偶联物的开发和靶向治疗提供了思路。
- 姚雪刘金荣殷郑娜张慧林童华
- 关键词：卵巢癌顺铂
- 重组豹蛙酶的制备及其生物学特性分析被引量：5
- 2013年
- 目的:通过构建豹蛙酶原核表达载体pColdⅡ-Rap,表达、纯化豹蛙酶并研究其生物学活性。方法:合成豹蛙酶全基因序列,克隆于原核表达载体pColdⅡ中,鉴定正确后转化至大肠杆菌BL21,用SDS-PAGE和Western blot验证豹蛙酶的表达;大量表达重组豹蛙酶融合蛋白(Rap-His),通过MTT法分析Rap-His对乳腺癌细胞增殖的影响。结果:成功构建了pColdⅡ-Rap原核表达载体,经优化表达、纯化的条件,获得纯度较高的Rap-His;MTT法检测结果表明,该融合蛋白在320、160μg/ml时对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖的抑制率在加药后4 d达到93.49%。结论:本研究制备的重组Rap-His融合蛋白能够抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖。这为进一步与肿瘤特异抗体偶联,构建肿瘤特异性靶向药物的研究奠定了基础。
- 汪楠唐小军熊四平郑峰张慧林高畅李文杰董华朱进
- 关键词：融合蛋白细胞增殖抑制
- 人源抗c-Met抗体与rAGAP偶联物对卵巢癌细胞生物学特性的影响
- 2021年
- 目的:制备人源抗c-Met的全分子抗体(c-Met-IgG1)及其与重组东亚钳蝎镇痛抗肿瘤多肽(recombinant analgesic-antitumor peptide,rAGAP)偶联的新型抗体(c-Met-IgG1-rAGAP),分析它们的生物学特性,检测其对卵巢癌细胞生物学行为的影响。方法:以本实验室保存的人源抗c-Met抗体基因为模板,构建c-Met-IgG1-rAGAP真核表达载体并转染真核细胞,表达并纯化抗体偶联物。通过亲和力检测、免疫荧光、流式细胞术等方法,评估c-Met-IgG1和c-Met-IgG1-rAGAP的生物学特性。通过CCK-8、划痕实验、Transwell侵袭实验检测抗体对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结果:成功制备出能够与c-Met蛋白特异性结合的c-Met-IgG1和c-Met-IgG1-rAGAP两种抗体;一系列实验证明了c-Met-IgG1和c-Met-IgG1-rAGAP均可抑制c-Met阳性的卵巢癌细胞HO8910的增殖、迁移、侵袭,且c-Met-IgG1-rAGAP对卵巢癌细胞的抑制作用要强于c-Met-IgG1,而在c-Met阴性的IOSE386细胞中并未观察到这些作用。结论:研究结果表明c-Met-IgG1-rAGAP可靶向作用于c-Met阳性的卵巢癌细胞并具有抗肿瘤活性,可为探索卵巢癌的分子靶向治疗奠定研究基础。
- 冯恬龚丹丹王露瑶王怡雯周婷婷朱进张慧林童华
- 关键词：C-MET卵巢癌
- 妊娠合并卵巢肿物130例临床分析被引量：6
- 2013年
- 目的探讨妊娠合并卵巢肿物的诊断、临床表现和特征以及孕期处理方式对妊娠结局及胎儿的影响。方法对南京医科大学附属南京妇幼保健院2007年1月至2011年4月间收治并经手术证实及病理诊断的130例妊娠合并卵巢肿物病例,进行回顾性分析。结果妊娠合并卵巢肿物患者130例中76例(58.5%)于孕早中期发现;孕期发生蒂扭转13例(10%),破裂5例(3.85%),其中直径5～10cm的肿物更易发生并发症(P<0.05),孕中期亦较孕早、晚期更易发生并发症(P<0.05)。妊娠合并卵巢肿物患者130例,肿物数为148个,其中良性肿瘤患者87例,良性肿瘤数100个,以生殖细胞来源肿瘤多见,畸胎瘤最常见。卵巢交界性肿瘤2例,卵巢恶性肿瘤3例。130例手术患者,无流产病例,1例放弃胎儿,余129例胎儿均健康。结论在孕期适时进行手术干预对于妊娠合并卵巢肿瘤的患者及胎儿是安全的。
- 张玮周璘张慧林朱烨苏亦平
- 关键词：妊娠卵巢肿瘤卵巢肿瘤蒂扭转
- 抗人滋养层细胞表面抗原-2单抗的制备及免疫学特性分析被引量：6
- 2011年
- 目的:利用杂交瘤技术制备抗人滋养层细胞表面抗原-2(trophoblast cell-surface antigen 2,Trop2)单克隆抗体并鉴定其免疫学特性。方法:以胰腺癌细胞系BxPC3免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0细胞融合后制备单抗。通过酶联免疫法、免疫荧光、免疫沉淀和质谱分析、流式细胞术、免疫组织化学等方法,鉴定单抗的免疫学特性。结果:通过细胞的融合与筛选,获得了持续分泌抗Trop2单抗的杂交瘤细胞株,该抗体可以识别细胞表面的Trop2膜蛋白,也可用于免疫组化识别人肿瘤组织中的Trop2蛋白,同时该抗体对乳腺癌细胞的生长具有一定的抑制作用。结论:该单抗具有作为Trop2阳性表达肿瘤靶向治疗的潜在应用价值。
- 梁洁刘琼琼张慧林林红唐奇刘玉苏亦平冯振卿朱进
- 关键词：单克隆抗体免疫组化
- 大容量天然人源Fab抗体库的构建及日本血吸虫抗独特型抗体的筛选、鉴定被引量：6
- 2006年
- 目的:构建大容量天然人源Fab抗体库,筛选全人源日本血吸虫抗独特型抗体并进行初步鉴定。方法:采集15位健康成人的骨髓淋巴细胞,构建天然人源Fab抗体库。并以日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)及成虫抗原(SWAP)免疫鼠血清IgG包板进行筛选,经ELISA鉴定后,对阳性克隆进行可溶性表达。结果:构建了2×109大容量天然人源Fab抗体库,经核苷酸序列分析,证实插入片段为Fab基因片断。经过6轮筛选后,从富集的次级抗体库中随机挑取80个克隆,用ELISA法鉴定得到4个可与免疫鼠血清(Ab1)特异性结合,而不与SEA及SWAP结合的单克隆抗体(C12、C19、D1、D2),其中C12经SDS-PAGE电泳显示插入片断正确。结论:成功构建了大容量天然人源Fab抗体库,并从中获得人源日本血吸虫抗独特型抗体C12,为研制用于人体血吸虫病免疫预防的抗独特型抗体疫苗奠定了基础。
- 张慧林焦永军朱进冯振卿管晓虹
- 关键词：日本血吸虫噬菌体抗体库抗独特型抗体抗体FAB段
- 稳定表达Trop-2基因的NIH3T3细胞系的构建和特性分析被引量：1
- 2013年
- 目的:建立稳定表达人滋养层细胞表面抗原(Trop-2)NIH3T3细胞,分析过表达Trop-2对NIH3T3细胞的生长、增殖和侵袭特性的影响。方法:将Trop-2基因克隆到真核表达载体pcDNA3.1,转染NIH3T3细胞,通过G418筛选及RT-PCR鉴定获得稳定表达Trop-2的NIH3T3细胞(NIH3T3-Trop-2)。用MTS法检测NIH3T3-Trop-2细胞的增殖能力,软琼脂集落形成实验检测NIH3T3-Trop-2细胞的克隆形成能力,明胶酶谱法检测NIH3T3-Trop-2细胞的基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9的分泌及细胞划痕实验检测NIH3T3-Trop-2细胞的迁移能力。结果:稳定表达Trop-2的NIH3T3细胞在生长增殖、克隆形成及侵袭能力均较NIH3T3细胞强,细胞培养上清中的MMP-2和MMP-9增多。结论:Trop-2对细胞的增殖与迁移能力具有明显的促进作用。
- 刘玉唐小军曹清丁贵鹏张慧林王欢郑峰徐凛锋林红
- 关键词：NIH3T3真核表达
- 凝溶胶蛋白在卵巢癌中的表达及意义被引量：1
- 2019年
- 目的探讨凝溶胶蛋白(GSN)在上皮性卵巢癌组织中的表达,并探讨其表达情况对卵巢癌患者的临床病理意义。方法选取2014年1月—2018年12月本院收治的行全面分期手术或肿瘤细胞减灭术治疗的上皮性卵巢癌患者标本45例作为研究对象,记录患者所有相关临床病理资料、治疗方案、复发情况以及联系方式,最后随访时间在2019年5月1日。另外随机选择同时期的卵巢良性肿瘤15例作为对照组。分别予以免疫组织化学检测,分析不同组的GSN蛋白的表达情况,并对所有患者进行电话随访,同时针对GSN蛋白的表达情况分析其与上皮性卵巢癌各项临床病理特征之间的意义。结果GSN蛋白在上皮性卵巢癌组织中表现为高表达,而在卵巢良性肿瘤组织中表现为低表达,分析得出卵巢癌的GSN蛋白的高表达与不同肿瘤的FIGO分期以及有无淋巴结转移间具有相关性,无明显相关性的临床病理参数包括患者年龄、组织学分型及分化程度,以上差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论上皮性卵巢癌组织中GSN蛋白表达升高,可能与卵巢癌患者的发生发展及预后有关,对卵巢癌的治疗提供了一定的理论依据。
- 张静敏胡海燕程雪纪捷王伟张慧林
- 关键词：上皮性卵巢癌凝溶胶蛋白免疫组化
- 子宫内膜癌分子分型及临床应用的研究进展被引量：1
- 2023年
- 子宫内膜癌(EC)属于女性生殖系统最常见的三大恶性肿瘤之一,其5年生存率达82%,与发病年龄、病理类型、组织学分级和淋巴结转移密切相关。由于传统的组织病理学分型在临床应用上存在很大的局限性,近年来以癌症基因组图谱分子分型为基础的多种EC分子分型方式已经成为肿瘤诊断、治疗及预后判断的依据。本文就EC分子分型的研究进展以及相关分子靶向治疗进行综述,以期望为EC的临床个体化精准治疗、疗效预测及预后评估提供有价值的信息。
- 田书凝张雯晴张慧林
- 关键词：子宫内膜癌分子分型靶向治疗分子靶向药物
- 肿瘤靶向药物抗体-药物偶联物的研究进展被引量：1
- 2022年
- 抗体-药物偶联物(Antibody-drug conjugates,ADC)具有单克隆抗体的靶向特异性和细胞毒素的抗肿瘤能力,其利用化学接头将细胞毒性药物与单克隆抗体偶联,与肿瘤部位的靶抗原结合后释放毒素。尽管概念简单,但是结构设计复杂、药物副作用明显和疗效欠佳等问题为其进一步研究应用带来了挑战。随着新技术的出现,ADC的开发逐渐获得了较为瞩目的研究成果。本综述就ADC的发展历程、结构及功能等方面进行论述,并主要阐述了一些目前具有较大临床意义的ADC的研究进展。
- 冯恬张慧林童华
- 关键词：肿瘤单克隆抗体靶抗原
