段晓东
- 作品数：12 被引量：33H指数：3
- 供职机构：新疆出入境检验检疫局更多>>
- 发文基金：国家质检总局科技计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 牛病毒性腹泻病毒不同检测方法的比较研究被引量：11
- 2009年
- 采用Idexx公司抗原捕获ELISA试剂盒对新疆部分地区160份牛血清进行了牛病毒性腹泻病毒抗原检测,结果有6份样品为阳性,对该6份血清用BVDV阴性血清进行了系列稀释后,分别用抗原捕获ELISA、RT-PCR和荧光RT-PCR进行检测,发现RT-PCR方法比ELISA检测灵敏度高10-100倍,荧光RT-PCR比RT-PCR灵敏度高约10-100倍。
- 季新成曾新强员丽娟牛国辉于学辉段晓东王大孝
- 关键词：牛病毒性腹泻病毒RT-PCR荧光RT-PCR
- 牛病毒性腹泻病毒的分离与鉴定被引量：12
- 2010年
- 【目的】为了解牛病毒性腹泻/黏膜病在新疆的流行现状,对疑似该病病料进行地方毒株的分离,并对其进行鉴定。【方法】将采自新疆不同地区疑似牛病毒性腹泻的病料接种MDBK细胞,并盲传2-4代;对分离株进行毒力测定及中和试验,应用RT-PCR方法扩增分离株的5’UTR基因片段并克隆测序分析。【结果】分离到的8株病毒可发生细胞病变,在MDBK细胞上的TCID50为103-106。毒株血清中和实验结果,RT-PCR反应结果,克隆后重组质粒经BamHI、HindIII双酶切鉴定、重组质粒PCR鉴定结果均得到预计扩增片段。重组质粒测序结果与GenBank中已发表的牛病毒性腹泻病毒NADL株序列同源性为82.0%-94.8%。【结论】证实所分离到的病毒为BVDV,命名为B-S-1、B-S-2、B-S-3、B-S-4、B-S-5、B-S-6、B-G-1和B-G-2。
- 牛国辉季新成段晓东晁群芳
- 关键词：牛病毒性腹泻病毒血清中和试验RT-PCR基因序列分析
- 奶牛新包子虫病快速检测技术的研究
- 季新成段晓东史茜员丽娟艾军于学辉王振宝徐军唐慧芬牛国辉朱建民刘小兰
- 新孢子虫病是造成奶牛流产、产弱胎、死胎、木乃伊胎的主要原因之一.该病呈世界性分布，已成为世界奶牛流产病研究的热点.尚无控制该病的有效办法，因此，研究高效、特异、敏感的诊断方法尤为重要.结合进出境动物检验检疫工作的实际需要...
- 关键词：
- 关键词：奶牛
- 牛精液中BVDV荧光定量RT-PCR检测方法的建立
- 对新鲜牛精液及牛精液冻存液中抑制RT-PCR扩增成分进行了分析,对精液用Sephacryl S-400凝胶过滤后提取病毒核酸,设计特异性引物和荧光探针,通过反应条件的优化,建立了牛精液中BVDV荧光定量RT-PCR检测方...
- 段晓东季新成刘菲牛国辉王大孝于学辉张彦明曾新强
- 关键词：BVDV荧光定量RT-PCR牛精液
- 文献传递
- 牛精液中BVDV荧光定量RT-PCR检测方法的建立
- 鲜牛精液及牛精液冻存液中抑制RT-PCR扩增成分进行了分析，对精液用sephacryl S-400凝胶过滤后提取病毒核酸，设计特异性引物和荧光探针，通过反应条件的优化，建立了牛精液中BVDV荧光定量RT-PCR检测方法，...
- 段晓东季新成刘菲牛国辉王大孝于学辉张彦明曾新强
- 文献传递
- 牛精液中IBRV荧光PCR检测方法的建立及精液带毒与血清抗体的关系被引量：1
- 2010年
- 【目的】建立牛精液中牛传染性鼻气管炎病毒（IBRV）的荧光PCR检测方法,并分析精液带毒与血清抗体的关系,为牛精液中IBRV的荧光PCR诊断和判定提供技术依据。【方法】采用Sephycral S-400凝胶过滤法和蛋白酶K预消化法,分别对新鲜牛精液和冻存牛精液进行处理,用DNA Zol方法提取病毒核酸,通过PCR反应条件的优化,建立了牛精液中直接检测IBRV的荧光PCR方法,对该方法进行特异性和重复性检验;最后用该方法分别对120份新鲜牛精液和40份冻存牛精液进行检测,同时用普通PCR方法和病毒分离方法加以对比;并对其中的10头牛定期采集精液、鼻腔拭子和血清样品,用该荧光PCR方法进行病原检测,对血清样品进行IBRV抗体检测。【结果】建立的荧光PCR方法具有较好的特异性,重复性和稳定性很好。用该方法可检测到新鲜牛精液中0.002 TCID50的病毒粒子,检测到冻存牛精液中0.02 TCID50的病毒粒子,检测时间在3 h之内,是OIE已报道方法灵敏度的40～400倍,是病毒分离方法灵敏度的100倍。120份新鲜牛精液和40份冻存牛精液中,检测到阳性样品25份,用普通PCR检测得到阳性样品15份,病毒分离检测得到阳性样品12份。检测结果表明,精液为阳性的牛血清抗体不一定为阳性,血清抗体阳性的牛精液中也不一定携带病毒。【结论】建立了牛精液中IBRV的荧光PCR检测方法;通过分析精液带毒与血清抗体的关系,进一步表明不能简单地以血清抗体阴阳性作为精液是否带毒的依据。鼻腔拭子带毒具有间歇性。
- 季新成牛国辉员丽娟段晓东张彦明于学辉曾新强
- 关键词：牛传染性鼻气管炎病毒荧光PCR血清抗体
- 牛传染性鼻气管炎病毒内标共扩增模板的构建与应用
- 根据牛疱疹病毒1型(BHV1)gB基因序列,设计高度保守的引物和荧光探针,并扩增包含有荧光PCR扩增区域的核酸片段,通过凝胶纯化回收,将该片段连接至pMD18-T载体,经鉴定后获得目标模板。通过引物设计,用搭桥法PCR扩...
- 季新成段晓东黄玲牛国辉刘菲刘小兰于学辉
- 关键词：牛传染性鼻气管炎病毒荧光定量PCR内标
- 文献传递
- 牛精液中基因I型牛病毒性腹泻病毒荧光探针定量RT-PCR检测方法的建立被引量：3
- 2011年
- 为建立牛精液中基因I型牛病毒性腹泻病毒(BVDV-1)的快速检测方法,本研究采用Sephycral S-400凝胶对牛精液过滤处理后提取病毒核酸,根据BVDV-1 5'UTR保守区基因序列,设计特异性引物和荧光探针,通过反应条件的优化,建立了牛精液中BVDV-1荧光定量RT-PCR检测方法。该方法可以检测到牛精液中含量为0.0125 TCID50的病毒,灵敏度比病毒分离方法高200倍～2 000倍,比常规RT-PCR方法高10倍。对从同一个牛场6个月内采集的120份新鲜牛精液和40份冷冻牛精液用该荧光RT-PCR方法检测,没有检测到BVDV-1阳性样品。对其中的10头牛定期检测精液中病毒的同时,并同步检测了全血中的病毒和血清抗体,结果血清抗体阳性牛精液中没有检测到病毒,本研究结果表明,不能以血清抗体阴阳性做为精液是否带毒的依据。
- 季新成黄玲段晓东员丽娟牛国辉于学辉曾新强张彦明
- 关键词：牛精液荧光定量RT-PCR检测血清抗体检测
- 牛传染性鼻气管炎病毒内标共扩增模板的构建与应用
- 牛疱疹病毒1型(BHV1)gB基因序列，设计高度保守的引物和荧光探针，并扩增包含有荧光PCR扩增区域的核酸片段，通过凝胶纯化回收，将该片段连接至pMD18-T载体，经鉴定后获得目标模板。通过引物设计，用搭桥法PCR扩增，...
- 季新成段晓东黄玲牛国辉刘菲刘小兰于学辉
- 文献传递
- 牛新孢子虫内标双重荧光PCR检测方法的建立被引量：3
- 2012年
- 为建立牛新孢子虫的快速准确检测方法,根据犬新孢子虫种属特异性基因Nc-5序列,设计高度保守的引物和荧光探针,通过引物设计和搭桥PCR法扩增,获得Nc-5荧光PCR内标模板。对内标模板的添加量和反应条件进行优化,建立了牛新孢子虫内标双重荧光PCR检测体系。该方法具有较好的特异性;可以检测到10个拷贝/PCR反应的核酸分子,与不加内标的荧光PCR检测灵敏度相当;通过对系列稀释的核酸样品的重复性检测,变异系数为0.50%～1.30%。通过对58份临床样品分别用该方法、不含内标的荧光PCR方法和普通PCR方法检测,结果显示,该方法与不含内标的荧光PCR方法的阳性检出率均为10.3%,比普通PCR方法阳性检出率(7.0%)高;表明该方法可用于临床样品中牛新孢子虫的快速检测,并能对实验室进行质量控制。
- 季新成段晓东黄玲牛国辉郑培刘小兰
- 关键词：犬新孢子虫内标
