员丽娟 作品数:17 被引量:44 H指数:4 供职机构: 新疆出入境检验检疫局 更多>> 发文基金: 国家质检总局科技计划项目 新疆维吾尔自治区高技术研究发展计划项目 更多>> 相关领域: 农业科学 理学 生物学 医药卫生 更多>>
牛精液中IBRV荧光PCR检测方法的建立及精液带毒与血清抗体的关系 被引量:1 2010年 【目的】建立牛精液中牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的荧光PCR检测方法,并分析精液带毒与血清抗体的关系,为牛精液中IBRV的荧光PCR诊断和判定提供技术依据。【方法】采用Sephycral S-400凝胶过滤法和蛋白酶K预消化法,分别对新鲜牛精液和冻存牛精液进行处理,用DNA Zol方法提取病毒核酸,通过PCR反应条件的优化,建立了牛精液中直接检测IBRV的荧光PCR方法,对该方法进行特异性和重复性检验;最后用该方法分别对120份新鲜牛精液和40份冻存牛精液进行检测,同时用普通PCR方法和病毒分离方法加以对比;并对其中的10头牛定期采集精液、鼻腔拭子和血清样品,用该荧光PCR方法进行病原检测,对血清样品进行IBRV抗体检测。【结果】建立的荧光PCR方法具有较好的特异性,重复性和稳定性很好。用该方法可检测到新鲜牛精液中0.002 TCID50的病毒粒子,检测到冻存牛精液中0.02 TCID50的病毒粒子,检测时间在3 h之内,是OIE已报道方法灵敏度的40~400倍,是病毒分离方法灵敏度的100倍。120份新鲜牛精液和40份冻存牛精液中,检测到阳性样品25份,用普通PCR检测得到阳性样品15份,病毒分离检测得到阳性样品12份。检测结果表明,精液为阳性的牛血清抗体不一定为阳性,血清抗体阳性的牛精液中也不一定携带病毒。【结论】建立了牛精液中IBRV的荧光PCR检测方法;通过分析精液带毒与血清抗体的关系,进一步表明不能简单地以血清抗体阴阳性作为精液是否带毒的依据。鼻腔拭子带毒具有间歇性。 季新成 牛国辉 员丽娟 段晓东 张彦明 于学辉 曾新强关键词:牛传染性鼻气管炎病毒 荧光PCR 血清抗体 猪瘟病毒E2基因的扩增及序列分析 被引量:3 2006年 本研究利用RT—PCR技术,对流行于国内部分地区的9株猪瘟病毒(CSFV)E2基因进行扩增,与C-株等4株参考毒株做了同源性比较,绘制了遗传进化关系发生树,结果表明,所测序列共由442个氮基酸残基组成。可将13株CSFV分为两个组群,其E2基因间的核苷酸序列同源性为81.9%~99.7%,所推导氨基酸序列同源性为88.2%~99.5%,其中9株CSFVE2基因的长度均为1324bp,编码的氨基酸序列均包括完整信号肽序列和跨膜区序列,9株流行毒株与C-株之间核苷酸序列同源性为81.9%~95.3%。所推导氨基酸序列同源性为88.2%~95.5%。说明近期流行毒株的变异呈现一定的多样性,并且多数毒株已向远离疫菌株方向变异。 曲永利 季新成 王臣 员丽娟 李毅关键词:猪瘟病毒 E2基因 扩增 奶牛新包子虫病快速检测技术的研究 季新成 段晓东 史茜 员丽娟 艾军 于学辉 王振宝 徐军 唐慧芬 牛国辉 朱建民 刘小兰 新孢子虫病是造成奶牛流产、产弱胎、死胎、木乃伊胎的主要原因之一.该病呈世界性分布,已成为世界奶牛流产病研究的热点.尚无控制该病的有效办法,因此,研究高效、特异、敏感的诊断方法尤为重要.结合进出境动物检验检疫工作的实际需要...关键词:关键词:奶牛 牛病毒性腹泻病毒不同检测方法的比较研究 被引量:11 2009年 采用Idexx公司抗原捕获ELISA试剂盒对新疆部分地区160份牛血清进行了牛病毒性腹泻病毒抗原检测,结果有6份样品为阳性,对该6份血清用BVDV阴性血清进行了系列稀释后,分别用抗原捕获ELISA、RT-PCR和荧光RT-PCR进行检测,发现RT-PCR方法比ELISA检测灵敏度高10-100倍,荧光RT-PCR比RT-PCR灵敏度高约10-100倍。 季新成 曾新强 员丽娟 牛国辉 于学辉 段晓东 王大孝关键词:牛病毒性腹泻病毒 RT-PCR 荧光RT-PCR 加速溶剂萃取–液相色谱法测定五灵脂药材中原儿茶酸的含量 2013年 建立了五灵脂中原儿茶酸含量的测定方法。利用加速溶剂萃取仪(ASE),以75%乙醇水溶液提取样品中的待测物,用Diamosil C18(4.61mm×250mm,5.0μm)色谱柱在梯度洗脱条件下分离待测物,外标法定量。原儿茶酸的线性范围为0.1—10.0mg/L,相关系数r=0.9998。方法的回收率为83%~107%,测定结果的相对标准偏差为4.6%~10.5%,方法的定量限为1.0mg/kg。该方法操作简便、快速,提取效率高,适用于检测和分析五灵脂中原儿茶酸的含量。 巩志国 苏敏 王静静 员丽娟 李世雨 季新成 朱建民关键词:五灵脂 原儿茶酸 液相色谱 牛病毒性腹泻病毒血清抗体检测 被引量:7 2011年 采用Svanova公司牛病毒性腹泻病毒血清抗体ELISA抗体检测试剂盒对采自新疆10个不同地区的875份牛血清进行了牛病毒性腹泻病毒血清抗体检测,共检出抗体阳性血清759份,最高阳性率为100%,最低为55.0%,平均为86.7%。检测结果表明该病已在新疆普遍存在,感染没有明确的地域分布规律。根据ELISA检测结果,从中选择15份血清用病毒中和试验进行检测,结果显示,所采用的ELISA检测方法具有较好的敏感性。 王文 张娟 员丽娟 季新成关键词:牛病毒性腹泻病毒 血清抗体 ELISA 病毒中和试验 新孢子虫NcSAG1与NcSRS2基因的原核表达与纯化 被引量:1 2013年 PCR扩增新孢子虫NcSAG1与NcSRS2基因,将其构建至原核表达载体pET28a(+),转化大肠杆菌BL-21菌株。对重组表达质粒pET28a/SRS2与pET28a/SAG1IPTG的诱导浓度和诱导温度等条件进行了摸索,确定蛋白最佳诱导时间分别为5、3h,IPTG浓度均为0.8 mmol/L。经组氨酸标记Ni 2+柱纯化后获得的蛋白纯度均大于93.5%,蛋白质量浓度分别为1.23、1.1g/L。经Western blotting检测证明表达的蛋白具有较好的特异性。用纯化后pET28a/SRS2、pET28a/SAG1和二者等量混合物包被酶标板,经ELISA检测表明,表达的蛋白具有较强免疫活性,2种蛋白等量混合物包被酶标板与各蛋白单独包被酶标板检测比较,并未见D值升高。 史茜 员丽娟 季新成 于学辉关键词:新孢子虫 WESTERN BLOTTING ELISA 牛精液中基因I型牛病毒性腹泻病毒荧光探针定量RT-PCR检测方法的建立 被引量:3 2011年 为建立牛精液中基因I型牛病毒性腹泻病毒(BVDV-1)的快速检测方法,本研究采用Sephycral S-400凝胶对牛精液过滤处理后提取病毒核酸,根据BVDV-1 5'UTR保守区基因序列,设计特异性引物和荧光探针,通过反应条件的优化,建立了牛精液中BVDV-1荧光定量RT-PCR检测方法。该方法可以检测到牛精液中含量为0.0125 TCID50的病毒,灵敏度比病毒分离方法高200倍~2 000倍,比常规RT-PCR方法高10倍。对从同一个牛场6个月内采集的120份新鲜牛精液和40份冷冻牛精液用该荧光RT-PCR方法检测,没有检测到BVDV-1阳性样品。对其中的10头牛定期检测精液中病毒的同时,并同步检测了全血中的病毒和血清抗体,结果血清抗体阳性牛精液中没有检测到病毒,本研究结果表明,不能以血清抗体阴阳性做为精液是否带毒的依据。 季新成 黄玲 段晓东 员丽娟 牛国辉 于学辉 曾新强 张彦明关键词:牛精液 荧光定量RT-PCR检测 血清抗体检测 液相色谱法测定番茄制品中链霉素和双氢链霉素的残留量 被引量:5 2012年 建立了测定番茄制品中链霉素和双氢链霉素残留量的净化方案。样品中的残留物用磷酸盐缓冲液(pH 4)提取,经分散固相萃取法初步净化后,再经串联双柱固相萃取净化,用RP C18(Symmetry Shield)色谱柱在梯度洗脱下分离待测物,外标法定量。链霉素的线性范围为0.05~0.8 mg/L,相关系数r>0.9998。方法的回收率为71%~95%,定量限(S/N=10)为0.1 mg/kg,测定结果的相对标准偏差为2.6%~10.5%。该方法操作简便,净化效果好,灵敏、准确,检测成本低,适用于检测和分析番茄制品中链霉素和双氢链霉素的残留量。 巩志国 苏敏 员丽娟 李世雨 季新成关键词:链霉素 液相色谱 布鲁氏菌和贝纳氏柯克斯氏体双重PCR检测方法的建立与初步应用 被引量:2 2014年 为建立同步检测布鲁氏菌和贝纳氏柯克斯氏体的双重PCR方法,根据GenBank上公布的布鲁氏菌Bp26基因和贝纳氏柯克斯氏体IS1111a基因,利用Primer premier 5.0软件各设计一对特异性引物,分别扩增出219 bp和130 bp的目的片段,通过优化PCR反应体系和扩增条件,建立起了能够同步快速检测布鲁氏菌和贝纳氏柯克斯氏体的双重PCR方法,该方法具有较好的特异性、可重复性和较高的灵敏性。利用该双重PCR方法对流产牛抗凝全血、血清、流产胎儿及奶液等172份临床样品进行检测,共检测到布鲁氏菌感染阳性样品53份,贝纳氏柯克斯氏体感染阳性样品10份,混合感染阳性样品2份,阳性检出率分别为30.8%、5.8%、1.2%。初步临床应用结果表明,该方法可用来安全、同步、快速、灵敏地对布鲁氏菌和贝纳氏柯克斯氏体进行检测。 彭武丽 罗展荣 季新成 员丽娟 史茜 于学辉关键词:布鲁氏菌病 Q热