武清斌
- 作品数：12 被引量：40H指数：3
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院微循环研究所更多>>
- 发文基金：协和青年科研基金中央高校基本科研业务费专项资金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 急性脊髓损伤小鼠体内循环平滑肌祖细胞升高
- 2016年
- 目的建立两种检测外周血平滑肌祖细胞(SMPCs)的绝对计数方法,评估了方法的观察者内和观察者间差异及初步应用。方法小鼠眼眶取血样本经抗体孵育后使用"裂解/一次洗涤法"处理,流式细胞仪检测。SMPCs定义为c-kit阴性/CD140b阳性/lineage阴性/sca-1阳性。SMPCs计算方法包括"微球法"和"流式直接体积法"。分别在采血后0、24和48 h后进行检测。SCI模型使用Allen's打击装置造模,检测伤后24 h的SMPCs。结果微球法和直接体积法的观察者内可靠系数分别是0.947和0.839;观察者间可靠系数分别是0.911和0.768。SMPCs在血液样本中不稳定,静置24和48 h后丢失较多。SCI后24 h,SMPCs的数量较正常组和假手术组明显升高。结论建立了两种SMPCs绝对计数法,有较好的观察者内一致性和观察者间一致性。应用两种方法能够有效的检测到小鼠SCI后SMPCs的升高,为探讨其变化的意义提供了方法和依据。
- 苑晓晨武清斌李宏伟李炳蔚修瑞娟
- 关键词：脊髓损伤绝对计数平滑肌祖细胞流式细胞术
- 中枢神经系统周细胞表达结蛋白desmin被引量：1
- 2016年
- 目的:本研究着重探讨中枢神经系统周细胞是否表达desmin。方法:取3周龄雄性Wistar大鼠,取其大脑和脊髓组织,分离提取培养脑微血管周细胞(BMP)和脊髓微血管周细胞(SCMP)两种周细胞,用周细胞非特异性标记物神经胶质抗原2(NG2)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)双标鉴定周细胞,并用免疫荧光方法定性定量测定两种周细胞表达desmin阳性率,免疫印记分析实验定量测定两种周细胞表达desmin。结果:观察刚分离得到的脑微血管和脊髓微血管,前者在长度和密度上多于后者,培养至第3天时,观察到BMP更趋向于聚集,而SCMP则更分散。培养至第9天时,两种周细胞基本铺满了培养皿。经用周细胞非特异性标记物NG2和α-SMA双标鉴定,确定分离得到的细胞为周细胞,免疫荧光和western blot实验结果表明两种周细胞均表达desmin,且SCMP表达desmin阳性率显著多于BMP(P<0.001),SCMP表达desmin量显著多于BMP(P<0.05)。结论:中枢神经系统周细胞表达结蛋白desmin,表达量不同暗示了血脑屏障和血脊髓屏障之间存在差异。
- 武清斌苑晓晨李宏伟刘淑英修瑞娟
- 关键词：周细胞中枢神经系统DESMIN
- 大鼠脊髓微血管内皮细胞的分离培养与鉴定被引量：3
- 2013年
- 脊髓微血管内皮细胞（spinalcord microvascular endothelialcells，SCMECs）参与构成血脊髓屏障，其功能变化与多种脊髓相关疾病相关。目前分离SCMECs的文献很少。本研究拟基于分离多种原代内皮细胞的经验，建立分离纯化SCMECs的方法。
- 苑晓晨李炳蔚秦伟伟武清斌荆瀛黎李宏伟刘淑英修瑞娟
- 关键词：微血管内皮细胞血脊髓屏障相关疾病分离纯化
- 小鼠脊髓微血管周细胞的体外培养及鉴定被引量：2
- 2015年
- 目的应用周细胞培养基（PCM）分离筛选小鼠脊髓微血管周细胞（SCMP）,对其生物学功能进行评价。方法10只3周龄C57小鼠,无菌条件下取脊髓去除软脊膜,剪碎成大约1 mm×1 mm×1 mm。两次酶消化后用含20%牛血清白蛋白的DMEM离心获得微血管。用内皮细胞培养基（ECM）培养,传代2次后改用PCM培养。倒置显微镜观察细胞增殖状况。免疫细胞化学法检测血小板源性生长因子受体β（PDGFRβ）、神经元-胶质抗原2（NG2）、von Willebrand因子（v WF）和胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的表达。流式检测CD140b、CD31、CD11b和GFAP的表达。将PCM换为10%胎牛血清（FBS）的DMEM培养基,检测细胞α-SMA表达的变化。通过周细胞-内皮细胞共培养成管实验检测细胞成管能力。结果接种48 h细胞爬出,7~9 d汇合,周细胞和内皮细胞伴随状增殖。改用PCM培养后内皮细胞减少,周细胞呈优势生长。免疫细胞化学表明PDGFRβ和NG2阳性,v WF和GFAP阴性;流式结果表明细胞PDGFRβ的阳性率为95.52%±2.55%,GFAP为0.63%±0.26%,CD31为0.80%±0.26%,CD11b为1.02%±0.35%。10%胎牛血清的DMEM促进细胞分化,α-SMA表达升高。成管实验周细胞与内皮细胞共同形成管腔样结构。结论通过PCM筛选法能够成功获得纯度较高的SCMP,所获得的细胞具备明显的周细胞的形态和功能特征。
- 苑晓晨武清斌李宏伟荆瀛黎李炳蔚刘淑英修瑞娟
- 关键词：周细胞脊髓微血管细胞分离
- 阿尔茨海默病与2型糖尿病关系的研究进展被引量：6
- 2017年
- 痴呆症是糖尿病（DM）新出现的一种并发症。与普通人群相比，在2型DM（T2DM）患者中罹患痴呆症的风险增加了50％-100％。阿尔茨海默病（AD）是痴呆症最主要的形式和病因，占所有痴呆症的60％-80％。研究表明在T2DM和不断增加的AD风险中可能存在明显的相关性。
- 武清斌刘明明修瑞娟
- 关键词：2型糖尿病阿尔茨海默病血管病变
- C57小鼠急性脊髓损伤微循环功能障碍机理及治疗机制研究
- 第一部分Wistar大鼠脑和脊髓微血管周细胞的分离、培养、鉴定及其功能差异比较 目的： 分离培养并鉴定Wistar大鼠脑微血管周细胞(brain microvascular pericyte，BMP)和脊髓微血管周细...
- 武清斌
- 关键词：血脊髓屏障脊髓损伤微循环
- 小鼠脊髓损伤后周细胞促进脊髓血管新生
- 2014年
- 目的探讨脊髓损伤后周细胞对微血管的影响。方法 C57BL/6小鼠随机分为:假手术组、损伤后2、7和14 d组(S2、S7和S14),每组9只。损伤组采用改良Allen's法制作中度脊髓损伤模型。给小鼠颈静脉注入番茄凝集素(LEA),检测灌注微血管面积;用免疫荧光和免疫组化检测微血管面积和数目;用免疫荧光检测周细胞覆盖率。用缺氧条件(95%N2,5%CO2)模拟脊髓损伤的病理条件,用基质胶系统检测内皮细胞成管。结果与假手术组相比,S2组灌注血管面积、微血管面积和数目显著降低(P<0.001)。与S2组相比,S7组微血管数目和面积显著增高(P<0.05);S14组灌注血管面积、微血管数目和面积均显著增高(P<0.05,P<0.01),但平均值仍低于假手术组。与假手术组相比,S2和S7组周细胞覆盖率持续下降(P<0.001)。周细胞与内皮细胞共培养可显著增加缺氧条件下内皮细胞成管长度(P<0.01)。结论脊髓损伤后周细胞可促进脊髓血管新生。
- 荆瀛黎武清斌苑晓晨李炳蔚刘明明张晓艳刘淑英李宏伟修瑞娟
- 关键词：周细胞脊髓损伤血管新生
- 褪黑素对人体睡眠和血压的影响被引量：18
- 2013年
- 昼夜节律遵循体内的生物钟规律,调节着机体多种功能和代谢过程,如血压、睡眠周期和体温等,睡眠周期表现出明显的昼夜节律,血压的变化也遵循24小时昼夜模式。研究表明,昼夜节律异常是睡眠障碍和心血管疾病的危险诱因之一。昼夜节律的起搏点受褪黑素的调节,而褪黑素的合成和分泌也具有昼夜节律性。内源性褪黑素可以通过多种方式增强人类节律系统的功能,外源性褪黑素作为一种时相药,可以对人体昼夜节律紊乱产生调节作用。越来越多的研究发现,褪黑素与睡眠和血压的变化有紧密的联系,深入研究褪黑素在其中的作用有利于阐明该类疾病的发生机制。本文旨在就褪黑素对人体睡眠和血压的影响作一综述。
- 荆瀛黎武清斌苑晓晨修瑞娟
- 关键词：昼夜节律褪黑素睡眠血压
- 荧光显微镜观察封闭式脊髓窗内的大鼠脊髓微循环被引量：1
- 2013年
- 目的探讨应用荧光显微镜通过改进的封闭式脊髓窗,观察大鼠脊髓背侧软脊膜微循环状态的可行性及效果。方法用8周龄雄性SD大鼠,暴露T9至T11棘突,咬除T10棘突和椎板,暴露硬脊膜;在T9和T11棘突上安装固定器辅助物。用牙科丙烯酸树脂和玻璃片为原料在T10节段安装改进的封闭脊髓窗。采血并离心(2 000×g)收集红细胞,将100μL压积的红细胞用Dil荧光染料(5 mg/L)体外孵育,静脉注射入体内;用罗丹明6G(0.3 g/L)静脉注射,体内标记白细胞。大鼠脊柱用微循环观测椎体固定器进行固定。用动物活体荧光成像显微系统进行观测和记录。结果通过该系统可以观测大鼠软脊膜上微血管的形态和分布特点、血管密度;可以观测到Dil标记的红细胞在血管内的黏附和流速,观察和记录罗丹明6G标记的白细胞在血管壁的黏附滚动。结论改进式的封闭脊髓窗和微循环观测椎体固定器,可用于对大鼠软脊膜上微血管进行观察和检测。
- 苑晓晨李炳蔚武清斌荆瀛黎盛有明李宏伟刘淑英修瑞娟
- 关键词：脊髓微循环
- Toll样受体4对高糖诱导胰岛微血管内皮细胞株凋亡蛋白表达的影响被引量：1
- 2017年
- 目的:观察小鼠胰岛微血管内皮细胞(MS1)Toll样受体4(TLR4)的表达及其对高糖诱导凋亡蛋白表达的影响。方法:离体小鼠MS1分为低浓度葡萄糖(5.6mM)对照组(C组)、高浓度葡萄糖(25.0mM和35.0mM)诱导组(HG组)、TLR4抑制剂干预组(35.0mM葡萄糖+1μM CLI-095,HG+CLI组)及TLR4抑制剂对照组(5.6mM葡萄糖+1μM CLI-095,CLI组)。平行培养24h或48h后,先用CCK-8法检测C组和HG组MS1细胞活力,选定高糖干预浓度(35.0mM)及时间(48h);再分别应用免疫组化和Western Blotting检测各组MS1细胞TLR4表达水平;应用Western Blotting检测各组MS1细胞凋亡蛋白Caspase-9、Caspase-3表达水平;应用明胶酶谱分析法检测基质金属蛋白酶2(MMP2)活性变化。结果:与C组比较,HG组MS1的TLR4蛋白表达显著增加(P<0.01);凋亡蛋白Caspase-9和Caspase-3表达均显著升高(P<0.01,P<0.05);MMP2活性明显增强(P<0.05);与HG组比较,HG+CLI组Caspase-9水平均明显降低(P<0.01),Caspase-3水平仅有降低趋势,差异无统计学意义(P>0.05);TLR4的表达和MMP2活性虽有下降,但差异亦无统计学意义(P>0.05)。结论:MS1高表达TLR4可能参与高糖诱导的MS1细胞凋亡。
- 刘明明张晓艳武清斌尚飞李炳蔚李爱玲李宏伟修瑞娟
- 关键词：TOLL样受体4细胞凋亡基质金属蛋白酶
