梁晓秋
- 作品数：78 被引量：316H指数：9
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- 相关领域：医药卫生文化科学生物学更多>>
- PIG11高表达诱导HepG2细胞凋亡及其机制的初步探讨
- 2011年
- 目的利用已建立的稳定高表达PIG11蛋白的HepG2细胞株,探讨PIG11蛋白表达对HepG2细胞凋亡的影响,以及线粒体膜电位改变和Cyt C释放在凋亡过程中的作用。阐明PIG11诱导细胞凋亡的分子机制。方法 PI染色,流式检测细胞的凋亡情况。用Rh123标记,流式测定线粒体膜电位。Western Blot检测胞浆和线粒体中Cyt C的含量变化。结果流式细胞仪检测Rh123荧光强度,结果显示:pLXSN-PIG11-HepG2细胞荧光强度(5.4±0.15)低于HepG2细胞(14.7±0.56)和pLXSN-HepG2细胞(13.2±0.53)(P<0.01)。表明PIG11高表达诱导细胞凋亡过程中存在线粒体膜电位去极化。用CsA(10μmol/L)抑制各组细胞的线粒体通透性转移孔后,流式凋亡检测结果显示pLXSN-PIG11-HepG2细胞凋亡率明显降低。Western Blot检测发现存在线粒体Cyt C向胞浆释放。结论 PIG11高表达可诱导HepG2细胞凋亡,PIG11诱导细胞凋亡机制可能由线粒体膜电位改变及Cyt C向胞浆释放而介导。
- 郭彩霞王晓娟王燕梁晓秋
- 关键词：PIG11凋亡线粒体HEPG2细胞
- 胃癌组织TIN2基因突变研究被引量：3
- 2017年
- 目的 TIN2是端粒保护蛋白复合体中的一员,其在胃癌组织中表达异常。本研究检测胃癌组织中TIN2基因的突变位点,探索其在胃癌发生发展中所起的作用。方法选取南华大学附属第二医院2012-05-03-2013-05-14收治的胃癌患者组织标本50例,均为胃腺癌。提取50例胃癌组织标本中的DNA,进行PCR扩增,对TIN2基因的6号外显子进行测序,通过序列分析,找到TIN2基因的突变位点,并对其突变位点进行生物信息学的分析。结果在22%(11例)的胃癌标本中发现了TIN2基因6号外显子中两个基因突变位点,其中6%(3例)胃癌标本中TIN2基因6号外显子第90位碱基C/C突变为C/T,16%(8例)胃癌标本中TIN2基因6号外显子第241位碱基G/G突变为A/A。通过生物信息学分析,发现两者对TIN2蛋白质的功能皆有影响,但TIN2基因6号外显子中第90位碱基C/C突变为C/T比TIN2基因6号外显子中第241位碱基G/G突变为A/A对蛋白质功能的影响更大,即这个突变很有可能是有害的,发现TIN2基因的突变与胃癌患者的性别、年龄、分化程度和临床分期无关,P>0.05。结论发现了TIN2基因6号外显子中的两个突变位点,其对蛋白质的功能皆有影响。TIN2基因6号外显子中第90位碱基C/C突变为C/T为新发现的突变类型,其对蛋白质的功能影响更大。TIN2基因的突变可能在胃癌的发生发展中起一定的作用。
- 符樊胡华阳帅梁晓秋
- 关键词：胃癌突变基因
- 新抑癌基因PIG11高表达HepG2细胞株的建立被引量：4
- 2007年
- 目的构建人PIG11逆转录病毒载体,建立高表达PIG11基因的HepG2细胞,为进一步研究PIG11基因在肝癌细胞中的功能提供一个理想的试验平台。方法将已有的pcDNA3.1/NT-GFP-PIG11质粒用PCR法扩增出PIG11片段,构建含人PIG11 cDNA的重组质粒pLXSN-PIG11。重组载体经PCR鉴定和DNA测序分析。将该重组质粒用lipofectamineTM2000转染包装细胞PA317,获得pLXSN-PIG11逆转录病毒。用病毒感染HepG2细胞,获得PIG11高表达的HepG2细胞株。结果获得384 bp人PIG11基因,测序证明PIG11cDNA编码序列与Genbank中报道的一致,转染PA317细胞后用病毒上清感染HepG2细胞,经RT-PCR检测发现HepG2细胞中PIG11 mRNA表达明显升高。结论成功构建了高表达PIG11基因的HepG2细胞株,为进一步研究其生物学行为奠定了基础。
- 吴艳王晓娟刘小敏曾春亚梁晓秋
- 关键词：逆转录病毒载体HEPG2细胞株
- 端粒蛋白TRF1、TRF2和TIN2在宫颈鳞癌中的表达及意义被引量：2
- 2013年
- 目的研究端粒结合蛋白TRF1、TRF2和TIN2在宫颈鳞癌中的表达及意义。方法采用免疫组化方法检测TRF1、TRF2和TIN2蛋白在15例正常宫颈上皮和35例宫颈鳞癌组织中的表达。结果 TRF1蛋白在宫颈鳞癌中阳性表达率(40.0%)低于正常宫颈上皮组织(86.7%)(P<0.01)。TRF2蛋白在宫颈鳞癌中的表达(80.0%)高于正常宫颈上皮组织(33.3%,P<0.01)。TIN2蛋白在宫颈鳞癌中表达(74.3%)高于正常宫颈上皮组织(40.0%,P<0.01)。结论 TRF1蛋白表达降低和TRF2与TIN2蛋白表达升高在宫颈癌的发展过程中起重要作用。
- 周建斌胡华盛顺良阳帅梁晓秋
- 关键词：宫颈鳞癌
- Ku70与hTERT在胃癌组织中的表达及其意义被引量：1
- 2015年
- 目的探讨Ku70和人端粒酶逆转录酶(h TERT)蛋白表达与胃癌发生发展的关系及两者之间的联系。方法应用免疫组织化学方法检测Ku70和h TERT蛋白在10例正常胃黏膜、15例胃癌前病变黏膜和20例胃癌组织中的表达。结果 Ku70蛋白阳性表达定位于正常胃黏膜和胃癌组织的细胞核,胃癌前病变黏膜的细胞浆,其阳性表达率分别为90%、100%和80%;h TERT蛋白在正常胃黏膜几乎不表达,在胃癌前病变黏膜和胃癌组织中均定位于细胞浆,其阳性表达率分别为30%、100%和100%。胃癌组织中Ku70和h TERT蛋白的表达强度明显高于正常胃黏膜和胃癌前病变黏膜。Ku70和h TERT蛋白的表达显著相关。结论 Ku70和h TERT蛋白可能与胃癌的发生发展过程相关。
- 胡华阳帅周建斌梁晓秋
- 关键词：KU70胃癌免疫组织化学
- 端粒重复序列结合因子1蛋白在胃癌组织中的表达及其意义
- 2008年
- 目的研究端粒重复序列结合因子1(TRF1)蛋白在胃癌中的表达及其与胃癌发生发展的关系。方法用Westernblot方法检测TRF1蛋白在10例正常胃黏膜、15例胃癌前病变、20例胃癌、5例淋巴结转移胃癌组织中的表达。结果TRF1蛋白在癌前病变组、胃癌组、转移癌组比正常组表达高;胃癌组、转移癌组比癌前病变组表达高(P<0.01)。在胃癌组织中,TRF1蛋白的表达与胃癌分化程度有关,分化越差,表达越高(P<0.01)。结论TRF1蛋白可能在胃癌的发生发展中起重要作用。
- 邹媚胡华张杨肖志科刘慧敏戴文香梁晓秋
- 关键词：胃癌端粒
- 衡阳地区10384例宫颈液基细胞学检查结果分析被引量：1
- 2015年
- 目的了解衡阳地区妇女宫颈癌及癌前病变的状况,探讨沉降式液基薄层细胞涂片(LCT)检查对早期宫颈癌及癌前病变诊断的临床意义。方法对本院10 384例宫颈疾病就诊及健康体检者进行LCT检查,并对宫颈组织活检病理结果进行分析。结果 LCT阳性病例501例中有405例进行了活检,另有接触性阴道出血或不规则阴道流血而LCT阴性病例248例进行了阴道镜下活检,共计653例宫颈活检组织病理结果,其中正常或慢性炎症350例(53.60%),宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅰ级173例(26.49%),CINⅡ-Ⅲ级107例(16.39%),鳞癌18例(2.76%),腺癌5例(0.77%)。LCT阳性病变与宫颈活检组织病理检查符合率分别为:LSIL 76.67%(92/120)、HSIL 93.10%(54/58)、SCC 100%(13/13)、AGC 80%(4/5)。10 384例患者中,宫颈鳞癌、腺癌、CINⅡ-Ⅲ、CINⅠ检出率分别为0.17%、0.05%、1.03%、1.67%。结论 LCT检查是一种相对准确、可靠的宫颈癌及癌前病变的筛查方法,但仍然有一定的漏检率。
- 胡华阳帅周建斌梁晓秋
- 关键词：液基细胞学宫颈病变宫颈癌
- 三氧化二砷诱导人肝癌HepG_2细胞凋亡及细胞周期阻滞的研究被引量：7
- 2008年
- 目的研究三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)对人肝癌HepG2细胞的生长抑制作用,以及诱导细胞凋亡和对周期分布的影响。方法采用MTT法、DNA ladder检测、流式细胞术等方法检测As2O3对人肝癌HepG2细胞的生长抑制,诱导细胞凋亡以及对细胞周期分布的影响。结果MTT法显示:As2O3对HepG2细胞有明显的生长抑制作用,且具有剂量和时间依赖性。12μmol/L As2O3作用HepG2细胞24、48、72 h后,DNA ladder检测,48、72 h均出现凋亡典型的DNA ladder条带;流式细胞仪分析显示:As2O3处理HepG2细胞24、48、72 h后,凋亡率分别为(9.74±1.22)%、(21.89±2.14)%、(42.72±0.83)%,均显著高于对照组细胞的凋亡率(0.98±0.11)%(P(0.01)。同时,流式细胞仪分析显示,As2O3对HepG2细胞有明显的S期和G2期阻滞作用。结论As2O3对人肝癌HepG2细胞S期和G1期阻滞并诱导细胞凋亡可能是其抗肿瘤的机制之一。
- 王晓娟刘小敏曾春亚张杨梁晓秋
- 关键词：三氧化二砷肝癌细胞周期
- HepG2细胞中PIG11相互作用蛋白质的初步分离与鉴定被引量：1
- 2009年
- 目的探讨人肝细胞癌细胞系(HepG2)并初步鉴定候选肝癌抑癌蛋白肿瘤蛋白P53下游靶基因11号(PIG11)相互作用蛋白,确定PIG11的作用方式。方法课题组前期利用质粒pLXSN构建逆转录病毒载体,转染细胞后建立起PIG11高表达HepG2细胞株。将HepG2分为HepG2对照组,空载体HepG2组和PIG11高表达HepG2组分别培养,流式细胞术检测细胞凋亡。采用免疫共沉淀富集HepG2细胞中PIG11结合蛋白,切取PIG11结合蛋白条带,胶内酶解后进行电喷雾串联质谱得到肽序列标签,通过数据库查询蛋白。结果PIG11蛋白高表达组凋亡率显著高于对照组(P<0.01)。串联质谱后数据库查询鉴定出11个蛋白,分别是热休克蛋白家族中的HSP60,KH型剪接调节蛋白(KSRP)、脑酸溶性蛋白BASP1、蛋白水解诱导因子(PIF/DCD)、Y染色体RNA结合蛋白、碳酸酐酶、白蛋白以及骨架蛋白中的波形蛋白、α、β-微管蛋白、肌动蛋白。结论PIG11蛋白高表达对HepG2具有诱导凋亡作用;初步鉴定出11个PIG11结合蛋白,为进一步阐明PIG11蛋白的作用机制提供线索。
- 胡蓉王晓娟王燕梁晓秋
- 关键词：PIG11HEPG2免疫共沉淀电喷雾串联质谱
- Caspase-8和Bcl-2在PIG11诱导HepG2细胞凋亡中的作用被引量：4
- 2011年
- 目的:利用本实验室已建立PIG11蛋白稳定低表达的HepG2细胞株和PIG11蛋白稳定高表达HepG2细胞株,研究Caspase-8和Bcl-2在PIG11诱导HepG2细胞凋亡中的作用,进一步探讨PIG11基因表达对HepG2细胞凋亡的机制。方法:细胞培养,分组:HepG2细胞、pLXSN-PIG11-HepG2(pLXSN-PIG11转染建立PIG11蛋白高表达HepG2细胞)、pLXSN-HepG2(pLXSN空载体转染HepG2细胞)、miR-PIG11-HepG2(miRNA干扰PIG11蛋白低表达HepG2细胞)、miR-HepG2(干扰空载体HepG2细胞)。Hoechst33342染色荧光和PI染色流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况。Western blot检测Caspase-8蛋白、Bcl-2蛋白的表达情况。结果:Hoechst 33342染色荧光显微镜下pLXSN-PIG11-HepG2细胞组可见核染色质浓缩,核碎片,荧光增强,以及凋亡小体。PI染色流式细胞仪检测结果显示:HepG2细胞、miR-PIG11-HepG2细胞、miR-HepG2细胞、pLXSN-PIG11-HepG2细胞、pLXSN-HepG2细胞的凋亡率分别为5.72%±0.81%、1.34%±0.71%、5.10%±0.40%、34.83%±2.29%、5.34%±0.60%。PIG11高表达的pLXSN-PIG11-HepG2细胞组凋亡率比其它各组增高(P<0.01),PIG11低表达的miR-PIG11-HepG2细胞组凋亡率降低(P<0.01)。Western blot检测结果显示PIG11高表达的pLXSN-PIG11-HepG2细胞Caspase-8蛋白表达上调,Bcl-2蛋白表达下调(P<0.01),PIG11低表达的miR-PIG11-HepG2细胞Caspase-8蛋白的表达下调,Bcl-2蛋白表达上调(P<0.01)。结论:PIG11蛋白高表达能诱导HepG2细胞凋亡,其机制可能与Caspase-8蛋白及Bcl-2蛋白表达相关。
- 陈永春庄英帜梁晓秋王燕郭彩霞
- 关键词：PIG11CASPASE-8BCL-2凋亡HEPG2细胞
