杨芙蓉
- 作品数：11 被引量：53H指数：5
- 供职机构：中国预防医学科学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 乙型肝炎病毒表面抗原主蛋白基因转基因细胞系的建立与细胞性质的研究被引量：16
- 1991年
- 使用本研究室以前构造的双拷贝乙肝病毒重组DNA质粒pSV_2DHBR2-32经改造构成pSV_2DHBR1-32。用此质粒转化CHO-dhfr^-细胞,经克隆、选择、加压增殖建立7个高产HBs-Ag的细胞系,其中首选B43对其生物学性状研究的结果说明,未发现微生物污染,无致瘤性,遗传稳定,纯度满意,核酸杂交试验说明该细胞是整合型,每个细胞约有200个左右的S基因拷贝,转瓶培养研究B43细胞分泌HBsAg的最佳条件为转瓶容积4升,表面积1300cm^2,细胞长成单层后换维持液150ml,其后每48小时收、换液1次,在36℃每小时8转,连续收液60天左右, 每升收液最高产HBsAg为7.5mg。此细胞可用作乙肝基因工程疫苗生产的候选细胞系。
- 任贵方阮薇琴田淑芳梅雅芳阮力杨安道杨芙蓉王申王秀平朱既明
- 关键词：乙肝病毒
- 乙型肝炎表面抗原S-蛋白糖化位点序列的人工变异及其哺乳动物细胞表达产物的性状研究被引量：7
- 1997年
- 利用末端重叠ＰＣＲ法和定点突变技术，获得了去除Ｎ－连接多糖结构的乙肝表面抗原Ｓ突变基因，将乙肝表面抗原Ｓ－蛋白中结合Ｎ－连多糖结构序列Ａｓｎ－Ｘ－Ｔｈｒ中的第１４８苏氨酸的密码子ＡＣＴ，改变为编码甘氨酸的密码子ＧＧＴ。构建了该突变基因的表达载体并在ＣＨＯ细胞中表达，筛选到两株表达水平较高的细胞系。对其中的一株细胞系Ｃ４１的表达产物做了初步纯化和鉴定。纯化样品经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳分析，只含有２３ｋＤ一条蛋白带，而对照原基因ＣＨＯ细胞的表达产物则含有２３ｋＤ、２７ｋＤ和３０ｋＤ三条蛋白带，证实经人工修饰后其哺乳动物细胞表达产物不再含有糖基，纯化样品在电镜下可清楚地显示２２ｎｍ的球形颗粒。单克隆抗体反应谱分析发现，ＣＨＯ细胞表达的无糖ＨＢｓＡｇ与含糖ＨＢｓＡｇ的抗原表位存在明显差别。
- 刘文军杨芙蓉阮力任贵方朱既明
- 关键词：乙型肝炎表面抗原
- 一种可以在哺乳动物细胞中高效表达乙肝表面抗原的重组质粒
- 本发明提供一种利用CHO-dhfr阴性细胞的谷氨酰胺合成酶(GS)基因作为扩增加筛选基因构建的能表达乙肝病毒表面抗原基因的重组质粒pMSG。本发明的质粒结构中GS基因来源于CHO-dhfr阴性细胞，受SV40早期启动子调...
- 刘文军朱既明阮力杨芙蓉任贵方
- 文献传递
- 含S(主蛋白)和前S1(大蛋白)乙肝表面基因工程融合抗原的纯化工艺
- 工艺所属技术领域为生物技术和蛋白质纯化本发明建立了哺乳动物细胞CHO－dhfr－表达的含S和前S1乙肝表面融合抗原的纯化工艺流程:细胞培养原液→离子交换柱层析→疏水柱层析→分子筛柱层析,该工艺乙肝表面抗原S1和前S蛋白回...
- 李军阮力陈红王文田淑芳杨芙蓉宗芳张陵林
- 文献传递
- 乙型肝炎病毒表面抗原S和前S1融合基因转基因细胞系的建立与细胞性质的研究被引量：2
- 2000年
- 构建了 pCHBSSIG质粒 ,其特点是CMV立即早期启动子调控乙型肝炎 (乙肝 )表面抗原S +前S1融合基因在前 ,SV40早期启动子调控GS扩增基因在后 ,此质粒转化到CHO dhfr-细胞中 ,经克隆加MSX及MTX筛选、扩增 ,建立了 7个高效表达乙肝表面抗原S及前S1融合蛋白细胞系GdSS1,并检测了其中GdSS1 18细胞系的生物学特性 ,结果表明 :未发现微生物污染 ,无致瘤性 ,遗传稳定 ,电镜下可观察到 2 2nm的颗粒 ,纯化后的蛋白在SDS PAGE及Westernblot中显示出特异性的 2 7kD、30kD乙肝表面抗原S和前S1的融合蛋白带。主蛋白的反向被动血凝(RPHA)滴度为 1∶2 5 6～ 1∶5 12 ,前S1蛋白的ELISA滴度为 1∶12 8。
- 田淑芳刘文军杨芙蓉宗芳李军阮薇琴陈红王文王秀平张陵林阮力
- 乙型肝炎表面S+前S1融合基因转化CHO-dhfr^-的细胞染色体变化及致瘤性被引量：5
- 2001年
- 目的 了解乙型肝炎病毒表面S +前S1融合重组DNA(乙型肝炎重组DNA)整合到中国地鼠卵巢细胞二氢叶酸还原酶阴性突变株细胞 (CHOdhfr- )染色体的变化及致瘤性。方法 应用分子克隆技术构建含HBsAg的表面抗原S +前S1基因的质粒经转染、克隆、加压 (MTX和MSX)筛选出高效表达乙型肝炎表面S +S1融合抗原的转基因细胞株 (GdSS1 18)进行染色体制片 ,同时将制备的细胞、细胞DNA和细胞匀浆皮下接种裸鼠观察 3周。结果 整合了外源乙型肝炎重组DNA的转基因细胞系 (GdSS1 18)不同的传代均发生染色体结构畸变 ,畸变率为 11% ,5 6%及 2 9% ,而未整合外源乙型肝炎重组DNA的对照CHOdhfr- 细胞为 6% ,二者的染色体众数无明显变化 ,均为 2 0条。整合与未整合外源重组DNA的细胞接种裸鼠以后观察 3周均无肿瘤生长。结论 整合有外源乙型肝炎重组DNA的细胞株 (GdSS1 18)其染色体结构畸变率高于未整合的CHO dhfr- 对照细胞 ,但二者的染色体众数仍为 2 0条 ;不同代数GdSS1 18细胞产物接种裸鼠后未见肿瘤的生长。
- 田淑芳阮薇琴王秀平张陵林杨芙蓉宗芳阮力
- 关键词：乙型肝炎表面抗原仓鼠致瘤性
- 高效表达乙肝表面S(主蛋白)和前S1(大蛋白)融合抗原的转基因哺乳动物细胞系
- 在乙肝表面抗原PreS1(21－47)基因片段与S基因的第223位相连的基础上在其下游引入RNA加聚A信号AATAA、乙肝病毒增强子1(En1)和增强子2(En2),及突变的x基因(mX)构成pCHBSS1G质粒。将pC...
- 田淑芳阮力刘文军杨芙蓉宗芳李军陈红王文阮薇琴王秀平
- 文献传递
- 利用谷氨酰胺合成酶基因(GS)作扩增标记在CHO细胞中高效表达乙型肝炎表面抗原基因被引量：7
- 1997年
- 利用谷氨酰胺合成酶基因（ＧＳ）［１］作扩增选择标记，结合ＣＭＶ－ＩＥ启动子，在ＣＨＯ细胞中高效表达乙型肝炎表面抗原基因。初筛克隆表达水平ＲＰＨＡ检测为１：６４，经过谷氨酰胺合成酶基因的抑制剂ＭＳＸ的两轮基因扩增，ＨＢｓＡｇ的表达水平ＲＰＨＡ在１：２５６以上。方瓶静置培养收液，ＲＩＡ检测ＨＢｓＡｇ最高产量为９．５μｇ／毫升。表达水平较以前利用ｄｈｆｒ基因扩增选择系统所得到的高表达细胞系Ｂ４３高一倍以上。利用ＧＳ基因扩增选择系统可以在哺乳动物细胞中高水平表达外源基因。
- 刘文军杨芙蓉阮力任贵方朱既明
- 关键词：谷氨酰胺合成酶基因乙型肝炎表面抗原
- 三种病毒启动子在中国地鼠卵巢(CHO)细胞中表达活性的比较被引量：17
- 1997年
- 三种病毒启动子在中国地鼠卵巢（ＣＨＯ）细胞中表达活性的比较刘文军杨芙蓉阮力任贵方朱既明（中国预防医学科学院病毒学研究所北京１０００５２）关键词ＣＨＯｄｈｆｒ－细胞，启动子，瞬时表达，ＨＢｓＡｇ基因，ＣＡＴ基因目前大多数哺乳动物细胞表达载体中的启动子－...
- 刘文军杨芙蓉阮力任贵方朱既明
- 关键词：表面抗原CHO启动子
- 高效表达乙肝表面抗原的转基因细胞系
- 本发明提供一种利用CHO dhfr<Sup>-</Sup>细胞的谷氨酰胺合成酶(GS)基因作为扩增基因组建的表达乙肝病毒表面抗原S基因的重组质粒pMSG和含有该质粒并能高效分泌乙肝病毒表面抗原S蛋白的哺乳动物细胞系G4。...
- 刘文军朱既明阮力杨芙蓉任贵方
- 文献传递
