杨孙孝
- 作品数：5 被引量：16H指数：2
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- 相关领域：生物学农业科学环境科学与工程更多>>
- 鲈鱼酰基辅酶A结合蛋白Acbp基因cDNA的克隆和诱导表达
- 2011年
- 酰基辅酶A结合蛋白(acyl-CoA-binding protein,ACBP)对长链脂酰基辅酶A(long-chainfatty acyl-CoA esters,LCACoA)有很高的亲和力,因而对LCACoA在细胞内的运输和利用过程起重要的作用。本文采用RACE技术从鲈鱼肝脏中克隆了Acbp基因的全长cDNA序列,该基因全长cDNA 679 bp,5'端和3'端的非翻译区分别为83 bp和326 bp,开放阅读框为270 bp。推测编码89个氨基酸,理论等电点为5.44,分子量为10.14 kDa。鲈鱼Acbp与青鳉鱼、银鳕鱼、大西洋鲑和人的同源性分别为87%、84%、78%和68%。用RT-PCR和实时定量PCR检测鲈鱼肌肉、心脏、眼、大脑、消化道、肾脏、脂肪组织、脾脏、鳃和肝脏等10种组织的Acbp基因的表达情况,结果表明,在肾脏和肝脏的表达量高,肌肉、眼睛和大脑中表达低。定量PCR检测表明鲈鱼肝脏Acbp的表达在饥饿时明显下降,胰岛素上调其表达,葡萄糖对其表达则没有影响。
- 钱云霞杨孙孝童丽娟宋娟娟钱伦
- 关键词：鲈鱼克隆
- 鲈PPARγ基因的克隆、组织表达及其抗体制备被引量：6
- 2010年
- 根据GenBank上其他物种的PPARγ基因序列设计兼并引物,从鲈肝脏cDNA中扩增得到鲈PPARγ基因cDNA序列1588bp,分析表明该基因的开放阅读框为1569bp,编码522个氨基酸,理论等电点6.06,分子量59.02ku。将鲈PPARγ氨基酸序列比对后发现与欧洲鲈同源性最高,为93.1%;与金头鲷的同源性为92.3%,与人同源性也达到为61.8%。用RT-PCR分析该基因组织表达模式,结果表明,鲈PPARγ主要分布于肝脏、鳃和脂肪组织。将鲈PPARγ开放阅读框1569bp序列克隆至原核表达载体pET-28a(+)构成pET-28a-PPARγ1569重组体,并转化大肠杆菌BL21(DE3),以终浓度1mmol/L的IPTG对其进行诱导表达4h,SDS-PAGE电泳分析表明,pET-28a-PPARγ1569菌株在66ku处有1条特异的蛋白带,Western-blotting检测表明该蛋白为鲈PPARγ融合蛋白。用镍离子亲和柱纯化的鲈PPARγ融合蛋白免疫小鼠得到其多克隆抗体。用间接ELISA法检测鲈PPARγ抗体的抗体效价约为1∶16000。实验结果为进一步研究鲈PPARγ蛋白的生物学特性及功能奠定了基础。
- 钱云霞杨孙孝梁洪钱伦钱凯先
- 关键词：抗体
- 台风对三疣梭子蟹养殖池塘生态系统的损害和修复
- 钱云霞张德民顾晓英孙群燕钱伦杨孙孝
- 通过研究台风暴雨前后不同时间阶段三疣梭子蟹养殖池塘水体的温度、盐度、pH、COD、氨氮等环境理化因子的变化规律;微生物群落及浮游植物群落,浮游动物群落等其他生物因子变化规律,以及三疣梭子蟹对环境理化因子和其他生物群落的变...
- 关键词：
- 关键词：养殖生态系统
- 低盐度可诱导鲈鱼胞浆型PEPCK基因表达被引量：10
- 2010年
- 磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)催化草酰乙酸生成磷酸烯醇式丙酮酸,是糖异生途径的第1个限速酶.本研究用SMARTRACE技术从鲈鱼肝脏中分离克隆了PEPCK基因的全长cDNA序列.该基因全长2215bp,包含1个123bp的5′非翻译区和217bp的3′非翻译区,开放阅读框为1875bp,编码1个由624个氨基酸组成的蛋白质,该蛋白理论分子量为69.1kD,等电点为5.87.氨基酸序列分析表明,与其它动物的胞浆型PEPCK相似性很高,与黑鲷为94.2%,与大西洋鲑为86.4%,与人为75.9%,而与该鱼线粒体型PEPCK氨基酸同源性只有70.6%.系统发育分析显示,该蛋白首先与其它动物的cPEPCK聚成一支,然后再与鱼类的mPEPCK成簇,认为该PEPCK属于胞浆型.同时用RT-PCR分析了PEPCK基因在10个组织中的表达,结果表明只有在肝脏、消化道和肾脏有较高的表达.将鲈鱼从盐度为25的海水转入盐度为12的海水48h后,肝脏和肾脏的PEPCK基因表达有增加.实验结果表明,本实验克隆的为鲈鱼胞浆型PEPCK,低盐度可诱导其表达.
- 钱云霞杨孙孝童丽娟宋娟娟钱伦
- 关键词：磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶鲈鱼克隆低盐度
- 鲈鱼过氧化物酶体增殖作为海洋污染的生物标记物研究
- 钱云霞顾晓英童丽娟方雯钱伦杨孙孝
- 建立早期灵敏的生物标记物(biomarker)是海洋环境污染和环境毒理的重要研究方向.鲈鱼(Lateolabrax japonicus C&V)是中国沿海主要的养殖鱼类,在克隆鲈鱼过氧化物酶体增殖剂激活受体PPARα、β...
- 关键词：
- 关键词：生物标记物基因表达
