杜晓娟
- 作品数：12 被引量：6H指数：2
- 供职机构：北京大学基础医学院细胞生物学系更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金面向21世纪教育振兴行动计划“十一五”国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 一种肝癌细胞系及其应用
- 本发明公开了一种肝癌细胞系及其应用。该肝癌细胞系为人肝癌细胞株Hep-12CGMCC №.3204。人肝癌细胞株Hep-12 CGMCC №.3204和人肝癌细胞株Hep-11CGMCC №.3203可组成一种用于研究肝...
- 邢宝才王觎许小兰杜晓娟柯杨
- 文献传递
- 用于制备多克隆抗体的多肽及其应用
- 本发明公开了一种用于制备多克隆抗体的多肽及其应用。用于制备多克隆抗体的多肽包括3个多肽，多肽1、多肽2和多肽3，所述多肽1的氨基酸序列为序列表中的序列5，所述多肽2的氨基酸序列为序列表中的序列6，所述多肽3的氨基酸序列为...
- 杜晓娟柯杨郑宗方韩巍
- 文献传递
- 用MAPs制备新肿瘤相关基因1 A6/DRIM的多克隆抗体被引量：3
- 2004年
- 目的 :获得 1A6 /DRIM的N端特异性抗体并对其在细胞内的定位进行分析。方法 :针对 1A6 /DRIM的N端多肽用多通道同步固相全自动合成系统合成 ,以无免疫原性的赖氨酸结构为核心偶联 ,将此多聚抗原肽 (mutipleantigenicpeptides,MAPs)免疫新西兰大白兔 ,从免疫兔血清中获得 1A6 /DRIM的多克隆抗体。结果 :用WesternBlot技术证明了 1A6 /DRIM的N端抗体 ,与C端特异性单克隆抗体识别相同的 1A6 /DRIM基因表达的 31 0 0 0 0蛋白条带 ,经过WesternBlot和免疫荧光的方法初步证实 1A6 /DRIM在多种胃癌细胞系、乳腺癌细胞系以及肝癌细胞系中表达 ,免疫荧光显示 1A6 /DRIM主要定位在细胞核内。结论 :对于用谷胱苷肽巯基转移酶 (Glutathion S transferase ,GST)融合蛋白方法不能诱导表达的蛋白 ,可利用合成MAPs制备抗原的方法获得抗体。本研究用此方法制备的抗体特异性识别 1A6
- 黄莹莹武晓楠杜晓娟宁涛李宁朱军柯杨
- 关键词：MAPS肿瘤基因多克隆抗体
- KIAA0649多克隆抗体的制备及其细胞内定位被引量：1
- 2009年
- 目的:制备抗KIAA0649多克隆抗体并鉴定抗体的特异性,同时初步鉴定KIAA0649蛋白在细胞内的定位及其功能结构域。方法:通过TMHMM和DNAstar等软件对KIAA0649的蛋白质序列进行分析,选取了3段序列合成多肽,将3段多肽混合后对新西兰兔进行免疫,通过酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immuno-sorbnent assay,ELISA)测定血清中抗多肽的滴度,当抗血清的滴度达到1∶105(体积比)时取血清,通过免疫亲和层析柱对抗体进行纯化。在U2OS细胞中表达Flag-KIAA0649或通过小干扰RNA沉默内源的KIAA0649,提取细胞蛋白,电泳后转膜,通过Western blot分析上述制备的多克隆抗体的特异性;将表达Flag-KIAA0649的细胞在玻片上固定,用抗Flag抗体和抗KIAA0649抗体进行双色免疫荧光分析,通过免疫荧光对KIAA0649抗体进行鉴定。利用PCR克隆构建Flag-KIAA0649全长表达质粒和系列Flag-KIAA0649缺失突变体,转染细胞后通过免疫荧光对KIAA0649在细胞内的定位进行研究。结果:得到的纯化KIAA0649多克隆抗体特异性地识别内源及外源KIAA0649蛋白,可用于免疫荧光和Western blot分析;全长KIAA0649蛋白在细胞核内显示特定的分布方式;KIAA0649的缺失突变体中,含有PENF motif的突变体与全长KIAA0649蛋白在细胞核内的分布形式一致,推测该结构域可能为KIAA0649的功能结构域。结论:通过上述方法制备的KIAA0649多克隆抗体具有较高的特异性,可应用于KIAA0649的功能研究,KIAA0649在细胞内定位的研究对于阐明KIAA0649的功能机制具有重要意义。
- 郑宗方韩巍何其华柯杨杜晓娟
- 关键词：原癌基因肽类抗体生成
- 一种抑制1A6/DRIM基因表达的小干扰RNA及其作用位点
- 本发明公开了一种抑制1A6/DRIM基因表达的小干扰RNA及其作用位点。小干扰RNA抑制1A6/DRIM基因表达的一个作用位点，是双链寡核苷酸序列，其自5′→3′方向的链具有序列表中序列1的核苷酸序列。抑制1A6/DRI...
- 柯杨杜晓娟吕文清宁涛赵红李宁
- 文献传递
- 一种抑制1A6/DRIM基因表达的小干扰RNA及其作用位点
- 本发明公开了一种抑制1A6/DRIM基因表达的小干扰RNA及其作用位点。小干扰RNA抑制1A6/DRIM基因表达的一个作用位点，是双链寡核苷酸序列，其自5′→3′方向的链具有序列表中序列1的核苷酸序列。抑制1A6/DRI...
- 柯杨杜晓娟吕文清宁涛赵红李宁
- 文献传递
- 人UTP14a蛋白表达抑制剂在制备细胞增殖抑制剂中的应用
- 本发明公开了人UTP14a蛋白表达抑制剂在制备细胞增殖抑制剂中的应用。p53蛋白通过激活或抑制下游基因的表达，引起细胞周期停滞、DNA的损伤后修复和细胞凋亡等。本发明发现人UTP14a蛋白的表达下调可引起p53蛋白水平的...
- 杜晓娟柯杨胡乐林
- hUTP14a在非小细胞肺癌组织中的表达被引量：2
- 2019年
- 目的:hUTP14a通过促进p53和Rb降解以及增强c-Myc致癌活性促进肿瘤的发生,且在人肝癌和结直肠癌组织中表达升高。本研究检测hUTP14a在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织中的表达,并分析hUTP14a的表达水平与NSCLC患者临床特征的关系。方法:收集2003年5月至2006年4月在北京大学第三医院接受手术治疗并经过组织病理学确诊的123例NSCLC患者的组织蜡块标本(鳞状细胞癌53例,腺癌70例),采用免疫组织化学染色方法分析癌组织及其邻近癌旁非肿瘤组织中hUTP14a的表达水平,应用SPSS 17. 0软件的χ2检验,以患者的性别、年龄、组织类型、肿瘤大小、分化程度以及临床分期等临床病理特征进行分组,对组间肺癌组织中hUTP14a的表达率进行比较。结果:hUTP14a在肺癌组织中的阳性表达率为37. 4%(46/123),在癌旁组织中的阳性表达率为0(0/123),在肺癌组织中的表达率显著高于癌旁非肿瘤组织(P <0. 001); hUTP14a在肺腺癌中的表达率为48. 6%(34/70),在鳞状细胞癌中的表达率为22. 6%(12/53),均显著高于相应的癌旁组织[0 (0/70),0 (0/53)]; hUTP14a在肺腺癌中的表达率显著高于在鳞状细胞癌中的表达率(48. 6%vs. 22. 6%,χ2=8. 66,P=0. 03)。进一步分析肺鳞状细胞癌、腺癌与各临床病理特征之间的关系发现,hUTP14a在病理分期(p TNM)晚期的肺鳞状细胞癌患者肿瘤组织中的表达率显著高于p TNM早期的鳞状细胞癌患者,而与肺腺癌的p TNM分期没有显著关联性,未见hUTP14a表达与肺癌的其他临床病理特征存在关联。结论:hUTP14a在肺癌组织中特异性表达升高,而且与肺鳞状细胞癌的pTNM分期具有关联性,提示hUTP14a有可能成为早期筛查诊断NSCLC的候选标志物。
- 张春凤刘云陆敏杜晓娟
- 关键词：非小细胞肺癌免疫组织化学鳞状细胞癌腺癌
- RT-PCR检测HUTP14A mRNA时排除假基因HUTP14C干扰的方法
- 2019年
- 人类U3蛋白14C基因(HUTP14C)是人类U3蛋白14A基因(HUTP14A)的假基因。两者转录本序列同源性高达95%。常规RT-qPCR技术在检测HUTP14A mRNA丰度时,HUTP14C的存在会影响检测结果。本研究旨在建立检测HUTP14A mRNA时排除HUTP14C干扰的RT-PCR方法。本研究设计出能分别从多种肿瘤细胞DNA和RNA中特异性扩增HUTP14A和HUTP14C的引物,避免假基因HUTP14C对其同源基因HUTP14A检测的干扰。在检测细胞系HUTP14A mRNA时,通过DNaseⅠ消除RNA中污染的HUTP14C DNA,用靶向HUTP14C 3'-UTR的siRNA沉默HUTP14C mRNA后,再用RT-PCR检测HUTP14A mRNA丰度,使结果更加准确。在18对肝癌及癌旁组织中,利用特异性引物进行RT-PCR检测,HUTP14A和HUTP14C mRNA的表达略高于癌旁组织。本研究提示,针对有假基因存在的功能基因,对其mRNA丰度进行检测时,在提取细胞或组织总RNA后,用DNaseⅠ处理,再用RNA直接进行PCR扩增,排除DNA污染后,再进行RT-PCR或RT-qPCR扩增。大多假基因具有较长的3'-UTR区,在该区域设计siRNA特异性沉默假基因的mRNA后,用RT-qPCR检测功能基因的mRNA丰度,可以排除假基因mRNA的影响。在病理组织中检测功能基因的mRNA丰度时,可以根据假基因和其功能基因的序列差异设计出特异扩增功能基因的引物,从假基因的3'-UTR区设计特异扩增假基因的引物,通过RT-qPCR技术分别检测二者的mRNA。
- 许阁阁刘小锋张春凤杜晓娟
- 关键词：假基因RT-QPCR
- 一种肝癌细胞系及其应用
- 本发明公开了一种肝癌细胞系及其应用。该肝癌细胞系为人肝癌细胞株Hep-12 CGMCC No.3204。人肝癌细胞株Hep-12 CGMCC No.3204和人肝癌细胞株Hep-11 CGMCC No.3203可组成一种...
- 邢宝才王觎许小兰杜晓娟柯杨
