李升锦
- 作品数：57 被引量：207H指数：8
- 供职机构：重庆医科大学附属第二医院更多>>
- 发文基金：重庆市自然科学基金国家自然科学基金重庆市教育委员会科学技术研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学文化科学更多>>
- 人MUC5AC基因启动子荧光素酶报告基因载体的构建及其转录活性分析(英文)被引量：6
- 2010年
- 目的:克隆人黏蛋白/黏液素5AC(MUC5AC)基因启动子并构建该启动子的荧光素酶报告系统,探讨该启动子的活性及转录靶向性。方法:运用Vector NT1软件包对MUC5AC基因5′端1 348 bp进行启动子特征分析;以人A549细胞基因组DNA为模板分离出人MUC5AC基因5′端非翻译区大小为1 348 bp的片段并进行测序鉴定,再以扩增产物为模板对启动子进行5′端删除分析,分别扩增737 bp(-689/+48),372 bp(-324/+48),112 bp(-64/+48)的片段,与荧光素酶报告基因载体重组构建,通过双荧光素酶活性进行转录活性分析。应用定点突变技术,在重组质粒的基础上建立MUC5AC启动子区SP-l结合位点和核因子(NF)-κB结合位点单独突变体,并测定中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)诱导的转染细胞荧光素酶的相对活性。结果:序列分析发现人MUC5AC基因5′端1 348 bp的区域内存在多个顺式作用元件,成功构建了4个不同长度的MUC5AC启动子报告基因载体。双荧光素酶活性分析372 bp片段为有活性的最小片段。NE可诱导含有MUC5AC启动子区NF-кB结合位点单独突变体(pGL3E-MUC5AC-NF-кB-MU)荧光素酶相对光强度增加,而NE不能诱导SP-l结合位点单独突变体(pGL3E-MUC5AC-SP-1-MU)荧光素酶表达增加。结论:上述载体的成功构建及序列分析为进一步研究MUC5AC基因的启动子活性及基因表达调控奠定了基础。MUC5AC 5′上游序列中-324/-64位点存在参与NE诱导MUC5AC基因表达的重要调控元件,位于此区域的顺式作用元件SP-1位点在NE诱导MUC5AC基因表达机制中起重要作用。
- 李升锦周向东
- 关键词：启动子基因序列分析
- 呼吸道黏蛋白5AC基因转录表达的顺式调控元件分析被引量：1
- 2007年
- 目的:探讨呼吸道黏蛋白(mucin,MUC)5AC基因5′上游序列顺式调控元件在中性粒细胞弹力酶(neutrophil elastase,NE)诱导MUC5AC基因转录表达的调控机制。方法:应用DNA重组技术,构建含萤光素酶报告基因和MUC5AC启动子不同长度片段的嵌合质粒。采用定点突变技术,在嵌合质粒的基础上构建MUC5AC启动子区特殊蛋白(specificity protein)-1和核因子(nuclear factor,NF)-κB结合位点单独突变体,并测定NE刺激的转染细胞荧光素酶相对活性。结果:成功构建了4种含有不同长度MUC5AC基因启动子序列的荧光素酶报告基因质粒。含有启动子序列-1330bp、-689bp、-324bp的嵌合质粒荧光素酶相对光强度较对照组均显著增加,而含有启动子序列-64bp的嵌合质粒荧光素酶相对光强度与对照组相比差异无统计学意义。NE可诱导含有MUC5AC启动子区NF-кB结合位点单独突变体(pGL3E-MUC5AC-NF-кB-MU)荧光素酶相对光强度增加,而NE不能诱导Sp-l结合位点单独突变体(pGL3E-MUC5AC-SP-1-MU)荧光素酶表达增加。结论:MUC5AC5′上游序列中-324^-64位点存在参与NE诱导MUC5AC基因表达的重要调控元件,位于此区域的顺式作用元件Sp-1位点在NE诱导MUC5AC基因表达机制中起重要作用,该位点可能作为靶向性基因治疗的关键调控元件。
- 李升锦周向东
- 关键词：黏蛋白5AC
- 结核分枝杆菌EIS基因抑制人肺腺癌A549细胞自噬被引量：1
- 2013年
- 目的构建结核分枝杆菌EIS基因表达质粒,探讨其对人肺腺癌A549细胞自噬的影响。方法采用PCR技术扩增EIS基因片段并插入空载质粒pcDNA3.1-3flag中,双酶切、测序鉴定克隆质粒的正确性;将重组质粒与对照空载质粒分别与自噬体荧光表达质粒GFP-LC3共转染细胞并以自噬诱导剂雷帕霉素处理,荧光显微镜下观察自噬荧光并计数,Western blot检测EIS蛋白及自噬蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ的表达水平。结果成功构建EIS基因重组表达质粒PcDNA3.1-EIS-3flag,该质粒共转染细胞组自噬荧光小点较对照组明显减少(P<0.05),重组质粒表达42 ku看到蛋白并可抑制自噬蛋白表达水平。结论结核分枝杆菌EIS基因可抑制A549细胞自噬的形成,其抑制作用与结核分枝杆菌持留性相关。
- 易敏周向东李升锦陈维贤
- 关键词：结核分枝杆菌自噬
- 结核性胸液淋巴细胞行为的单细胞定量研究被引量：2
- 2004年
- 目的 :为探讨结核性胸液淋巴细胞行为的特点及在病理过程中的意义。方法 :采用单细胞微管吸吮技术 ,分别检测正常人外周血淋巴细胞、结核性胸膜炎患者外周血淋巴细胞、胸液中淋巴细胞与肺血管内皮细胞的粘附特点。结果 :结核性胸膜炎患者外周血淋巴细胞的粘附性 (2 .83± 0 .4 3Pa)较正常人 (1.2 1± 0 .2 5Pa)明显增强 ,但结核性胸液中淋巴细胞的粘附性(1.6 7± 0 .39Pa)却与正常人无明显差别。结论 :结核性胸膜炎患者外周血淋巴细胞处刺激激活状态 ,其粘附性升高有利于贴壁向血管外游走进而向胸膜腔渗出。结核性胸液中淋巴细胞粘附性呈现正常水平可能系由于胸液中高浓度游离型上皮来源的粘附分子将其表面表达的粘附分子饱和的缘故。此现象提示胸液中的淋巴细胞 ,不易回吸收 ,其去除多以凋亡方式 ,最好籍助外力清除 (胸穿抽液 )。
- 周向东李升锦兰箭
- 关键词：结核性胸膜炎淋巴细胞细胞行为
- 呼吸道组织振荡技术对气道滞留物清除的影响被引量：14
- 2002年
- 目的 设计、制作可产生气道振荡的小型装置 ,并在体检测其对气道滞留物消除的影响。方法 利用空气动力学原理 ,通过调节呼气附加装置出气口角度、大小及盖口钢珠重量等方法 ,控制装置的频响范围 ,并应用于人体测试 ,呼吸道主要部位放置压力感受器 ,傅立叶分析方法分析共振频率和振幅。采用同位素标记气溶胶吸入后γ照像的方法 ,观察该装置对气道滞留物消除过程的影响。结果 该装置自身的频响范围为每秒 10～ 2 0次 ,应用于人体测得呼吸道从口咽部至肺叶支气管开口处的共振频率为每秒 13～ 14次 ,呼气时气道压力为 18～ 2 3cmH2 O ,压力振荡幅度为 1～ 2 .3cmH2 O。使用该装置可明显缩短气道内放射性气溶胶的半数消除时间。结论 该小型呼气附加装置的使用 ,可增加气道壁的震荡 ,改善气流特点 ,促进气道滞留物的消除 ,可望成为慢性阻塞性肺疾患 (COPD)气道粘液高分泌患者方便。
- 周向东李升锦杜先智
- 关键词：咳痰
- CT引导下肺内结节性病灶穿刺活检术的应用价值被引量：8
- 2002年
- 目的 探讨经皮肺穿刺在诊断肺癌时的价值以及将诊断方法推向治疗应用。方法 回顾性分析接受肺穿刺的 42例临床病例 ,并结合文献复习 ;诊断性穿刺在CT定位下作活检 ,对 7例周边型肺癌行瘤体内注射顺铂治疗。结果 42例肺内结节性病灶病人在CT导向下作经皮肺穿刺活检术 ,2例因取材组织少致活检失败 ,40例穿刺成功 ,成功率为 95 2 % ,其中恶性病变 3 4例 ,良性病变 6例 ,并经手术和随访证实 ;肺穿刺活检准确率 80 9%。穿刺后发生气胸 3例 ,咯血 2例 ,肺内出血 1例。瘤体内药物注射疗效优于单纯化疗。结论 CT扫描图像清晰 ,病灶定位准确 ,因此CT导向经皮肺活检术安全、准确、成功率高 ,在肺内结节性病变的诊断中有重要作用。经皮肺穿刺瘤体内药物注射被视为一种新的介入治疗途径 。
- 李升锦梅同华
- 关键词：CT引导穿刺活检术
- 结核杆菌eis基因的克隆及其在耻垢分枝杆菌中的表达被引量：7
- 2010年
- 目的:构建结核分枝杆菌eis基因的穿梭表达载体,鉴定其在重组耻垢分枝杆菌中的生物活性。方法:采用PCR技术克隆结核分枝杆菌eis基因,构建大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达载体pMVe-is,经酶切和测序鉴定其正确性,用电穿孔法将重组质粒转化至耻垢分枝杆菌mc2155中,采用SDS-PAGE和Western blot检测eis基因在耻垢分枝杆菌中的表达。结果:成功构建结核杆菌eis基因穿梭表达载体pMV-eis;生长曲线说明重组质粒不会影响耻垢分枝杆菌的体外生长;SDS-PAGE和Western blot检测证实eis在耻垢分枝杆菌中可表达出相对分子量约42kDa的Eis蛋白。结论:成功构建了eis基因穿梭表达质粒pMV-eis,且该重组质粒在耻垢分枝杆菌中具有生物活性,为下一步研究表达产物Eis的功能奠定了一定基础。
- 何子纯李升锦
- 关键词：耻垢分枝杆菌
- 健择与异环磷酰胺两方案治疗晚期非小细胞肺癌的对比研究被引量：4
- 2002年
- 王导新蒋幼凡杜先智李升锦
- 关键词：晚期非小细胞肺癌健择异环磷酰胺药物治疗
- 物理医学疗法对气道黏液高分泌的治疗作用被引量：5
- 2005年
- 李升锦周向东
- 关键词：气道黏液COPD支气管哮喘
- 髓样分化因子88抑制剂ST2825影响重组耻垢分枝杆菌感染的THP-1细胞炎性分泌功能被引量：1
- 2014年
- 目的通过观察髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,myd88)抑制剂ST2825对重组耻垢分枝杆菌感染的THP-1细胞的炎性分泌功能的抑制,来探讨髓样分化因子88在分枝杆菌促巨噬细胞分泌炎性因子功能中的作用。方法使用Myd88的抑制剂ST2825干预重组耻垢杆菌感染的THP-1细胞为实验模型,分为三组:实验组(THP-1细胞+重组耻垢分枝杆菌+ST2825)、对照组(THP-1细胞+重组耻垢分枝杆菌)、空白组(THP-1细胞),用ELISA法检测三组TNF-α、IL-12和IL-6的分泌情况。结果实验组的TNF-α、IL-12和IL-6的量较对照组显著减少,其两者P值<0.05,差异具有统计学意义。结论髓样分化因子88抑制剂ST2825可抑制THP-1细胞的炎性分泌功能。
- 胡少婷黄秦李升锦
- 关键词：髓样分化因子88重组耻垢分枝杆菌
